1. 山羊黏多醣基因檢測
長榮大學生物科技學系
葉家豪
實習單位:行政院農業委員會畜產試驗所－育種組
指導老師: 林秀蓮導師、陳若菁老師
Abstract Experimental results
萃取羊肉組織內含有G6S(黏多醣症)基因。利用限 M 一 二 三 四 五 六 七 八 九 十 α β M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
制酶(AluI)將其DNA切成數條不同片段，最後以
EtBr染色、觀察。 500 bp
Brief introduction
山羊黏多醣症(Mucopolysaccharidosis)第三型，俗稱 100 bp 96 bp
G6S(N-acetyglucosamine-6-sulphatase)，是為隱性基 50 bp
因缺陷。
目前台灣羊肉產業發展蓬勃，而台灣主要肉羊品種
為努比亞山羊與台灣山羊之雜交改良品種。國際上
表示: (a)
正常型基因為TG(only 96bp)、雜合型GC(30bp、 一 二三 四五 六 七八九 十 M α β 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
66bp、96bp)、有病型G6S(30bp&66bp)。
因此需要利用限制酶AluI 來分辨羊肉是否帶有G6S
基因。
Experimental Materials and Methods
流程一 96 bp
(萃取羊肉)
拿出數管乾淨eppendorf 編號。利用滅菌剪刀、
鑷子將羊肉組織放置有秤藥皿的電子秤台上，
剪成細小碎肉。 (b)
重複使用的剪刀、鑷子需以95%EtOH消毒，並
以乾淨紙巾擦拭，最後以滅菌之塑膠磨杵將羊 使用Marker為50-500 bp，圖(a)無加入限制酶；圖(b)加
肉導碎(偏白色)。 入限制酶Alu1 。以橘黃色圓圈標記的是sample(三)及
sample(五)，可發現皆無DNA band (條帶)呈現。
以紅色圓圈表示的sample(6)及sample (10)，經限制酶
切割後呈現三條DNA band (30bp/66bp/96bp)，但不顯
經過各種試劑的混合、以1500rpm離心以及適當
著。
溫度的反應。可發現管底底端有白色塊狀DNA
圖中α 、β為對照組 :已知對照組α 為TG(正常型)； β
，經數分鐘陰乾後加入TE buffer溶解。(需保存
是GC(雜合型)，對照組α多了一條DNA fragment；對
於4℃環境中)
照組β在圖(a)以及圖(b)中只有兩條DNA band，但位置
流程二 不同。
(準備22管eppendorf 編號)
單 試劑 體積 Total
位
:
Distilled water 10.6 243.8 Conclusion
10× Buffer 1.8 41.4
μl dNTPs 1.0 23.0
A. 沒有結果的sample(三)及sample(五)應該沒有吸取到
primer G6S_ F 1.0 23.0 (足量)的DNA，或是萃取之前沒有以vortex混勻。
primer G6S_ R 1.0 23.0 B. 只有sample(6)及sample(10) 是雜合型(GC)。其餘
Super thermo Taq 0.1 2.3
DNA template 1.0 (最後加) 23.0
smaple表示為正常型(TG)。
C. 以「白色」圈圈表示對照組出現雜訊，或許是在混合
流程三 以及添加試劑的過程中受到汙染。
(加入限制酶)
單 試劑 體積 Total D. 實驗結果有白色彗尾現象是因為DNA濃度較高。
位
:
Distilled water 2.9 66.7 F. 製作膠片不平均易導致如圖(b)的DNA band歪斜
10× Buffer 1.0 23.0
μl
AluI 1.1 25.3
PCR產物 5.0 165.0
References
<1>行政院農業委員會畜產試驗所－育種組實習講義
<2>朱志成等.教育部顧問室「生物技術科技教育改進計畫」:動物基因 轉殖技術與實驗.台北市.<民92四月>
<3>Susan Carson.& Dominique Robertson.(2006)Manipulation and expression of recombinant DNA:A laboratory manual.second editior.
Elsevier Academic Press. Burlington, MA