1. EVALUACION DE LOS REGULADORES DE CRECIMIENTO ANA/BAP/KIN EN EL
ESTABLECIMIENTO IN VITRO DE LA PLANTA Ortiga (Urtica urens L.) MEDIANTE
ORGANOGENESIS DIRECTA A PARTIR DE SEGMENTOS NODALES.
Resumen
En la presente investigación se va a describir el proceso de estandarización de
la técnica del cultivo in vitro de la planta ortiga (Urtica urens L.) Se utilizará la
técnica de organogénesis directa, es decir, los órganos se originan
directamente desde el explante. La técnica del cultivo in vitro en la ortiga hasta
hoy no se ha realizado. Se llevará la planta al sistema in vitro, para ello se
tendrán en cuenta cuatro fases.
La primera fase consistió en establecer las plantas madres, dichas plantas de
obtuvieron en fincas y en viveros; una vez establecida la planta madre, se
extrajeron los segmentos nodales y se les realizó un proceso desinfección en
donde se probaron diferentes concentraciones de NaClO para determinar cuál
es la cantidad a la que el explante responde mejor en porcentajes de
contaminación y necrosis. En esta fase se hicieron seis repeticiones por cada
tratamiento.
Una vez desinfectado el material se continuará con la inducción, en esta fase
se realizará la composición del medio de cultivo MS, en el cual se evaluarán las
concentraciones necesarias de reguladores de crecimiento BAP y KIN, aquí
también se deben hacer al menos tres pruebas por cada concentración. Luego
se procederá a la fase siguiente: La multiplicación. En esta fase se probaran
distintas concentraciones del regulador de crecimiento ANA (Ácido
Naftilacético) con el que mejor tenga resultado en la fase de inducción, por
último se tomara le mejor resultado obtenido de la fase de inducción para
determinar que concentraciones son más aptas para la multiplicación de la
Ortiga. Por último se procederá a la fase de aclimatización, en esta etapa las
plántulas obtenidas se adaptaran a vivir en condiciones naturales.
Planteamiento del problema:
La ortiga (Urtica Urens L.) es una planta que posee diversas propiedades
medicinales y que hoy en día están siendo utilizadas en diversos productos de
la industria farmacológica y cosmetológica de Colombia, para hacer estos
productos se importa un principio activo desde Europa donde se cultiva esta
planta comercialmente, mientras que en Colombia no se hace y más bien es
tratada a la ortiga como maleza. El proceso de cultivo in vitro de esta planta va
a permitir que en un futuro probablemente se cultive comercialmente en
Colombia, ya que tiene algunas ventajas sobre la siembra normal, como la
obtención de semillas en cualquier época del año, muchas plántulas en poco
espacio y plantas libres de algunas bacterias y hongos,, entre otros patógenos.

2. Pregunta de investigación:
¿Cuál es la relación entre las diferentes concentraciones de los reguladores de
crecimiento ANA, BAP Y KIN en el establecimiento in vitro de la planta Ortiga
(Urtica urens L.) mediante organogénesis directa a partir de segmentos
nodales?
Descripción del problema
La ortiga es una planta poco aceptada, es portadora de propiedades
medicinales y nutritivas y hasta efectos secundarios para la salud de las
personas, gracias a que tiene unos pequeños pelos urticantes en sus hojas y
esto la lleva a provocar la urticaria. No se ha llevado a cabo un cultivo in vitro
de ortiga, por ende no se han definido las cantidades adecuadas de
reguladores de crecimiento adecuadas para hacerlo. Podría ser de gran ayuda
para una amplia variedad de investigaciones futuras en campos medicinales y
vegetales que se definiera ahora estandarización de la técnica del cultivo in
vitro de la planta, ya, que entre otros beneficios, el cultivo in vitro permite que
las plantas crezcan con menos cantidad de patógenos y se puede mantener
gran cantidad de material vegetal en un pequeño espacio.
Para iniciar el método de siembra de la Ortiga menor (Urtica urens L.) esta
necesita suelos muy fertilizados sobre todo en nitrógeno y fosfatos, y una
temperatura entre los 15 y los 25°C. Aunque se puede producir muy fácilmente
casi en cualquier lugar.
Por otra parte el cultivo in vitro en la ortiga mediante segmentos nodales nunca
se ha registrado en el sistema, este es uno de los aspectos que lleva a realizar
este proyecto, Por eso gracias al cultivo in vitro se dejaría estandarizado el
método de cultivo para esta planta.
Antecedentes
ATECEDENTES:
DIVISION BOTANICA DE LA ORTIGA (Urtica urens L.)
Reino
División
Clase
Orden
Familia
Genero
Plantae
Magnoliophyta
Magnoliopsida
Rosales
Urticaceae
Urtica
La ortiga menor (Urtica urens L.) se puede identificar por sus hojas opuestas y
grandes, con pelos urticantes los cuales pueden causar gran irritación en la
piel; con flores color lila, esta planta florece de otoño a primavera y fructifica en
primavera.
La ortiga también conocida como ortiga menor o yerba del ciego, es una planta
de la familia urticácea. Esta planta crece al lado de la ortiga mayor, por eso se

3. puede encontrar en climas templados y tropicales, Crece en zonas rurales
nitrificadas y arcillosas.
Esta planta a diferencia de la ortiga mayor sus propiedades medicinales son
más pocas, pero produce una mayor irritación en las personas y animales y sus
efectos son más duraderos. (Plantas vasculares. Medellín, 4 de octubre de
2012 inbuy.fcien.edu.uy/fichas_de.../Urtica_urens_i.pdf)
La ortiga contiene abundante clorofila, y también taninos, ácidos orgánicos,
vitamina C, provitamina A y sales minerales. Los pelillos urticantes contienen
ácido fórmico, resina, acetilcolina, histamina y otras sustancias. (Plantas
medicinales.
Medellin
6
octubre
de
2012
http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php)
Tiene numerosas aplicaciones medicinales e industriales. Es un excelente
hemostático, y por tanto un buen remedio contra las hemorragias. Es un buen
diurético, especialmente útil en la
eliminación del ácido úrico; por
este
motivo
es
igualmente
hipotensor y antirreumático. Se
emplea
en
catarros
gastrointestinales, bronquiales y
renales;
adecuado
como
antidiarreico
y
contra
el
estreñimiento. Por su acción
hipoglucemiante es un anti
anémico coadyuvante en el
tratamiento de la diabetes,
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&c
d=&cad=rja&docid=SuVdXflq63AEoM&tbnid=pH7wSMt410dJCM:&ved=
0CAUQjRw&url=http%3A%2F%2Fwww.fotolog.com%2Fclaroenelbosque
%2F21368893%2F&ei=Bd9Ur6dA8XJkAfHm4DwAw&psig=AFQjCNGBHLActrpczGfyrOaYKWr
yRypXLA&ust=1384016242294977
estimulante de la actividad de las glándulas endocrinas y la producción de
glóbulos rojos, así como un favorecedor de los intercambios metabólicos.
Ejerce un buen drenaje hepático. Actúa también como depurativa y fortificante.
En aplicaciones externas es cicatrizante, útil en heridas, úlceras, etc., y también
como revitalizador del cuero Cabelludo. Las hojas tiernas se pueden consumir
como verdura en primavera. Las sumidades también se utilizan en procesos
industriales para obtener la clorofila, que es la sustancia más abundante de
esta planta. Ésta es empleada como aditivo en productos cosméticos, jabones,
etc.
¿Hay evidencia científica en el campo de la medicina con la ortiga?
La evidencia es mucho mejor para la raíz de ortiga y el agrandamiento de
próstata que para la hoja de ortiga y las alergias.

4. Raíz de Ortiga
El uso de la raíz de ortiga para tratar la hiperplasia prostática benigna no se ha
estudiado tan bien como la serenoa, pero la evidencia es al menos
moderadamente convincente.
La raíz de ortiga contiene numerosos químicos biológicamente activos que
podrían influir en la próstata indirectamente interactuando con las hormonas
sexuales o directamente alterando las propiedades de las células de la
próstata.
Un estudio doble ciego controlado por placebo de 50 hombres con seguimiento
de 9 semanas encontró un incremento significativo en el volumen de orina y en
la tasa de flujo de orina en el grupo de ortiga en comparación al grupo de
placebo. 7 En otro estudio doble ciego y controlado por placebo, el tratamiento
de 67 hombres con ortiga produjo un 14% de mejoría en el flujo de orina y un
53% de disminución en la orina residual. 8 Finalmente, un estudio doble ciego y
controlado por placebo de 40 hombres encontró una disminución significativa
en la frecuencia de orinar después de 6 meses.
Hoja de Ortiga
Un estudio preliminar doble ciego y controlado por placebo que siguió a 69
individuos sugiere que la hoja de ortiga seca congelada podría al menos
mejorar ligeramente los síntomas de alergia
Un pequeño estudio doble ciego sugiere que la aplicación directa de la hoja de
ortiga a una articulación dolorosa podría mejorar los síntomas. (Beth Israel
Deaconess Medical Center. Ortiga. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de
http://www.bidmc.org/YourHealth/ConditionsAZ.aspx?ChunkID=125088)
La ortiga también se abre en el campo de la gastronomía, a pesar de ser una
“hierba mala”.
Es mejor recolectar los brotes tiernos y las hojas, y desechar los tallos más
duros. Las propiedades urticantes desaparecen con la cocción o 12 horas
después de recolectada.
La forma más sencilla de prepararlas en el campo es, después de lavarlas con
unos guantes, hervirlas entre 10 y 15 minutos. Luego aliñarlas con aceite y sal
si se dispone de ello. También se puede prepararlas en tortilla, sopas, puré o
cualquier otro plato que salga de vuestra imaginación.
M. Pahlow recomienda las hojas de ortiga junto con diente de León y celidonea
menor como una buena ensalada de primavera.
Las virtudes de la ortiga como alimento superan probablemente a las de las
espinacas, ya que, al contrario que estas, la ortiga no contiene oxalato sódico.
Sin embargo sí aporta otros beneficiosos elementos como el hierro o el silicio.

5. Además, contiene una importante cantidad de proteínas: de 6 a 8gr por cada
100gr de planta fresca y de 30 a 35gr si está seca; y vitaminas A, C y K.
En la obra "Secretos y Virtudes de las Plantas Medicinales" de Selecciones del
Reader's Digest se nos dice que no consumamos las semillas. También Alan
Sauri, en su libro "La Vida Autosuficiente" de Ed. Blume, advierte "Desconfiad
de las semillas: 10gr por día suprimen totalmente la orina". Es un dato curioso,
sobre todo teniendo en cuenta que una de las principales propiedades
reconocidas de la ortiga es su efecto diurético, para que nos entendamos, las
plantas diuréticas eliminan las toxinas de la sangre y a menudo aumentan
temporalmente la secreción de orina. Para evitar riesgos, se desechan las
semillas al realizar cualquier plato o infusión con ortiga. (Naturaleza educativa.
Plantas medicinales. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de
http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php)
Justificación:
Este proyecto se realizará porque hasta el momento no se ha estandarizado la
técnica de cultivo in vitro en la Ortiga (Urtica urens L), también porque La planta
ortiga es una planta conocida poco a pesar de sus grandes propiedades
medicinales (estimulante de aparato digestivo y antidiarreica, hemostática, antiarteriosclerótica, antidiabética, anti anémica, galactogena, anti-prostática,
Alzheimer, Diurético, Impotencia sexual, cosméticos, tratamiento capilar,
ciática)
En Colombia la aplicación del medio de cultivo in vitro es nulo para esta planta,
pero por medio de cultivo en campo si se da, pero es muy costoso su
mantenimiento a una gran escala por sus condiciones de cultivo, La aplicación
en este país de a la ortiga es para materia prima de cosméticos, y productos
medicinales sin embargo la producción es muy escasa por sus condiciones
climáticas ya mencionadas. Esto principalmente fue lo que dio pie a la
planeación de un proceso de propagación in vitro, mediante organogénesis
directa, con los que se propagará la planta.
Objetivos
Objetivo general:
Evaluar los reguladores de crecimiento ANA/BAP/KIN en el establecimiento in
vitro de la planta ortiga (Urtica Urens L.) mediante organogénesis directa a
partir de segmentos nodales
Objetivos específicos:
-
Determinar la concentración de NaClO (hipoclorito de sodio) óptima para
la desinfección de los segmentos nodales.
Definir la concentración adecuada de los reguladores de crecimiento
BAP y KIN en la fase de inducción en el medio de cultivo MS
Estimar la concentración necesaria de los reguladores KIN Y BAP/ANA
en la fase multiplicación.

6. Marco teórico:
La Urtica Urens L, más conocida
como ortiga menor o picamoscas,
es muy conocida por ser una
hierba que nace mucho entre los
escombros y el desorden, incluso
se ha llegado a considerar como
una plaga. Puede llegar a crecer
entre 40- 60 cm también posee
múltiples beneficios medicinales
que la gente desconoce y además
ha
sido
usada
en
varias
investigaciones científicas de las
cuales se habla en los antecedentes de este proyecto.
Sus principales beneficios medicinales son








Analgésica
Antialergica
Antianémica
Antigotosa
Antiinflamatoria
Antirreumática
Astringente
Diurética
Esta planta es muy conocida por poseer unos pelos urticantes tanto en sus
hojas como en su tallo, que tiene un efecto sobre la piel de los humano, estos
pelos al mínimo roce inyecta un líquido el cual causa ronchas urticantes. La
composición de esta planta no se conoce parcialmente, pero se conocen
algunos, por ejemplo, en la raíz está compuesta por escopetrol, alcohol
homovainillico, lignanos y en las partes aéreas está compuesta principalmente
por hierro y silicio, ácidos fenoles y numerosos flavonoiles, los pelos urticantes
contienen aminas (acetilcolina, histamina, serotonina).
MICROPROPAGACION
La micro propagación "in vitro" de plantas es una técnica que utiliza pequeños
trozos de tejido o de órganos en condiciones asépticas, con el fin de conseguir
nuevas plantas idénticas a la planta madre.
Esto se consigue gracias a que las células de las plantas son "totipotentes", es
decir, tienen una capacidad latente para regenerar una planta nueva a partir de
una única célula, de manera que la nueva planta será genéticamente idéntica a
la planta madre.

7. El cultivo in vitro permite entre otras muchas cosas una rápida propagación
vegetativa de las plantas, y una mejora del estado sanitario de las mismas.
ORGANOGENESIS DIRECTA
Cuando los órganos se originan directamente del ex planto (yema axilar) en
ausencia de proliferación del callo, aunque normalmente es indirecta.
La organogénesis directa (es decir sin la formación previa de callo) es
altamente deseable en los trabajos de micro propagación y de conservación de
germoplasma. La organogénesis directa consta de 6 procesos, cuatro de ellos
en el laboratorio, estos son:
- Establecimiento de plantas madres
- Desinfección
- Inducción
- Multiplicación
- Enraizamiento
- Climatización
Establecimiento del cultivo:
El cultivo de tejidos comienza a partir de trozos extraídos de la planta madre. Estos
pequeños órganos o trozos de tejido se llaman explantos. Las plantas que crecen
en el medio natural están contaminadas por microorganismos (bacterias y hongos).
Los explantos antes de ser introducidos en el medio de cultivo han de ser
esterilizados. Posteriormente se introducirán en el medio a su vez estéril y se
mantendrán allí en condiciones asépticas.
Multiplicación:
Una vez que la primera fase se ha completado con éxito, comienza la
multiplicación de los explantos. El explanto encuentra en el medio de cultivo todo
aquello que necesita para su crecimiento y desarrollo (agua, elementos minerales,
azúcares, hormonas, etc). Tras un período de crecimiento (4-8 semanas) es
necesario el subcultivo y paso a un nuevo medio. Es en este paso donde se
produce la multiplicación de las plantas.
AGAR
Es una mezcla de polisacáridos extraídos de un alga marina. Tiene una elevada
masa molecular, tiene la capacidad de hidratarse y formar una red. La planta no
puede digerirlo ni adsorberlo, además no interactúa con los componentes nutritivos
del medio.

8. Enraizamiento:
Antes de llevar las nuevas plantas al exterior es necesario proporcionarles una raíz
con la que sean capaces de realizar sus actividades vitales una vez que se
encuentren de nuevo en el medio natural. La inducción de estas raíces se produce
modificando ligeramente las características del medio de cultivo adecuándolas
para la generación de raíces.
· Aclimatación: Esta fase consiste en el paso de las plantas del cultivo al medio
natural. Este es un paso extremadamente importante, ya que si no se realiza
cuidadosamente se pueden perder gran número de plantas. Las plantas en
condiciones de cultivo están en una atmósfera con alta humedad y baja intensidad
luminosa, por tanto el tejido epitelial se caracterizará por tener menos ceras que
protejan a las plantas contra la deshidratación. El acondicionamiento de nuevo al
medio exterior se efectuará por tanto cuidadosamente, utilizando para ello
invernaderos.
Aclimatación:
Esta fase consiste en el paso de las plantas del cultivo al medio natural. Este es un
paso extremadamente importante, ya que si no se realiza cuidadosamente se
pueden perder gran número de plantas. Las plantas en condiciones de cultivo
están en una atmósfera con alta humedad y baja intensidad luminosa, por tanto el
tejido epitelial se caracterizará por tener menos ceras que protejan a las plantas
contra la deshidratación. El acondicionamiento de nuevo al medio exterior se
efectuará por tanto cuidadosamente, utilizando para ello invernaderos.
Divididas en cinco fases:
FASE 0: PREPARACIÓN DE LA PLANTA MADRE
Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener
explantos con un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. Para obtener
estos explantos es recomendable mantener a las plantas madre un período de
tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses, en un invernadero,
en que se va a intentar cultivar la planta en condiciones sanitarias óptimas y con un
control de la nutrición, del fotoperiodo y de la irradiancia recibida.
FASE I: ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO EN CONDICIONES DE ASEPSIA
Una vez escogida la planta madre, se extraerán los fragmentos a partir de los
cuales se obtendrán los explantos.
Antes de extraer los explantos se hará una desinfección de los fragmentos de
planta madre para eliminar los contaminantes externos. Una vez desinfectado el
material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia.
Ya en condiciones de asepsia (se trabajará en cabinas de flujo laminar) se
extraerán los explantos del material vegetal y se pondrán en cultivo en un medio de
iniciación dentro de un tubo de cultivo, para poder controlar la sanidad y la
viabilidad de los explantos.

9. FASE II: MULTIPLICACIÓN DE LOS BROTES
Durante esta fase se espera que los explantos que sobrevivieron de la FASE I
originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varios entrenudos.
Periódicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio
mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes
adecuados. Estas operaciones se realizan en la cámara de flujo laminar.
FASE III: ELECCIÓN DE UN MEDIO DE ENRAIZAMIENTO DE LOS
EXPLANTOS
Para enraizar los explantos se utilizan principalmente dos métodos:
ENRAIZAMIENTO IN VITRO
Se transfieren los brotes obtenidos durante la fase de multiplicación a un medio
libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga auxinas. Esta operación
se realiza en la cámara de flujo laminar. Este método permite ser mas flexible a la
hora de escoger los brotes, ya que éstos obtienen del medio la fuente de energía
para enraizar, y por tanto no es necesario que tengan las hojas muy bien
desarrolladas para realizar la fotosíntesis.
ENRAIZAMIENTO EX VITRO
Los explantos se deben transferir a un sustrato limpio, aunque no necesariamente
estéril, que puede ser una mezcla de turba con perlita o vermiculita. Con este
método es necesario que el medio de enraizamiento esté libre de organismos
patógenos y que los brotes tengan las hojas bien desarrolladas, ya que deben
realizar fotosíntesis para que la planta tenga una fuente de energía para enraizar y
desarrollarse. Los explantos deben de plantarse en contenedores cubiertos por un
plástico, para mantener la humedad relativa elevada, y hacerlos enraizar en el
laboratorio, o ponerlos en 'multipots' dentro de un invernadero en un área
sombreada con "fog-system" o "mist-system".
YEMAS AXILARES
Las yemas auxiliares están situadas en los nudos de los tallos. De ellas salen las
hojas y las flores.
CONDICIONES ASEPTICAS
Una de las características básica de este tipo de cultivos in vitro es la rigurosidad
fitosanitaria necesaria para que los plantines lleguen a campo sin ser portadores
de hongos, bacterias u otros agentes patógenos.
Para lograr esto, se debe controla distintos aspectos relacionados a la micro

10. propagación: condiciones del ambiente del laboratorio; esterilización del medio de
cultivo, tubos de ensayo, recipientes y las herramientas de trabajo; desinfección de
los explantes; respetar y cumplir con las normas de higiene y asepsia, etc.
El proceso se realiza en condiciones extremas de desinfección, endógenas y
exógenas, por tal razón las instalaciones fueron especialmente diseñadas y
construidas para una mejor climatización.
MEDIO DE CULTIVO
El medio de cultivo es la combinación sólida o líquida de nutrientes y agua.
Usualmente incluye sales inorgánicas, carbohidratos y vitaminas y aminoácidos. A
menudo se denomina Medio Basal y puede ser suplementado con algún regulador
de crecimiento y ocasionalmente con otras sustancias varias.
Los nutrientes son esenciales para el crecimiento y desarrollo de la planta: sin
agua y nutrientes minerales una planta no puede vivir ni in vitro ni in vivo. También
se debe añadir azúcares al medio de cultivo, ya que las plantas (o sus fragmentos)
no son completamente autotróficas cuando se desarrollan en estas condiciones.
El medio de cultivo debe ser rico en elementos minerales, en particular el potasio
debe estar en un nivel alto para una mejor multiplicación vegetativa; desde este
punto de vista, el medio Murashige y Skoog es conveniente.
EL MEDIO MS, O DE MURASHIGE Y SKOOG
Es muy usado, particularmente si el objetivo es regenerar plantas; existen
numerosas variaciones comerciales de este medio. El medio B5 o de Gamborg et
al. (1968), o sus varios derivados, ha sido de un gran valor en el cultivo de células
y protoplastos, y también es utilizado eficazmente en regeneración de plantas. La
diferencia principal entre los medios MS y B5 es la menor concentración de nitratos
en B5. El medio WPM (1980) de baja concentración de sales está especialmente
indicado para especies leñosas.
Esto nos lleva a ver de que está compuesto un medio de cultivo
Carbohidratos
Normalmente para el cultivo in vitro de células, tejidos u órganos es necesario
adicionar una fuente de carbono en el medio, debido a que el crecimiento in vitro
tiene lugar en condiciones poco apropiadas para la fotosíntesis o incluso en
oscuridad. La sacarosa es la más utilizada para propósitos de micro propagación.
Generalmente se usan concentraciones de 1 -6% de sacarosa en el medio, aquí es
convertida rápidamente en glucosa y fructosa; la glucosa es la que primero se
utiliza seguida de la fructosa. El azúcar blanco refinado que se vende en los
supermercados puede resultar adecuado para la micro propagación en muchos
casos. Se trata de un producto purificado y de acuerdo con los análisis se
compone de 99,94% de sacarosa, 0,02% de agua y 0,04% de otras sustancias (no
hay indicaciones de que estos últimos constituyentes puedan causar toxicidad in
vitro).

11. Vitaminas
La mayor parte de las plantas sintetizan casi todas las vitaminas esenciales, pero
aparentemente lo hacen en cantidades infraóptimas. Para lograr un buen
crecimiento es necesario a menudo suplementar al medio con una o más
vitaminas. La tiamina (B1) es la que más se utiliza y se la considera un ingrediente
esencial. Otras vitaminas también han demostrado tener un efecto positivo en el
crecimiento in vitro, como son: pidiroxina (B6), ácido nicotínico (B3), pantotenato
cálcico (B5).
Aminoácidos
Aunque las células cultivadas son capaces de sintetizar todos los aminoácidos
necesarios, la adición de L-glutamina (2 - 8 mM) o una mezcla de aminoácidos es
a menudo beneficiosa. Esto es particularmente importante en cultivo de células y
protoplastos.
REGULADORES DE CRECIMIENTO
Sustancia orgánica que favorece o inhibe los procesos celulares de división,
alargamiento, proliferación de los vegetales.
Sustancias químicas, naturales o sintéticas, que controlan el crecimiento de
plantas, activándolo como las fitohormonas (auxina, giberelinas) o inhibiéndolo
(inhibinas).
 Fitohormonas:
AUXINAS
Se relacionan con la elongación, tropismo, dominancia apical, abscisión,
enraizamiento y otros. En cultivo in vitro las auxinas son utilizadas principalmente
para la diferenciación de raíces y la inducción de callo. Las auxinas más utilizadas
son: IBA (ácido indol-3-butírico), NAA (ácido naftalenacético), IAA (ácido
indolacético) y 2,4-D (ácido diclorofenoxiacético). El IBA y el NAA son usados
frecuentemente para enraizamiento. El 2,4-D es muy efectivo para la inducción de
callos. Las auxinas se disuelven usualmente en etanol diluido o en una solución de
hidróxido de sodio.
CITOQUININAS
Están implicadas en la división celular, modificación de la dominancia apical,
diferenciación de tallos y otros. En los medios para cultivo in vitro se incorporan
citoquininas para promover la división celular y la inducción de yemas adventicias
en callos y órganos. Además se usan estos compuestos para la proliferación de
tallos axilares por la ruptura de la dominancia apical. Las citoquininas más usadas
son: BAP (bencilamino purina), quinetina y 2-ip (isopentenil-adenina).
Generalmente son diluidas con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio.

12. GIBERELINAS
Existen multitud de giberelinas conocidas. La de mayor uso es el GA3, pero debe
tenerse en cuenta que es muy sensible al calor (pierde el 90% de su actividad
después del auto clavado). Comparado con las auxinas y citoquininas, las
giberelinas se utilizan raramente. La mayoría de los explantos sintetizan
cantidades suficientes de este grupo de hormonas. Cuando se aportan giberelinas
al medio de cultivo, su función principal es el alargamiento de las regiones
subapicales. El GA3 es soluble en agua fría hasta 1000 mg l-1.
ANA
Estas hormonas favorecen el enraizamiento, ya que estimulan la aparición de
nuevas
raíces,
aunque
inhiben
su
alargamiento.
Algunos estudios han demostrado que la estimulación del crecimiento vegetativo,
que es la principal característica de las auxinas, puede derivar en inhibición si se
eleva la frecuencia de aplicación o se supera el nivel adecuado para cada caso
(sobredosis).
Se producen en zonas meristematicas, embriones de nuevas plántulas, hojas
verdaderas,
semillas
inmaduras.
¿Cómo
actúan?
Dominancia
apical
Desarrollo
en
elongación
de
ramas
Produce
división
celular
Activa
el
desarrollo
de
yemas
Favorece
la
floración
Retrasa la caída de hojas y frutos
KINETININA (KIN)
furfurilaminopurina (kinetina) es un regulador del crecimiento vegetal tipo
citoquinina.
Aplicación
Utilizado en la agricultura. 6-furfurilaminopurina (kinetina) puede promover la
división celular, diferenciación y el crecimiento, y Además mejorar la germinación y
el conjunto de frutas, induciendo la iniciación de los callos, reduciendo la
dominancia apical, rompiendo la dormancia de las yemas laterales, y retrasando el
envejecimiento.
Especificaciones
Apariencia:
Blanco
cristalino
Ensayo:
99%
Pérdida
por
desecación:
0.5%
Residuo en la ignición: 0.05%
FNF es el fabricante y proveedor de 6-furfurilaminopurina (kinetina) en China.
Ofrecemos 6-furfurilaminopurina (kinetina), y Fosfato Diamónico, Sulfato ferroso
monohidratado. Nuestros productos de alta calidad se ofrecen a precios

13. competitivos. FNF está ubicado en China, y la cadena completa de fabricación del
Cloruro de calcio anhidro, Ácido cítrico monohidrato, puede ser completado en
China, inclusive en una misma ciudad. Menor es el costo de fabricación mayor será
el ahorro de su compra. Más detalles sobre cada producto se indican en la página
con su descripción. (9)
Diseño metodológico
Establecimiento de las plantas madres:
16 plántulas de ortiga, las cuales se llevaron a un
lugar adecuado para su sostenimiento, ahí se
multiplicaron por medio de esquejes, para poder
establecer una gran cantidad de plantas madre.
Las plantas fuer controladas en cuanto, plagas,
humedad, temperatura.
Desinfección: Primero se cortaron los segmentos
nodales para luego lavarlos con agua corriente, para retirar restos de tierra u
otras partículas. Luego se introdujeron los segmentos nodales en etanol al 70%
por no más de 5 segundos para luego dejarse evaporar. Después de este
proceso se sumergieron los segmentos nodales en una solución de hipoclorito
de sodio en distintas concentraciones (Ver tabla 1.1) donde se dejaron 1, 2 y 3
minutos en distintas pruebas. Seguido se enjuagaron los segmentos nodales
con agua esterilizada 4 veces.
PRUEBAS DE DESINFECCION EN LA ORTIGA (URTICA URENS L.)
Tratamientos NaClO (hipoclorito Repeticiones
HONGOS BACTERIAS QUEMADURAS
de sodio) mg/l
1
0,00
3
2
0,5
3
3
1
3
4
1,5
3
5
2
3
Tabla 1.1
Inducción: En esta fase se empezará por preparar la composición del medio
de cultivo (MS) en el cual se probarán distintas concentraciones de reguladores
de crecimiento los cuales van a ser Furfurilaminopurina (Kinetina) y Benzil
Aminopurina (BAP) (ver tabla 1.2.1 y tabla 1.2.2). Las concentraciones de
vitaminas, sales y carbohidratos no serán modificados, se usaran las
concentraciones del medio de cultivo (MS). Se utilizará el gelificante agar en
una concentración de 0,6 - 1%.
PRUEBAS DE INDUCCIÓN EN LA ORTIGA (URTICA URENS L.)
Tratamienos KIN
(KINETINA) Repeticiones
NÚMERO
mg/L
DE
BROTES
1
0,00
3
2
0,5
3

14. 3
4
5
1
1,5
2
3
3
3
Tabla 1.2.1
PRUEBAS DE INDUCCIÓN EN LA ORTIGA (URTICA URENS L.)
Tratamientos BAP mg/L
Repeticiones
NÚMERO
DE
BROTES
1
0,00
3
2
0,5
3
3
1
3
4
1,5
3
5
2
3
Tabla 1.2.2
Multiplicación: En esta fase se probarán distintas concentraciones del
regulador de crecimiento ANA (Ácido Naftilacético) con el que estadísticamente
obtenga un mejor tenga resultado en la fase de inducción (X1) (ver tabla 1.3)
PRUEBAS DE MULTIPLICACIÓN EN LA ORTIGA (URTICA URENS
L.)
Tratamientos Unidades
de Repeticiones
NÚMERO
concentración
DE
ANA/X1 mg/L
BROTES
1
2
3
4
5
Tabla 1.3
0,00
0,5
1
1,5
2
3
3
3
3
3
Enraizamiento
Para esta fase del proceso para poder enraizar los explantes después de haber
pasado por cada una de las anteriores fases. Se utilizan principalmente vitro
plantas individuales de un tamaño aproximado de 2 cm. Los brotes obtenidos
durante la fase de multiplicación se pasaran a un medio libre de reguladores de
crecimiento o que solo contenga hormonas del tipo de las auxinas (BAP) en
diferentes concentraciones Donde se evaluará la longitud y el número de
raíces que broten de dicho explante.

15. PRUEBAS DE ENRAIZAMIENTO EN LA PLANTA ORTIGA (urtica urens L.)
Tratamientos Unidades
de Repeticiones
NÚMERO
LONGITUD
concentración
DE RAICES DE
ANA
BROTADAS RAICES
1
2
3
4
5
0,00
0,5
1
1,5
2
3
3
3
3
3
RESULTADOS Y CONCLUSIONES:
Resultados esperados:
Debido al comportamiento del material biológico las fases de inducción está en
experimentación, esperamos poder obtener diferencias significativas entre los
tratamientos planteados al igual que en la etapa de multiplicación,
enraizamiento y aclimatización. Estas fases serán realizadas por nuestros
compañeros del grado noveno que pertenecen al proyecto.
Esperamos estandarizar la técnica del cultivo in vitro para ortiga menor y así
poder trabajar en otras fases posteriores en la obtención directa de metabolitos
secundarios y proponer el cultivo de ortiga como una alternativa para los
agricultores del país, así como también otra alternativa para los campesinos
que pertenecen a los programas estatales de sustitución de cultivos ilícitos.
Resultados obtenidos:
Este año (2013) Se comenzó con la primera fase del proyecto, de acuerdo con
los ensayos que se hicieron de desinfección se obtuvieron los siguientes
resultados:
Ensayo # 1: Con respecto a la contaminación, el mayor porcentaje se
observó en el tratamiento control (T0) con un 100 % de contaminación,
seguido de tratamiento T2 (1,0% NaOCl) 75%, los mejores resultados se
obtuvieron en los tratamientos T1 (0,5% NaOCl) con 12,5 %, T3 (1,5%
NaOCl) con 25%, y T4 (2,0% NaOCl) 25%. En la necrosis de los tejidos se
presentaron datos similares con valores que superan el 65%.
Ensayo # 2: El tratamiento T2 (1,0% NaOCl) presento el menor porcentaje
de contaminación (25%), mientras que los demás presentaron valores
superiores al 50%. Con respecto a la necrosis de los explantes T1 presento
el mejor resultado con 37%, seguido de T3 y T4 con 50% y los tejidos
donde más se observó este fenómeno fueron los tratamiento T0,T2 con
valores de 66,6% y 75 % respectivamente.
Ensayo # 3: Todos los tratamientos muestran porcentajes de contaminación
superiores al 50%. Los tratamiento T0,T2 y T4 obtuvieron un 33% de
necrosis y T1 y T3 un 50%.

16. El promedio de los porcentajes de contaminación de todos los ensayos
mostro que los mejores resultados para los tratamientos T3 y T4 los cuales
presentan las concentraciones más elevadas de NaOCl , mientras que la
necrosis presento resultados muy similares para todos los tratamientos.
Por la semejanza de los resultados se consideró no aplicar la prueba de
análisis de varianza, que es la más adecuada para establecer si hay
diferencias significativas en los tratamientos, estadísticamente hablando.
Conclusiones:
El promedio de los porcentajes de contaminación de todos los ensayos
mostro que los mejores resultados para los tratamientos T3 y T4, los
cuales presentan las concentraciones más elevadas de NaOCl, mientras
que la necrosis presento resultados similares para todos los tratamientos.
Los resultados que se obtuvieron con respecto a la desinfección y a la
necrosis fueron muy similares, ya que el NaOCl en cada una de las
concentraciones que se establecieron necroso los explantes, esto pudo
deberse a que el NaOCl actúo como un agente toxico, penetra los tejidos
del explante elimina algunos patógenos como gonfos y bacterias, pero a la
vez llega hasta las células y esto produce necrosis.

17. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1. (Naturaleza educativa. Plantas medicinales. Recuperado el 4 de octubre de
2012, de http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php)
2. (Plantas vasculares. Medellín, 4 de octubre de 2012
inbuy.fcien.edu.uy/fichas_de.../Urtica_urens_i.pdf)
3. (Naturaleza educativa. Plantas medicinales. Recuperado el 4 de octubre de
2012, de http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php)
4. (Beth Israel Deaconess Medical Center. Ortiga. Recuperado el 4 de octubre
de
2012,
de
http://www.bidmc.org/YourHealth/ConditionsAZ.aspx?ChunkID=125088)
5. (Vive la naturaleza. ortiga (Urtica urens) Plantas medicinales, comestibles y
útiles para aventureros y excursionistas. Recuperado el 4 de octubre de
2012, de http://www.vivelanaturaleza.com/botanica/ortiga.php)
6. (Raul Navalmanzo, clasificación taxonómica, tomado el 27/09/12 de la
pagina (“http://navalmanzano.blogspot.com/2009/05/urtica-urens-ortigamenor.html”)
7. (HiperNatural, Ortiga recuperado el 27 de septiembre de 2012 de
http://www.hipernatural.com/es/pltortiga.html)
8. (Morfología de las plantas vasculares, yemas. Recuperado el día 27 de
septiembre de 2012 de http://www.biologia.edu.ar/botanica/tema1/13yemas.htm)
9. Furfurilaminopurina (kinetina), productos. Recuperado el día 03 de abril de
2013 de http://www.fertilizer.es/8-10-6-furfurylaminopurine.html
AGRADECIMIENTOS:
Gracias a la I. E. Colegio Loyola para la ciencia y la innovación por su
acompañamiento, y por inculcarnos la investigación como estilo de vida.
A los docentes acompañantes, al programa Ondas por su ayuda en el año
2012, a la fundación Loyola, el Sena y a la Secretaria de Educación