Este documento presenta los lineamientos y procedimientos de seguridad para el laboratorio de microbiología. Describe los instrumentos y equipos básicos requeridos como el microscopio, autoclave, estufa, refrigerador y otros. También explica los pasos para la limpieza y desinfección adecuada de los materiales de vidrio, como autoclavarlos antes de lavarlos con agua caliente y detergente para su reutilización segura.
1. “AÑO DE LA inversión para el desarrollo rural
y la seguridad alimentaria”
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
FACULTAD DE INGENIERIA INDUSTRIAL
ESCUELA AGROINDUSTRIAL
INFORME N°01
CURSO: Microbiología.
DOCENTE:
TEMA: Reglamento para el laboratorio de microbiología
NOMBRE: Iman Rivas Ronald Nelson
FECHA: 24/09/2013
2. I.
INTRODUCCION
Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y estudiar
microorganismos.
El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estándares técnicos y de seguridad propios de
un laboratorio de Microbiología Clínica.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la
muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para evitar contaminaciones que
den lugar a resultados erróneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaución por su potencial patogenicidad.
Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que
deben ser esterilizados posteriormente.
Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura común sin
haber sido esterilizado previamente.
El el laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de
vertidos:
Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido con
solución desinfectante (alcohol 70%, desinfectante fenólico diluido, etc.). Aclarar con agua
los restos de desinfectante.
En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metálicas, limpiar posteriomente para
evitar el efecto corrosivo.
En caso de derramamientos de material peligroso o formación de aerosoles: evitar
inspiraciones de esos aerosoles, esperar 30 minutos hasta que las partículas se hayan
depositado y limpiar con mascarilla, guantes y otros útiles protectores.
En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y posteriormente
cubrir con papel humedecido con desinfectante. Dejar durante 15 minutos y limpiar. En caso
necesario aclarar con agua.
En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel humedecido
y posteriormente aclarar, cuando sea necesario.
Los laboratorios deberán disponer de los aparatos e instrumental necesario para el correcto
desarrollo de su actividad.
Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiología que
implique la monitorización de los medios e instrumentos, con el fin de asegurar la adecuada
realización de los aislamientos, identificación y caracterización de los patógenos y la
3. realización precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos como
referenciaterapéutica.
El sistema de la calidad deberá contemplar la existencia de registros de formación de
personal.es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de protección
personal en el manejo de equipos y aparatos.
Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la reproducibilidad de
los resultados de las pruebas diagnósticas.
El laboratorio deberá estar bajo la dirección y responsabilidad de un facultativo con la
especialidad correspondiente, legalmente capacitado para realizar aquéllas determinaciones
clínicas que el laboratorio tenga autorizadas.
Un laboratorio de microbiología debe estar implementado con una serie de instrumentos
básicos de acuerdo a los requerimientos científicos actuales.
Los materiales pueden ser de vidrio, de plástico, de aluminio y de acero inoxidable.
Los vidrios empleados para el uso de laboratorio, tienen propiedades especiales, de acuerdo
a la composición que paseen. Las marcas Kimax y Pirex, utilizan el boro – silicato que
toleran temperaturas de hasta 510°C sin deformarse.
Los plásticos presentan diferentes propiedades de acuerdo a la composición resinas que
poseen, no sufren la acción de álcalis ni de ácidos.
Los metales empleados en la fabricación de los instrumentos, son de alta calidad que
toleran la actividad química de los acidos y álcalis y resistentes a la manipulación y
funcionamiento continuo.
No solo es necesario conocer los instrumentos básicos que se utilizan en el laboratorio de
microbiología si no también se debe conocer la forma de cómo darles la limpieza y el
acondicionamiento adecuado
OBJETIVO: reconocimiento y utilidad de los instrumentos de uso frecuente en el laboratorio
de microbiología y conocer los procedimientos para la limpieza y acondicionamiento de los
mismos
II.
MATERIALES Y METODOS
MICROSCOPIO
El microscopio se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos
no visibles a simple vista. Se trata de un instrumento óptico que contiene una o varias lentes
que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción. El
microscopio óptico puede ser monocular, binocular. La observación en estos casos se hace
con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observación se hace con los dos
ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepción de la imagen, más cómoda la
observación y se perciben con mayor nitidez los detalles.
4. Está conformado por tres sistemas:
El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las
lentes que permiten el movimiento para el enfoque.
El sistema óptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce
el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas
El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y
regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio.
El sistema mecánico lo conforman:
BRAZO Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el
revólver. Además sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro.
BASE O PIE.- Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes
del
microscopio.
PLATINA.- Es una pieza metálica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por
la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la
muestra a observar
PINZAS DE SUJECION.- Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría
de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que
permiten un avance longitudinal y transversal de la preparación.
TORNILLO MACROMETRICO: Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia
abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar.
TORNILLO MICROMETRICO O DE ENFOQUE SUAVEREVOLVER.- Parte mecánica de
movimiento giratorio que nos permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se
encuentran en él.
TUBO.- Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos.
CREMALLERA.- Permite que el movimiento de los tornillos macro y micrométrico sea de
mayor o de menor amplitud.
El sistema óptico;
OCULAR.- Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y
amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es
decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para
cada ojo y se les llama binoculares.
OBJETIVOS: Se encuentran incrustados en el revolver Son unos pequeños cilindros
colocados en el revolver que proporciona el poder de resolución del microscopio y
determinan la cantidad total de aumento.
Existen 4 tipos entre los que se encuentran:
5. 1.- La lupa (4 X) que sirve para hacer observaciones a bajo aumento.
2.- El objetivo seco débil (10 X) que se utiliza para localizar la imagen que se va a observar.
3.- El objetivo seco fuerte (40 X) aumenta la imagen anterior, para poder observar se
necesita primero acercar el objetivo al portaobjetos y posteriormente, enfocar el objetivo
hasta que aparezca la imagen.
4.- El objetivo de inmersión (100 X) es un lente especial para observar imágenes tan
pequeñas como las bacterias. Y se requiere del aceite de inmersión para lograr una buena
observación.
La parte óptica del microscopio es la que determina el número de aumentos que presenta la
imagen observada .El aumento total que permite un microscopio óptico se calcula
multiplicando la magnificación que producen el objetivo por la que producen los
oculares.Usando microscopios ópticos avanzados se consiguen unos 1000-1500 aumentos
(objetivo de 100x más oculares de 10x o 15x). Algunos microscopios ópticos tienen lentes
internas que producen aumentos adicionales que tendremos que tener en cuenta para
calcular la magnificación de la imagen que se observa.
El sistema iluminación:
La fuente luminosa consiste en un espejo o una fuente de luz eléctrica que dirige un haz de
luz hacia el condensador.
CONDENSADOR.- Es una lente de gran abertura que permite dirigir o condensar la mayor
parte de los rayos luminosos en la preparación. En nuestro microscopio está integrado en la
platina y tiene un diafragma unido en la parte inferior.
DIAFRAGMA: Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad
para tener una buena iluminación del objeto a observar
FUENTE DE LUZ.- Para observar la muestra microscópica es necesario que ésta se ilumine
con algún tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energía eléctrica
que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.
6. Autoclave
Es el equipo más utilizado para la esterilización mediante calor húmedo. Se realiza en al
autoclave durante 15 ó 20 min, según el volumen, a 115°C ó 121°C, según la naturaleza del
material que se desee esterilizar.
Auto clavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presión (a 1 atmósfera).
Como tiene gran poder de penetración la temperatura y el tiempo utilizado son menores que
los que se emplean con el horno Pasteur (121º C, 15-20 minutos).
Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180º C) durante un tiempo prolongado
(1.5 a 3 horas). Debido a su poca capacidad de penetración se usa para esterilizar vidrio y
metales. Actúa principalmente desnaturalizando las proteínas y secundariamente oxidando
los compuestos celulares.
7. Estufa o incubadora
Es una cámara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.
Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura óptima de
crecimiento (generalmente 35-37º).
Frigorífico o cámaras refrigeradas
Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como
microorganismos generalmente están a una temperatura fija de 4ºC.
8. La balanza
Se usa para pesar colorante, componentes de medio de cultivo, animales, etc
Baño maria
Tienensalidadeairepresentanuntermostato que regula la temperatura del agua presenta un
piso para colocar los materiales que se desea.
9. Bomba de vacío:
Extrae moléculas de gas de un volumen sellado, para crear un vacío parcial.
Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminación de la placa y una lupa,
nos permite observar con mayor nitidez las colonias y por tanto facilita su recuento.
10. Asas de siembra:
Se utilizan para sembrar. Pueden ser metálicas o de plástico, curvas o rectas (para la
siembra por picadura).
Portas y cubres
Para realizar las observaciones al microscopio.
Cucharas y espátulas:
Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo.
12. Pipetas:
Tuboscilíndricos delgados terminadosenpunta,graduados aldécimoo al centésimo demI.Se
empleanen lamedicióndepequeñascantidadesde líquidos
Volumétricas,sereconocen
porpresentarunadilataciónbulbosa
central
con
unas
marcasdeaforamientoconocida,en
elextremo
proximal
angosto
dela
pipeta,selesllamatambiénpipetasdebola,lasmedidasmásconocidasson de 10, 25, 50 y100
ml.
PipetasPasteur:
Confeccionados de varillas de vidrio de diámetro de 4x 20mmde 30 ó 40cm de
longitud.Lacalidaddevidriodebefacilitarreblandamientosalaaccióndirecta de la llama del
mechero, para conseguir por estiramiento la capilaridad deseada. Se empleapara la toma
de pequeños inóculos de siembra.
Placas Petri:
Cajascilíndricas,seempleancomorecipientesdemediosdecultivoparael
cultivoyaislamientodemicroorganismos.Lasmásusadassonlasde10,15ó 20 mm x100 mm
13. Pasos para la limpieza de los materiales de vidrio del laboratorio
1. Se considera como insegura la práctica de sumergir todo el material de vidrio (tubos,
placas, etc) con cultivos descartables o contaminados, dentro de un cubo de
desinfectante, dejándolo durante la noche, lavándolos después o tirándolos. Por es
TODO EL MATERIAL DEBE SER ESTERILZADO EN EL AUTOCLAVE antes de
proceder a su lavado
2. Al sacarlos, aun en caliente quitar los tapones y vaciar el contenido.
3. Lavar con agua caliente y detergente.
4. Enjuagar con agua de caño a chorro continuo hasta la eliminación del detergente o
agente bactericida. Luego con agua tibia y por ultimo tres veces con agua destilada.
5. Dejar escurrir y secar
Las pipetas y otros dispositivos se desinfectan sumergiéndolos en un recipiente de base
ancha que contenga una solución bactericida dicromática o una solución de fenol al 5%
por 24 horas.
Los porta y cubre objetos pueden colocarse en una solución de fenol al 5% por 24
horas. Luego hervirlos en agua jabonosa por 10 minutos.
Cuando el material de vidrio retiene muchas manchas se trata con la mezcla
sulfocrómica
Enjuagar y dejar secar
Pasos para el acondicionamiento de material de laboratorio
1. El material debe estar limpio y totalmente seco
2. Las placas Petri deben ser envueltas en papel Kraft aislados o en grupos. Es preferible
utilizar cilindros metálicos.
3. A los tubos de ensayo o frascos, debe colocárseles tapones de algodón largo y
suficientemente consistente para no permitir el paso de gérmenes.
4. A las pipetas se le coloca en el extremo bucal un pequeño tapón de algodón,
ayudándose con un alambre fino; se elimina cualquier fibra suelta con el flameo, se
cubre la pipeta con una fibra de papel empezando por el extremo delgado para terminar
por el extremo bucal y se asegura la envoltura mediante la torsión del resto de papel
que queda.
5. Es preferible utilizar cilindros metálicos cuando se prepara grandes cantidades de
material.
II.
RESULTADOS
En esta práctica los resultados que obtuvimos es el conocer el material más usado
incluyendo los equipos que se usan en el laboratorio de microbiología y no es solo de
conocer si no también de saber cuál es uso adecuado y para qué sirven.
También se aprendió a como darle su limpieza y acondicionamiento adecuado el cual debe
ser primordial para que el material permanezca sin contaminación al almacenarlos. Todo
material usado se debe dársele su limpieza después de haber sido utilizado.
14. III.
DISCUSIONES
IV.
CONCLUSONES
La mayoría de los instrumentos usados deben pasar por el autoclave donde son
esterilizados para recién poder lavarlos y acondicionarlos en otras palabras no es
limpieza si no pasa por el autoclave.
Todo material para darle un buen acondicionamiento debe estar protegido del polvo
el cual también contiene microorganismos esto se hace al envolverle ya sea el papel
Kraft, algodón al colocarle como tapones o papel.
Además se debe asegurar que antes de empezar a acondicionar el material, este
debe estar limpio y seco.
V.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. http://micropartes.blogspot.com/
2. http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/
3. http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp3.pdf
