Sérologie de la rubéole

1. S/A
SérologRie de la
rubéole
Réaction d’inhibition de
l’hémagglutination
Par : S / Abdessemed

2. S/A

3. S/A
 La rubéole, maladie bénigne de
l’enfance, devient redoutable chez la
femme enceinte, à cause des lésions
qu’elle peut provoquer chez le foetus.
 Le diagnostic sérologique de la rubéole
et de son immunité peut se faire avec
précision et rapidité, grâce à la réaction
d’inhibition de l’hémagglutination.

4. S/A
Principe
Le virus de la rubéole possède la
propriété d’agglutiner les hématies de
diverses espèces aviaires et notamment
celles du poussin, du pigeon et de l’oie.
Les sérums des sujets préalablement
infectés par le virus rubéoleux
renfermeront des anticorps capable de
se fixer sur ce virus et par conséquent
d’inhiber son pouvoir hémagglutinant.

5. S/A
Réactifs
1. Antigène hémagglutinant prétitré
chaque flacon est à reprendre par 1 ml
d’eau stérile.
2. Sérum témoin positif
Reprendre chaque flacon par 1 ml d’eau
distillée.
Le titre du sérum témoin positif est
indiqué sur la notice figurant à l’intérieur
des boites.

6. S/A
 3.Sérum témoin négatif
Reprendre chaque flacon par 1 ml d’eau
distillée
 4.Tampon RUBABS
 5.suspension de Kaolin
 6.Suspension d’hématies stabilisées
de poules à 50%
 7. Suspension d’hématies stabilisées de
poussins à 0,25%

7. S/A
Matériel
Auto pipette manuelle avec adapteur
0.025 ml
Pipettes compte-gouttes calibrées 0.025
ml
Plaque pour micro agglutination avec
cupules à fond conique.

8. S/A
Mode opératoire
 Traitement des sérums
o Cette opération a pour but d’éliminer les
inhibiteurs non spécifiques et les
hémagglutinines spontanées que peuvent
contenir certains sérums.
o On traitera de la même façon les sérums
témoins positif et négatif qui sont inclus
dans chaque série de réactions.

9. S/A
Dans un tube à hémolyse
introduire :
Sérum 0,1 ml
Tampon RUBABS 0,4 ml
 Suspension de Kaolin 0,5 ml
Suspension d’hématies de poules à 50% 4 gouttes
 Homogénéiser, laisser à une température de 15-250 c, 20 mn, en
agitant 1ou2 fois
 Centrifuger à 2000 t/mn pendant 15 mn et décanter le
surnageant (=dilution au 1/10 du sérum traité) qui pourra être
conservé 4à5 jours à 2-80 c

10. S/A
 Préparation de l’antigène prétitré :
Reprendre l’antigène par 1 ml d’eau
distillée, le diluer extemporanément en
tampon RUBABS (pour chaque sérum à
tester, prévoir environ 0,3 ml de dilution
d’antigène) de manière à introduire 4u HA, le
titre de l’antigène indiqué sur le flacon divisé
par 4, donne le taux de dilution (ex:titre
128,diluer en tampon RUBABS à 1/32)

11. S/A
Réaction d’inhibition de
l’hémagglutination
On inclura un sérum témoin positif et un
sérum témoin négatif dans chaque série
de réactions. Faire aussi un témoin
globules rouges.
Répartir en ml :

12. No des cupules Témoin
S/A
sérum
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Dilutions du sérum….. - 1/10 1/20 1/40 1/80 1/16
0
1/32
0
1/64
0
1/128
0
1/256
0
1/512
0
Témoi
n GR
Tampon RUBABS……
Sérum au 1/10…………
Antigène à (4 u HA )
0.025
0.025
---
----
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.025
0.05
----
-----
Laisser 1 heure à 15-25°C pendant puis ajouter :
Hématies de poussins
à 0,25 %
0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
 Homogénéiser
 Laisser 1 heure à 15-25°C à l’abri des vibrations et des chocs

13. S/A
Lecture
On peut observer au fond des cupules :
Sédimentation des hématies en
« boutons »à contours nets: pas
d’hémagglutination
Formation d’un voile uniforme:
hémagglutination
 Association de voile périphérique et de
« boutons »

14. S/A
Témoin sérum : pas d’hémagglutination
 Témoin hématies : pas
d’hémagglutination
Réaction négative : hémagglutination
totale ou partielle
Réaction positive : pas d’hémagglutination

15. S/A
La présence d’anticorps se traduit par
une inhibition de l’hémagglutination à
des dilutions du sérum plus ou moins
élevées.
Une hémagglutination en présence du
sérum à toutes les dilutions, correspond
à une absence d’anticorps.

16. S/A
Résultats
Taux d’anticorps dans un sérum : inverse
de la plus forte dilution qui entraine une
inhibition complète. Vérifier que le titre
du sérum témoin positif est le même que
celui indiqué sur le flacon (+/- 1 dilution)
et que le sérum témoin négatif n’inhibe
pas l’hémagglutination.

17. S/A
Interprétation :
Les anticorps apparaissent aux environs du
14e jour suivant la contamination. Leur taux
s’élève rapidement puis reste stable
pendant plusieurs mois. Il baissera ensuite,
mais il persistera toujours un taux
d’anticorps résiduels.
En France, 90% environ de la population
adulte présente des anticorps, témoins
d’une contamination au cours de l’enfance.

18. S/A
 Pour affirmer la présence d’anticorps et
de l’immunité, on exige habituellement
une inhibition de l’hémagglutination à une
dilution >1/20.
 La comparaison des taux d’anticorps
dans des sérums prélevés à une quinzaine
de jours d’intervalle permettra de
détecter une rubéole en évolution, à
condition que les deux sérums soient
testés en même temps et que l’on
observe une augmentation du taux
d’anticorps ≥à2 dilutions.

19. S/A
Femme enceinte présentant une
éruption : seule la primo infection
donnant une éruption, la recherche
d’igM s’impose dès que le titre
d’Anticorps IHA est ≥ à 1/40.
Femme enceinte ayant eu un contage
suspect (un sujet est contagieux 8 jours
avant et 8 jours après l’éruption) :

20. S/A
Prélèvement fait avant le 10eme jour
suivant le contage :
 S’il est positif (≥ à 1/40 en IHA) il traduit
une immunité antérieur.
 S’il est négatif (< à 1/40 en IHA) un
deuxième prélèvement s’impose, à réaliser
le 25ème jour environ suivant le contage,
en cas de positivation, la primo infection
est à confirmer immédiatement par la
recherche des igM.

21. S/A
Prélèvement fait plus de dix jours après le
comptage :
La recherche d’igM s’impose
immédiatement si le titre d’Anticorps
est ≥ à 1/40.IHA
Rubéole congénitale : le diagnostic repose
sur la présence d’igM rubéolique, les igG
peuvent être transmises passivement par la
mère.

22. S/A