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METODO CITOQUIMICOS
• El objetivo de estos metodos es la localizacion
  e identificacion de las sustancias quimicas
  constituyentes de las celulas, para lo cual hay
  dos lineas de investigacion.
• 1.-obtencion de fracciones subcelulares y su
  posterior analisis bioquimico,



• 2.- determinacion de diferentes compuestos
  quimicos en el interior de la celula.
¿QUE ES LA CITOQUIMICA?
• La citoquimica estudia la composicion quimica
  de la celula y permite detectar la localizacion
  topografica de algunos principios
  inmeditos,enzimas, metales pesados y otras
  sustancias. Se considera como un nexo de
  union entre la morfologia y la bioquimica.
EN UNA REACCION BIOQUIMICA
 HAY TRES PASOS FUNDAMENTALES:
• 1.-fijacion:para preservar las mestruicturas y reactividad funcional
  celulares evitando fenomenos nocivos para la misma e impidiendo
  tambien la difucion de componentes bioquimicas entre los diferentes
  comportamientos celulares asi como al medio extracelular. Existen
  diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraidehido,
  formaldehido, etc.
• 2,. Incubacion en el medio de reaccion: como consecuencia se liberan
  unos productos que bien por si mismo, o al combinarse con otra
  sustancia presente, dan lugar a un presipitado visible en lugar de la
  reaccion.
• 3,. Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y
  permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma. Las
  reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y
  reproductibilidad. Las muestras a estudiar son extensiones de sangre
  periférica y de médula ósea, improntas de tejidos y células
  impactadas mediante cito centrifugación procedentes de diversos
  líquidos biológicos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin
  anticoagulantes.Para la correcta valoración citoquímica hay que
  intercalar controles positivos y negativos.
LA CROMATOGRAFIA
• permite la separación de biomoléculas
  basándose en la diferente velocidad de
  desplazamiento de los componentes de una
  mezcla a través de un medio determinado.

• La velocidad de desplazamiento dependerá de
  las características de las biomoléculas. Dentro
  de esta técnica existen distintas modalidades.
CROMATOGARFIA EN PAPEL


• se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una
  hoja de papel adsorbente. Uno de los extremos
  se impregna con un disolvente que avanzará por
  capilaridad a través del papel. Aquellas moléculas
  que sean solubles en el disolvente serán
  arrastradas y avanzarán más rápido que las que
  no lo sean obteniéndose así una separación en
  función de la solubilidad .
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO
           IONICO

• la muestra se pasa por una columna con una
  resina cargada(positiva o negativamente) de
  forma que las moléculas de la muestra
  interaccionarán con la resina en mayor o
  menor grado en función de su carga y, por
  tanto, avanzarán a distinta velocidad. Al final
  podrán recogerse las distintas fracciones
• separadas en función de su carga.
CROMATOGRAFIA DEFILTRACION


• se pasa la muestra por una columna de resina
  porosa sin cargas. Las moléculas pequeñas
  avanzarán más despacio pues tienden a entrar
  en los poros de la resina, mientras lasgrandes
  irán más rápido. La
• separación se hace, por tanto, en función del
  tamaño molecular.
ELECTROFORESIS

• es una técnica derivada de la cromatografía que lo que
  hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra
  colocada en la base de una lámina del gel agarosa.

• La electricidad forzará el desplazamiento delas
  moléculas en función de su carga, es decir, se moverán
  al polo positivo o al negativo según cual sea su carga
  neta y lo harán a una velocidad que dependerá de
  sumas a y del número de cargas eléctricas.
METODOS DE FRACCIONAMIENTO
              CELULAR
•   En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por
    procedimientos mecánicos o químicos (trituración, vibración ultrasónica, choque
    osmótico...) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la
    célula.

•   El método más usado es la ultra centrifugación diferencial, proceso durante el cual
    se somete a las células destruidas a una serie de centrifugaciones, con fuerzas
    centrífugas progresivamente mayores, de forma que las partículas se van
    separando en función de su tamaño; en cada fase se obtiene un precipitado que se
    recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar.

•   Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos
    estudiar de forma aislada . La última fracción que se obtiene corresponderá a una
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    soluble, es decir, para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras
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Metodo citoquimicos

  • 2. • El objetivo de estos metodos es la localizacion e identificacion de las sustancias quimicas constituyentes de las celulas, para lo cual hay dos lineas de investigacion.
  • 3. • 1.-obtencion de fracciones subcelulares y su posterior analisis bioquimico, • 2.- determinacion de diferentes compuestos quimicos en el interior de la celula.
  • 4. ¿QUE ES LA CITOQUIMICA? • La citoquimica estudia la composicion quimica de la celula y permite detectar la localizacion topografica de algunos principios inmeditos,enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de union entre la morfologia y la bioquimica.
  • 5. EN UNA REACCION BIOQUIMICA HAY TRES PASOS FUNDAMENTALES: • 1.-fijacion:para preservar las mestruicturas y reactividad funcional celulares evitando fenomenos nocivos para la misma e impidiendo tambien la difucion de componentes bioquimicas entre los diferentes comportamientos celulares asi como al medio extracelular. Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraidehido, formaldehido, etc. • 2,. Incubacion en el medio de reaccion: como consecuencia se liberan unos productos que bien por si mismo, o al combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un presipitado visible en lugar de la reaccion. • 3,. Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma. Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad. Las muestras a estudiar son extensiones de sangre periférica y de médula ósea, improntas de tejidos y células impactadas mediante cito centrifugación procedentes de diversos líquidos biológicos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes.Para la correcta valoración citoquímica hay que intercalar controles positivos y negativos.
  • 6. LA CROMATOGRAFIA • permite la separación de biomoléculas basándose en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de una mezcla a través de un medio determinado. • La velocidad de desplazamiento dependerá de las características de las biomoléculas. Dentro de esta técnica existen distintas modalidades.
  • 7. CROMATOGARFIA EN PAPEL • se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una hoja de papel adsorbente. Uno de los extremos se impregna con un disolvente que avanzará por capilaridad a través del papel. Aquellas moléculas que sean solubles en el disolvente serán arrastradas y avanzarán más rápido que las que no lo sean obteniéndose así una separación en función de la solubilidad .
  • 8. CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO • la muestra se pasa por una columna con una resina cargada(positiva o negativamente) de forma que las moléculas de la muestra interaccionarán con la resina en mayor o menor grado en función de su carga y, por tanto, avanzarán a distinta velocidad. Al final podrán recogerse las distintas fracciones • separadas en función de su carga.
  • 9. CROMATOGRAFIA DEFILTRACION • se pasa la muestra por una columna de resina porosa sin cargas. Las moléculas pequeñas avanzarán más despacio pues tienden a entrar en los poros de la resina, mientras lasgrandes irán más rápido. La • separación se hace, por tanto, en función del tamaño molecular.
  • 10. ELECTROFORESIS • es una técnica derivada de la cromatografía que lo que hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra colocada en la base de una lámina del gel agarosa. • La electricidad forzará el desplazamiento delas moléculas en función de su carga, es decir, se moverán al polo positivo o al negativo según cual sea su carga neta y lo harán a una velocidad que dependerá de sumas a y del número de cargas eléctricas.
  • 11. METODOS DE FRACCIONAMIENTO CELULAR • En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por procedimientos mecánicos o químicos (trituración, vibración ultrasónica, choque osmótico...) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la célula. • El método más usado es la ultra centrifugación diferencial, proceso durante el cual se somete a las células destruidas a una serie de centrifugaciones, con fuerzas centrífugas progresivamente mayores, de forma que las partículas se van separando en función de su tamaño; en cada fase se obtiene un precipitado que se recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar. • Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos estudiar de forma aislada . La última fracción que se obtiene corresponderá a una fase soluble en la que tendremos todo tipo de moléculas. Para estudiar esta fase soluble, es decir, para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras técnicas como la cromatografía y la electroforesis.