Memorias 2013 - 5a Conferencia Científica Anual sobre Síndrome Metabólico - Presentación Tabajos Libres Orales - MÓDULO: EXPRESIÓN CLÍNICA Y TERAPÉUTICA EN SÍNDROME METABÓLICO - Polimorfismo C/T (rs5400) del gen SLC2A2 en población infantil con niveles de glucosa alterada en ayuno * María G. Rodríguez G., Isela Parra R., Silvia E. Flores., Natividad Castro A., Amalia Vences, Aralia B. Salgado B., José F. Muñoz V., Lorenzo Salgado G. (Universidad Autónoma de Guerrero, Unidad Académica de Ciencias Químico-Biológicas, Unidad Académica de Medicina/UIEM, Maestría en Ciencias Biomédicas) PREMIACIÓN: PRIMER LUGAR

1. POLIMORFISMO C/T rs5400 DEL GEN SLC2A2 EN POBLACIÓN
INFANTIL CON NIVELES DE GLUCOSA ALTERADA EN
AYUNO

2. SECRECIÓN DE INSULINA
Imagen modificada de Tarasov et al., 2004
Canal de Ca2`
abierto
Despolarizaciòn
+
-
GLUT2
METABOLISMO
MITOCONDRIAL
INSULINA
CANAL DE Ca2+
ABIERTO
CIERRE DE
CANAL KATP
DESPOLARIZACIÓN
ATP
MgADP
ATP
MgADP Ca2+
GLUCOSA GLUCÓLISIS
>5.5 mmol/l glucosa

3. GEN SLC2A2 (GLUT2)
1 2 3 4 5 11
Exónes
5 3
rs5400
638 C/T
Kilpeläinen et al., 2007
promotor
3q26.1-26.2
Treonina Isoleucina
C / T
(T110I)

4. Estudio realizado Población Resultado Referencia
rs5400 (C/T)) asociado a
DM2
Caucásica rs5400 (TT)
(OR 1.49, p=0.0059)
Barroso et al.,
2003
Actividad física con:
rs5393 (A/C)
rs5394 (C/T)
rs5400 (C/T)
rs5404 (G/A)
Finlandesa Haplotipo CTTA de los alelos mutados de
rs5393, rs5394, rs5400 y rs5404, con el
cambio de actividad física moderada a
actividad física vigoroza (p=0.021)
Kilpeläinen et al.,
2007
Asociación de rs5400 (C/T)
con diabetes tipo 2
Finlandesa rs5400 (TT)
( OR= 2.98, IC95%, 1.31-6.79, p= 0.014).
Willer et al.,
2007
Asociación de rs5400 (C/T)
con diabetes tipo 2
Finlandesa y
Estadounidense
rs5400 (TT)
(OR 1.28, IC95% 1.11-1.49, p=0.0023)
Gaulton et al.,
2008
rs5400 (C/T) asociadas con
alta ingesta de
carbohidratos en 2
poblaciones.
Canadiense rs5400 (CC vs T)
visit 1: (112g vs. 86g/día,
p =0.01)
visita 2: (111g vs. 82g/día
p= 0.003)
(131g vs. 115g/día,
p = 0.007)
Eny et al., 2008
ANTECEDENTES

5. Niveles de glucosa en ayuno
Parámetros
(edad, sexo, niveles de insulina, IMC, antecedentes obesidad y diabetes)
Muestra de ADN
Glucosa alterada en ayuno (≥100-125 mg/dl) Niveles de glucosa normal (<100 mg/dl)
Grupo de Casos Grupo Control
Genotipificación PCR-RFLPs
Análisis de Resultados (software STATA v.11)
Base de datos de la población de estudio
Discusión y conclusiones

6. Etapa de PCR Temperatura y tiempo
Desnaturalización inicial 94°C 5 min
Desnaturalización del ADN 94°C 30 seg
30ciclos
Alineamiento de iniciadores 60°C 30 seg
Extensión del ADN 72°C 30 seg
Extensión final 72°C 3 min
Reactivo Concentración
inicial
Concentración
final
Volumen
H2O ------ ------ 5.5 μl
Buffer 10X 1X 1.0 μl
MgCl2 50 mM 6.0 mM 1.2 μl
dNTP’s 10 mM 0.8 mM 0.8 μl
Iniciador sentido 10 μM 0.2 Μm 0.2 μl
Iniciador antisentido 10 μM 0.2 μM 0.2 μl
Taq polimerasa 50 U/μl 0.5 U/μl 0.1 μl
gDNA 100 ng/μl 100 ng/μl 1.0 μl

7. Figura 2. Identificación del polimorfismo rs5400 C/T en el gen SLC2A2 en geles de
poliacrilamida al 6%. Carril 1: Marcador de peso molecular de 50 pb, carriles 2-11: productos
de PCR de 156 pb, carril 12: control negativo.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
200
150
100
50
156

8. Figura 3. Identificación de los genotipos después de la
digestión con la enzima SsiI. Carril 1: Marcador de peso
molecular de 50 pb, carril 2: genotipo CT, carriles 3-7:
genotipo CC y carril 8: producto PCR sin digerir.
CC= 134, 22 pb.
CT= 156, 134, 22 pb.
TT= 156 pb.
Enzima de
restricción
SsiI
Secuencia de
restricción
5'... C* C G C ... 3'
3'... G G C *G ... 5'
Producto PCR Buffer Enzima H2O Incubación
Temperatura Tiempo
0.5 μl 1.5 μl 0.2 μl 7.8 μl 37° C 3 horas
1 2 3 4 5 6 7 8
50
100
150
CCCT

9. Niveles de glucosa en ayuno
Parámetros
(edad, sexo, niveles de insulina, IMC, antecedentes obesidad y diabetes)
Muestra de ADN
Glucosa alterada en ayuno (≥100-125 mg/dl) Niveles de glucosa normal (<100 mg/dl)
Grupo de Casos Grupo Control
Genotipificación PCR-RFLPs
Análisis de Resultados (software STATA v.11)
Base de datos de la población de estudio
Discusión y conclusiones

10. Cuadro 1. Características de la población
Datos proporcionados en n (%), mediana y percentil 25-75, media±DE, valor p <0.05 (*X2, °Mann Whitney)
Variables Total
n=150
Glucosa alterada en
ayuno n= 50
Glucosa normal en
ayuno n=100
Valor p
Edad (años) 9 (7-10) 9 (8-10) 9 (7-10) 0.15 °
Género
Masculino
Femenino
74 (49)
76 (51)
29 (42)
21 (58)
45 (45)
55 (55)
0.13 *
Antecedentes obesidad
No
Si
66 (44)
84 (56)
22 (44)
28 (56)
44 (44)
56 (56)
1.0 *
IMC (kg/m2)
<24.9
24.9-28.29
≥ 28.3
19 (16-23)
127 (85)
16 (10)
7 (5)
21 (17-24)
39 (78)
7 (14)
4 (8)
18 (16-23)
88 (88)
9 (9)
3 (3)
0.05 °
0.22*
Antecedentes diabetes
No
Si
86 (57)
64 (43)
33 (66)
17 (34)
53 (53)
47 (47)
0.13 *
Insulina μU/ml
<4.51
4.52-9.547
>9.548
7(4-12)
51 (34)
49 (32.7)
50 (33.3)
7(5-12)
11 (22)
20 (40)
19 (38)
6 (2-11)
40 (40)
29 (29)
31 (31)
0.10 °
0.08 *
Triglicéridos (mg/dL)
<150
>150
92 (64-150)
112 (75)
38 (25)
97 (63-150)
36 (72)
14 (28)
92 (64-144)
76 (76)
24 (24)
0.83 °
0.59*
HOMA (mg/dL) 1.50 (0.76-2.80) 1.85 (1.20-3.12) 1.37 (0.58-2.55) <0.05°

11. Cuadro 2. Frecuencias genotípicas y alélicas de rs5400 C/T en el gen SLC2A2 en los
grupos de estudio.
Total (n= 150) Glucosa alterada
en ayuno (n=50)
Glucosa normal
en ayuno (n=100)
Valor p
rs5400 C/T
Genotipos 0.017 *
CC 142 (95) 44 (88) 98 (98)
CT 8 (5) 6 (12) 2 (2)
TT 0 (0) 0 (0) 0 (0)
Alelos
C 292 (97) 94 (94) 198 (99) 0.018 *
T 8 (3) 6 (6) 2 (1)
*X2 con prueba exacta de Fisher,
rs5400 x=0.010 p=0.92.

12. Cuadro 3. Características somatométricas por genotipo CC y CT de rs5400 del gen
SLC2A2, en población infantil de Chilpancingo, Gro.
Variable C/C (n=142) C/T (n=8) Valor p
Edad (años) 9 (7-10) 11 (10-11) <0.05°
Género
Masculino
Femenino
69 (49)
73 (51)
5 (62.5)
3 (37.5)
0.49 *
Antecedentes obesidad
No
Si
63 (44)
79 (56)
3 (37.5)
5 (62.5)
1.0 *
IMC (kg/m2)
<24.9
18.75 (16-23.1)
122 (86)
24.05 (20.1-24.95)
5 (62.5)
<0.05 °
24.9-28.2
≥ 28.3
13 (9)
7 (5)
3 (37.5)
0 (0)
0.08 *
Antecedentes diabetes
No
Si
83 (58)
59 (42)
3 (37.5)
5 (62.5)
0.29 *
Datos proporcionados en n y porcentajes. *Prueba de X2, medianas (p25p75). °Prueba de Mann Whitney

13. Variable C/C (n=142) C/T (n=8) Valor p
Glucosa (mg/dL) 96 (88-100) 103(97.5-112.5) <0.05 °
Insulina μU/ml
<4.52
4.52-9.54
>9.54
6.6 (3.2-11.5)
50 (35)
48 (34)
44 (31)
13.2 (8.2-15.3)
1 (12.5)
1 (12.5)
6 (75)
<0.05 °
0.06 *
Triglicéridos (mg/dL)
<150
>150
92 (64-144)
108 (76)
34 (24)
130 (66-188)
4 (50)
4 (50)
0.37 °
0.11 *
HOMA (mg/dL) 1.42 (0.72-2.61) 3.16 (2.24-4.25) <0.05 °
Datos proporcionados en n y porcentajes. *Prueba de X2, medianas (p25p75). °Prueba de Mann Whitney
Cuadro 4. Características bioquímicas por genotipo CC y CT de rs5400 del gen SLC2A2, en
población infantil de Chilpancingo, Gro.

14. Célula β normal Célula β susceptible
Obesidad/resistencia a insulina
Ambiente (ac. Grasos/calorías
Actividad física )
Incremento de la función
de células β.
Incremento del
crecimiento de célula β
Tolerancia normal a la
glucosa
Hiperinsulinemia
compensatoria
Disfunción de células β
Apoptosis células β
Glucosa alterada
Diabetes tipo 2
PARTICIPACIÓN DE LAS CÉLULAS β
Kahn et al ., 2006

15. Páncreas
Secreción de insulina
cerebro
hígado
músculo
adipocitos
Ingesta de alimento
Obesidad
Producción de
glucosa
Eficiencia de la
entrada de glucosa
Lipolísis
NEFAs
Resistencia a insulina
Glucosa en plasma
Glucosa en plasma
Resistencia a insulina
Función de la célula β
ALTERACIÓN EN LA LIBERACIÓN DE INSULINA
Kahn et al ., 2006

16. Modelo Crudo Modelo Ajustado°
Variables CC
n (%)
CT
n (%)
OR IC95% p OR IC95% p
Antec. obesidad
NO
SI
63 (44)
79 (56)
3 (38)
5 (63)
1*
1.33
0.31-5.77 0.70 1.45 0.32-6.55 0.63
Antec. diabetes
NO
SI
83 (58)
59 (42)
3 (37)
5 (63)
1*
2.34
0.54-10.19 0.26 2.18 0.48-9.87 0.31
IMC (kg/m2)
<24.9 122 (86) 5 (63) 1*
24.9-28.29 13 (9) 3 (38) 5.63 1.20-26.30 0.03 4.98 0.99-25.13 0.05
>o = 28.3 7 (5) 0 (0) 3.48 0.06-37.82 0.31 3.48 0.06-37.82 0.31
Glucosa (mg/dl)
Normal 98 (69) 2 (25) 1*
Alterada 44 (31) 6 (75) 6.68 1.30-34.42 0.02 6.36 1.18-34.37 0.03
Insulina μU/ml
4.52-9.547 48 (34) 1 (13) 1*
<4.51 50 (35) 1 (13) 0.96 0.05-15.78 0.98 1.26 0.73-21.88 0.87
>9.548 44 (31) 6 (74) 6.54 0.75-56.53 0.09 6.42 0.72-57.14 0.10
Triglicéridos (mg/dl)
<150 108 (76) 4 (50) 1*
>150 34 (24) 4 (50) 3.17 0.75-13.38 0.12 2.63 0.59-11.70 0.20
HOMA
1.06-2.29 49 (35) 1 (13) 1*
< 1.06 49 (35) 1 (13) 1 0.06-16.44 1.0 1.42 0.82-24.69 0.81
>2.29 44 (30) 6 (74) 6.68 0.77-57.69 0.08 6.76 0.76-60.20 0.09
*Categoría de referencia. Reportado el OR (odds ratio) con un IC (intervalo de confianza) del 95% y un valor de p significativo <0.05. °Ajustado por edad y sexo.
Cuadro 5. Asociación de los genotipos de rs5400 con parámetros clínico-
bioquímicos

17. Barroso et al., 2003 modelo
dominante (OR 1.49,
p=0.0059).
Willer et al., 2007 asociado
con DM2, (OR 2.98; IC95%
1.31-6.79, p= 0.014)
Gaulton et al., 2008 asociado
con DM2, (OR 1.28, IC95% 1.11-
1.49, p= 0.0023)

18. GRACIAS