microbiología

1. Brucella
Microbiologia y Parasitologia
Ulises Clemente González

2. Clasificación
Actualmente se reconocen 6 especies
denominadas “nomen especies”
18 biovares:
B. Melitensis 1, 2 y 3
B. Abortus bv 1,2,3,4,5,6,7 y 9
B. Canis
B ovis
B. neotomae
El género brucella pertenece al orden
Rihizobiales dentro de la clase α-
proteobacteria.

4. Caracteristicas morfológicas y tintoriales
Características morfológicas.
• Grammnegativas
• Forma de bacilos cortos de 0.7 µm de diámetro y 1.5µm de largo.
• Se observan aislados en pares, cadenas cortas o grupos.
• No producen capsula verdadera
• Endosporas
• Inmóviles
• Catalasa y oxidasa positivos
• Temperatura optima de 37°C
• No producen hemólisis
Empleando la tinción de Zielh-Neelsen
modificada (tinción de Stamp), las
Brucellas se tiñen de color rojo y
conservan su morfología.

5. Pruebas bioquímicas para determinar el género, la
especie y el biovar.
• Se recomienda incubar las cajas en
atmosfera de 5% de CO2
• Medio de TSI: medir ausencia de acido y
gas a partir de azucares.
• Citrato de Simmons: no utiliza este
sustrato como fuente de carbono
• Medio de SIM: movilidad de la brucella y
ausencia de indol y H2S.
• Medio de urea de Christensen: medir la
producción de ureasas.
• Produccion de H2S: se determina por el
precipitado negro que se deposita en la
tira de papel filtro, impregnado con
acetato de plomo al 10% y colocada en un
tubo de TSA sembrado en la caja con la
cepa problema
• Crecimiento en presencia de colorantes
tionina y fucsina: la susceptibilidad esta
en función de la especie.
• Aglutinacion con sueros
monoespecificos: se utiliza cuando se
sospecha de B. canis u otra especie rugosa
natural. Se utilizan los sueros
monovalentes A y M.

6. Estructura antigénica
• Periplasma con proteínas
• Capa de péptidoglucanos responsable de la forma e integridad osmótica.
• Citoplasma rico en DNA Y RNA y proteínas citosolicas.
Antigenos de membrana externa: lipopolisacaridos : dependiendo de el tipo expresado se clasifican en
lisas (S) y rugosas (R)
• proteínas de membrana externa: se clasifican en principales y menores de acuerdo a su abundancia.
Antigenos internos
• Proteinas periplasmicas inmunogenicas : superoxido dismutasa (SOD), BP26 o CP28 y la P39.
• Proteinas citosolicas: proteínas del estrés térmico GroEL, GroES, Dnak, HtrA, proteínas
YajC, UvrA, bacterioferritina, gliceraldehido 3-fosfato (GAPDH)
• Proteinas ribosomales: L7/L12 y cp24
• Proteinas con actividad enzimática: aminopeptidasa y ureasa.

7. Interaccion hospedero-brucella y mecanismos
inmunitarios.
Las bacterias ingresan por via: oral, nasal y
conjuntival.
Son fagocitadas por los leucocitos
polimorfonucleares neutrófilos en los que
sobrevive y se multiplica.
Los LPNN la transportan hacia los tejidos
linfoides y órganos del sistema fagocitico
mononuclear donde la bacteria infecta a
macrófagos.

8. Inmunidad y Factores de virulencia
La respuesta adaptativa involucra tres
mecanismos principales:
Generacion de una respuesta humoral con
producción de anticuerpos.
Activacion de una función bactericida de los
macrófagos por acción del IFN-ƴ producido
por las células T CD4+ y CD8+
Lisis de las células infectadas por LT CD8+
citotóxicos.
La brucella ingresa en la membrana de la
celula hospedera por medio de balsas
lipídicas en presencia de IPK3.
Inicialmente reside en vacuolas tempranas
(BCVts) retículo endoplasmático
interacción con los sitios externos del RE
replicación de la bacteria.

10. Factores de virulencia
Entrada
Dependi
ente de
LPS
Proteinas de choque
acido, ureasa
Catalasa
Superoxido
dismutasa
Citocromo oxidasa,
NO sintetasa

11. Patogenia y principales enfermedades
Brucelosis
Es una enfermedad febril de inicio agudo con
sudoración profusa, desproporcionada a la
fiebre existente y de predominio nocturno, con
algias de localización articular, musculares o
neurológicas.
Puede presentar cuadros asintomáticos.
Se reporta la presencia de brucella en la
mayoría de los órganos, pero los mas
frecuentes son:
hueso, SNC, corazón, hígado, bazo, testículos y
próstata, además se involucran ojos, piel y
tejidos suaves.

12. Huesos: 20% de los casos de infección por
brucella.
Produce osteomielitis vertebral.
Artritis relacionada con infección aguda,
puede ser supurativa y destructiva.

13. Sistema nervioso:
Meningitis, encefalitis, radiculitis,
neuritis.
La lesión mas característica es la
meningoencefalitis.
Cultivo de LCR  60%
Hemocultivo 7%

14. Afecciones cardiovasculares:
Endocarditis, miocarditis y pericarditis
El 80% presentan endocarditis.
Todas las especies a excepción de B. canis
pueden causar endocarditis.

15. Alteraciones genitourinarias:
Pueden excretar bacterias en la orina debido
a una infección sistémica.
El órgano mas afectado es el testículo.
(epidídimo-orquitis unilateral)
Prostatitis o bruceloma
Glomerulonefritis focal o aguda

16. Epidemiologia
La fuente de infección la constituyen los animales infectados que en su mayoría son
las especies productoras de alimento y especies domésticas.
En menor escalas: camellos, alces, búfalos y llamas.
B. Mielitensis es la que genera mayor numero de casos humanos registrados. Cerca
del 90% asociada con B. suis, una enfermedad csevera presentada como una infección
mas restringida de forma local. Produce granulomas en el hígado.
En México existen los biovares: 1,2,3,4,5,6,7 y 9 siendo el biovar 1 el mas frecuente y el
4 el mas virulento para el hombre.
Incidencia entre los 15 y 44 años en México.

17. Diagnóstico.
Se debe sospechar brucelosis humana en aquellos individuos
que:
Sean originarios de zonas endémicas
Hayan permanecido un tiempo en ellas
Hayan ingerido productos lácteos no pasteurizados o de origen
dudoso.
Hayan tenido contacto estrecho con animales de dichas zonas
Presenten uno o mas de los siguientes síntomas: fiebre,
escalofríos, sudoraciones nocturnar, mialgias, artralgias, cefalea y
debilidad.

18. Diagnostico directo
• Cultivo
Es el método mas certero, se obtiene por
hemocultivo o cultivo de médula
ósea, raramente por cultivo de LCR.
El medio bifásico de Ruiz Castañeda es el mas
apropiado.
• Examen microscópico
Cuando el aparato automatico de hemocultivo
detecta posible crecimiento, la tinción de
Gramm permite hacer el diagnostico.

19. Diagnostico indirecto
Aglutinación
Rosa de Bengala
Aglutinación en tubo o placa con pocillos
Aglutinación después de tratar el suero con
2-mercaptoetanol (2-ME)
Reacción de cadena de polimerasa.

20. Tratamiento.
El tratamiento es especifico y se utiliza según los esquemas:
Esquema A: tetraciclina y estreptomicina, de primera elección en adultos
Esquema B: rifampicina y trimetoprim con sulfametoxazol, indicado en niños, mujeres
embarazadas (después del primer trimestre y ancianos
Esquema C: doxiciclina y rampificina, cuando exista fracaso con la administración de los esquemas
A y B.
Evaluacion del tratamiento: mediante ausencia de signos y síntomas, ausencia de brucella en
sangre además de la disminución o desaparición de anticuerpos IgG medidos por la prueba de
aglutinación.

21. Prevencion y control
NOM-041-ZOO-1995: utilizar vacunas vivas,
atenuadas y liofilizadas para prevenir
brucelosis en caprinos, ovinos y bovinos.
NOM-091-SSA1-95: especificaciones
sanitarias para la leche pasteurizada de vaca.
NOM-121-SSA1-1995: bienes y servicios:
quesos frescos, madurados, procesados.