1. Purification, Characterization, and Molecular Cloning of Acidophilic Xylanase from
Penicillium sp. 40
Tetsuya Kimura1, Jun Ito1, Akihiro Kawano1, Takashi Makino1, Hideki Kondo1, Shuichi Karita2,
Kazuo Sakka1, and Kunio Ohmiya1
1 2
Faculty of Bioresources and Center for Molecular Biology and Genetics, Mie University, Tsu,
Mie 514-8507, Japan.
Kloning Gen xyn A
Isolat Penicillium sp. 40 E.coli strain DH5α membawa
plasmid pUC19
Isolasi DNA kromosom Penicillium sp. 40 isolasi DNA pUC19
DNA kromosom dengan gen xyn- A yang akan di klon DNA pUC19
PCR 30 siklus: 60 detik pada 940 C, dipotong dengan enzim
450 C, 720 C, enzim: Taq polimerase EcoRI
Fragmen DNA 220 bp (membawa xyn A) DNA pUC19 linier
Insersi (ligasi fragmen DNA dengan DNA
pUC19) dan transformasi E. coli strain DH5α
E.coli strain DH5α rekombinan
Seleksi: Southern hybridization, fragmen DNA
hasil PCR sebagai pelacak, dilabeli dengan
Digoxigenin-11-dUTP
5 koloni E.coli strain DH5α dengan DNA rekombinan yang membawa gen xyn- A
Analisis restriksi
5 koloni positif dengan sisipan gen yang sama. Fragmen 1,8 kb Xbal diklon dalam pUC19
Sekuensing fragmen DNA
Alignment sekuens dengan gen xyn lain di Gen
Bank menggunakan program BLAST
Sekuens basa nukleotida penyusun asam amino pengkode enzim Xylanase- A dari isolat
Penicillium sp. 40
SUMBER: NGESTI YUHANA (2009), Tugas terstruktur s2 biologi Unsoed page 1