1. Universidad Técnica Particular de Loja Evaluación de la actividad genotóxica del extracto metanólico de Gynosis verrucosa mediante el ensayo Micronúcleos con bloqueo de Citocinesis en la línea celular Astrocitoma cerebral (D-384). Diana J. Herrera Torres Director: Dr. Natalia Bailón M.
2. DEFINICIÓN El cáncer se caracteriza por un crecimiento incontrolado y la propagación de células anormales La carcinogénesis, requiere varios año, involucra mutaciones y varias causas La muerte por cáncer en 2007 fueron 7.6 millones Macdonald F. et al ,2004
3. INCIDENCIA pulmón, próstata, colon y recto . Pulmón, mama, colon y recto Mujeres: mama y cérvix (cuello uterino). Hombres: próstata y estómago. En 1997 al 2002 Hombres: Estómago, próstata, S. hematopoyético Mujeres: cérvix invasor, mama, piel, estomago
4. AgentesAnticancerígenos Desde décadas atrás se han utilizado los principios de origen vegetal, y se viene realizando el aislamiento y caracterización de numerosos principios activos de los cuales se han desarrollado nuevos fármacos. Estos provienen de plantas comúnmente de uso clínico. Cuatro clases 1. Alcaloides de la Vinca 3. Taxanos Taxusbrevifolia 4.Camptotecinas Catharanthusroseus 2.Epipodofilotoxinas Podophyllumpeltatum Camptotecinacuminata
5. PRODUCTOS DE ORIGEN VEGETAL En la provincia de Loja y Zamora Chinchipe, elaboran remedios caseros con familias: Asteraceae, Lamiaceae, Solanaceae, Fabaceae, Onagraceae y Apiaceae, por sus propiedades curativas. Gynoxis verrucosa, propiedades curativas: presión sanguínea baja, depresión psicológica, problemas visuales, respiratorios y como sedante para cólicos. Del extracto de G. verrucosa se han aislados lactonas sesquiterpénicas: dehidroleucodina 1,10-epoxy-2-hidroxikauniolida; al igual que compuestos derivados del ácido bisabolánico. El extracto de G. verrucosa efecto citostático a <10ug/ml. IC50 = 22,06 ± 10,7ug/ml
6. Micronúcleos con bloqueo de citocinesis (CBMN) El análisis de MN es usado como una prueba de genotóxicidad y para biomonitoreo de exposición a genotóxicos y sus efectos en humanos. Los MN se forman por ruptura directa del ADN Posibles destinos a la exposición citotóxicos o agentes genotóxicos Posible medir la frecuencia del rotura de cromosomas (MN), la pérdida del cromosoma (MN), la reorganización del cromosoma, cromosomas dicéntricos (NPB), amplificación de genes (NBUDs), la necrosis y apoptosis.
7. Objetivo General Evaluar la actividad genotóxica del extracto metanólico de Gynoxis verrucosa mediante el ensayo CBMN en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).
11. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Se utilizó la cinética de proliferación celular (CPC), para lo cual se evaluó la proporción de células mono (M), bi (B), o polinucleadas (P).
12. El índice mitótico se basa en el grado de proliferación celular como respuesta a la presencia de un agente externo y se define como el porcentaje de células que contiene cromosomas condensados en una etapa del ciclo celular, la mitosis
13. INDICE DE DIVISION NUCLEAR Figura 3.2.Índice de división nuclear calculado para línea celular D-384 tratadas con G. verrucosa. MMC como C. positivo y DMSO como C. negativo. Cada barra representa la media ± EE de tres experimentos independientes por duplicado. Usamos T. de DUNETT. *** P<0.00001; **P< 0.00002; *P<0.00003
14. El extracto G. verrucosa, tiene un efecto citostático a partir 10ug/ml de células CHO-K1. Antineoplásicos como el Carboplatino (5 ug/ml). En el tamoxifeno,utilizado en 2 líneas celulares [MCF-7, MDA-MB468] Podemos establecer que el efecto citotóxico o cistostático puede variar dependiendo de la naturaleza del estudio.
15. FRECUENCIA DE MICRONUCLEOS Figura 3.3. Efecto genotóxico, en las células D384, expuestos a diferentes concentraciones de G. verrucosa. Se empleó como control positivo MMC 1 μM. Los resultados son de tres experimentos independientes que se realizaron por duplicado. Usamos T. de DUNETT. *P> 0,00001.
16. Se conoce el incremento de la frecuencia de MN se observa a partir de 1ug/ml en linfocitos humanos CBN Puede incrementar el daño al ADN a partir de 0.01 ug/ml, medido mediante el ensayo cometa.
