my thesis

1. Università degli Studi di Firenze Facoltà di Agraria, Farmacia, Medicina e Chirurgia, Scienze Matematiche Fisiche e Naturali Corso di Laurea interfacoltà in Biotecnologie Laboratorio di Terapie Cellulari e Servizio Trasfusionale A.O.U Meyer Firenze VALIDAZIONE DEL TEST RAPIDO DI STERILITÀ SU PRODOTTI PER TERAPIA CELLULARE ALL’INTERNO DI UNA CELL FACTORY OSPEDALIERA Relatore: Dott. Giannecchini Simone ( Dipartimento di Sanità Pubblica ) Correlatore : Dott. Bambi Franco ( A.O.U Meyer ) Candidata: Valentina Becherucci

2. I PRODOTTI PER TERAPIA CELLULARE (PTC) Definizione dell’ISS (2004): farmaci biologici innovativi basati su materiale genetico, cellule e tessuti. Le cellule staminali mesenchimali (MSC): un esempio di PTC con le migliori prospettive di impiego clinico. PECULIARITÀ: sono realizzati in singoli lotti ad uso autologo o allogenico e prelevati all’interno di strutture sanitarie  NON possono essere prodotti all’interno di un’industria farmaceutica. SOLUZIONI: possono essere prodotti in ambienti a contaminazione controllata ( CLEAN ROOMS ) all’interno di strutture accademiche/ospedaliere altamente qualificate ( CELL FACTORY )

6. BACTALERT 3D ® BIOMÉRIEUX Modulo di gestione video Modulo di incubazione Lettore di codici a barre

7. I FLACONI 6 TIPI DI FLACONI SAGGIATI 1) SA + SN per rilevare contaminazione microbica in campioni di sangue 2) BPA + BPN per rilevare contaminazione microbica in concentrati piastrinici 3) FA + FN per rilevare contaminazione microbica in campioni contenenti antibiotici

8. METODO DI RILEVAZIONE Terreno di coltura Dischetto di rilevazione pH sensibile LED FOTOMOLTIPLICATORE LUCE RIFLESSA Tecnologia colorimetrica : i microrganismi crescono nel terreno di coltura dei flaconi producendo CO 2 L’abbassamento del pH determina il viraggio di colore del dischetto da blu a giallo NEGATIVO POSITIVO

9. METODICA PER IL SAGGIO DI PQ 1) Ottenimento di 2 concentrazioni note di 9 ceppi microbici e fungini 1 UFC/ml + 50 UFC/ml Diluizioni scalari Metodo Bioball ® Multishot 550 2) Inoculo delle concentrazioni note all’interno dei flaconi Test di FERTILITA’ 50 UFC Test di SENSIBILITA’ 50 UFC e 1 UFC 3) Semina su piastra dei flaconi positivi e successiva identificazione con sistema automatico Vitek ® Test di SPECIFICITA’ VALUTAZIONE della RIPRODUCIBILITA’ Test eseguiti su 3 lotti di flaconi

10. TEMPO MASSIMO 168 h TEMPO MEDIO RILEVATO 30,5 h TEMPO DI RILEVAZIONE DI POSITIVITÀ 3 lotti della prova di Sensibilità a 50 UFC

11. TEMPO DI RILEVAZIONE DI POSITIVITÀ 3 lotti della prova di Sensibilità a 1 UFC TEMPO MASSIMO 168 h TEMPO MEDIO RILEVATO 37, 62 h

12. PERCENTUALE DI IDENTIFICAZIONE 3 lotti di flaconi del test di Sensibilità % Minima Accettabile (media) -Bacilli 80% -Tutti gli altri 90% %Rilevata -Bacilli 95,7 % -Tutti gli altri 97,5% %

13. VALUTAZIONE DELL’EFFICIENZA DELLO STRUMENTO 3 prove per il Test di fertilità (84 flaconi totali) -Risultati conformi = 100% - Risultati non conformi = 0% 3 prove per il Test di Sensibilità (432 flaconi totali) Nelle 6 Prove totali Falsi Positivi totali = 0% Falsi Negativi totali = 0% Ripetizione dei risultati inattesi