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Profesora: Zulay Castillo
♣ La base química de la herencia es el ADN, este se encuentra
organizado en genes .

♣ Esos genes codifican información , que es transcrita o copiada
en forma de ARNm

♣ Es el ARNm quien se encarga de llevar la información para
que sea traducida.


♣ Esos genes no funcionan de manera autónoma, son
dependientes de la regulación por transducción de señales y
productos de los mismos genes
Avery, MacLeod y McCarty (1944):
El DNA contiene la información
genética. Determinación genética del
carácter (tipo) de la cápsula de un
neumococo específico podía ser
transmitida a otro neumococo de un
tipo capsular diferente introduciendo
DNA purificado del primer tipo en el
segundo.
Reglas de Chargaff para ADN de Doble hélice, 1949
En 1953, James Watson y Francis Crick combinaron
los datos químicos y físicos del ADN y propusieron el
modelo estructural del ADN, con las siguientes
características:

♣ Las dos hebras están enrolladas una alrededor de
la otra formando una doble hebra helicoidal

♣ Las dos cadenas de polinucleótidos se mantienen
equidistantes, al tiempo que se enrollan en torno a un
eje imaginario

♣ El esqueleto azúcar-fosfato sigue una trayectoria
helicoidal en la parte exterior de la molécula

♣ Las bases se dirigen hacia el interior. Las de una
hebra enfrentadas con la de la otra (pb) e interactúan
entre si por puentes de H. Cada pb esta en el mismo
plano y este es perpendicular al eje de la hélice
Constituido por 4 desoxinucleótidos:
Desoxiadenosina, desoxiguanosina,
desoxicitidina, desoxitimidina

Los pares de bases están conformados:
    A ----- T   y     C ------- G

Gobierna la síntesis de proteínas, la
información (código genético) está
determinada por la secuencia de
nucleótidos. NO TODO EL ADN
ESTÁ FORMADO POR GENES
♣ El “inicio” se define como 5‘ y el
 “fin” como 3‘

♣ Los términos 5’ y 3’ indican la
 posición de los nucleótidos en el
 esqueleto de ADN en relación
 con la molécula de azúcar

♣ Las dos cadenas de la doble
 hélice están orientadas         en
 direcciones opuestas
Dependen del enrollamiento de la cadena y su
                 orientación:


ADN B: hélice orientada a la
derecha con una distancia de
3,4 Aº entre pares de bases y
10,4 pares de     base   por
vuelta.

Forma predominante in vivo.
ADN A: predomina en los
híbridos   ADN-ARN       es
similar a la B pero mas
compacta    2,3   Aº   entre
pares de bases y 11 pares
de bases por vuelta.
ADN Z: las bases de las dos
cadenas se posicionan mas
hacia la periferia de una
hélice   orientada    a   la
izquierda. Hay una distancia
de 38 Aº entre pares de
bases y 12 bases por vuelta
Constituido por una sola hebra,
sus nucleótidos son: Uridina,
Adenosina, Guanosina, Citdina.

    Es de 5 a 10 veces más
    abundante que el ADN

Tipos
   ARNr
   ARNm
   ARNt
♣ ARN heterogéneo nuclear (hnRNA).

♣ ARN mensajero (mRNA).

♣ ARN ribosómico (rRNA).

♣ ARN de transferencia (tRNA).

♣ ARN citoplasmático pequeño (scRNA)

♣ ARN nuclear pequeño (snARN)
Representa las moléculas precursoras del RNAm que son
transcritas directamente del DNA y que codifican   para una proteína
determinada.
       Incluye secuencias codificantes (exones) y no codificantes
(intrones). Es el RNA que será procesado.



                                                               ARNhn
Representan las moléculas procesadas del hnRNA que codifican
para una proteína determinada. Su secuencia de nucleótidos es traducida
en una secuencia de aminoácidos en el proceso de traducción para
sintetizar una proteína .
        Se incluyen formas muy heterogéneas tanto en tamaño como en
secuencia, existiendo, en general, una molécula de mRNA para cada gen
o grupo de genes que vayan a expresarse
Es el más pequeño con unos 75
nucleótidos de medida. Su función es
transportar los aminoácidos en forma
activada hasta el ribosoma, durante el
proceso de traducción del mRNA. Existe
al menos un tipo de tRNA para cada uno
de los 20 aminoácidos.
        Todos presentan en su extremo
3´ la secuencia de nucleótidos CCA,
independientemente del aminoácido que
transporten. El extremo 3´ constituye el
extremo aceptor del aminoácido.
Es el tipo de ARN predominante en la célula, forma
parte de los ribosomas y por ende participa en la traducción
de proteínas. Actúan como ribozimas en la síntesis
protéica,     teniendo    actividad     peptidil-transferasa,
permitiendo la formación del enlace peptídico.

Hay diferentes tipos en función de sus coeficientes de
sedimentación:

Procariotas: 16 S (Subunidad pequeña 30S); 23 S y 5 S
(Subunidad grande 50S)

Eucariotas: 18S (Subunidad pequeña 40S); 28S, 5,8S y 5S
(subunidad grande 60S)
Participa en el proceso de soldadura de los exones durante
la formación del ARNm. Son pequeñas secuencias de unos
150 nucleótidos de media.


Es un ARN de unos 300 nucleótidos es el RNA que forma
parte del SRP (Signal Recognition Particle) que ejerce una
función específica    en    el   envío   de proteínas   recién
sintetizadas hacia compartimentos intra-o extracelulares.
Secuencias pequeñas de unos 150 nucleótidos de
media. Participan en el proceso de eliminación de
intrones y unión de exones.

       Forma parte de los espliceosomas (SNURPS,
factores de empalme y pre-ARNm), que participan en la
maduración del ARNm
ADN            ARN
 El azúcar es la El azúcar es la
  desoxirribosa      ribosa
 Sus bases son:  Sus bases son:
    A, T, C, G     A, U, C, G
Conformado por   Es solo una tira
    doble tira   de nucleótidos
     Familia         Familia
   homogénea      heterogénea
ADN polimerasas ARN polimerasas
Histonas:
Proteínas   asociadas   con   la
cromatina del DNA.
Nucleosomas:
Unidad estructural construida
con ocho moléculas de histona
y DNA superenrollado con giro
a la izquierda.
1 Bucle son 50x106pb

1 Roseton son 6 bucles

1 Vuelta de espiral son 30 rosetones

2 Cromatidas con 2x10 vueltas de espiral
Proceso por el cual se sintetiza el
ADN     y    se    dice    que    es
semiconservativa      porque     las
cadenas de ADN parental sirven
como moldes para las dos cadenas
complementarias
  Cada molécula generada por el
proceso de replicación contiene
una cadena parenteral intacta y
una nueva de síntesis.
En procariotas el ADN es circular, este proceso de replicación ha sido
ampliamente estudiado en E. coli.

La replicación tiene un lugar de inicio denominado OriC, al cual se
unen aproximadamente 30 moléculas de proteína A y su característica
principal es ser bidireccional.

Con ayuda de proteínas de replicación las hebras parentales se
separan en OriC y se forma una doble horquilla que se desplaza en
ambos sentidos alejándose del origen.
En procariotas la replicación debe ser guiada por la
          intervención de las siguientes enzimas:
     Enzima                                        Función

    Helicasa         Separan las cadenas y desenrollan la doble hélice parental

                     Alivia el superenrrollamiento, en la doble cadena parental por
 Topoisomerasa
                     efecto de la separación de las cadenas

                     Se encargan de elongar la cadena de nucleótidos, siendo la
   Polimerasas       principal pol III todas copian molde 3’----5’, es decir polimerizan en
                     sentido 5’ ---- 3’.

                     Impiden que las cadenas se reasocien y las protegen del ataque
Proteínas de unión
                     de enzimas que escinden los enlaces fosfodiéster en el ADN de
de cadena sencilla
                     cadena única.

     Primasa         Sintetizar el cebador (ARN)
Cebadores:
Para que la ADN polimerasa pueda dar inicio a la síntesis es
necesario un extremo 3’-OH libre que es aportado por el
cebador (oligonucleótido de ARN) y se sintetiza en dirección
5’ 3’ por una primasa (ARN polimerasa) que añade
inicialmente un desoxirribonucleótido al grupo 3’-OH y luego
continúa añadiendo al extremo 3’ de la cadena en
crecimiento.
Eliminación de errores en el apareamiento de
                       bases:
El primer punto de control es ejercido por la Pol III
en su función exonucleasa y tras la replicación
otros mecanismos reparan apareamientos erróneos
que escapan a la primera corrección de errores.
El proceso es similar que en procariotas las
diferencias principales radican en el tamaño del
ADN eucariota y la asociación del ADN eucariota
con las histonas en los nucleosomas.

Hay muchos puntos de origen para la replicación
de este ADN.
Polimerasas en eucariotas:

Existen al menos 9 clases de ADN polimerasas (α,
β, γ, δ, ζ, ε, κ, η, ι) la δ es la principal enzima
replicativa las polimerasas α, β y ε participan en la
reparación del ADN, la polimerasa γ en la replicación
del ADN mitocondrial.
HORQUILLA EN PROCARIOTAS




HORQUILLA EN EUCARIOTAS
En 1968, Reiji Okazaki demostró que la síntesis de
una de las cadenas (conductora) en dirección 5’-3’
hacia la horquilla es continua y la otra cadena
(retrasada)    es   discontinua   y    se   sintetiza    en
fragmentos cortos (fragmentos de Okazaki) en sentido
5’------3’    alejándose   de     la    horquilla       para
posteriormente unirse pero e conjunto el proceso
avanza hacia la horquilla de replicación.
Modelo de acción
 de la helicasa
Desenrollamiento del ADN
        parental




Enrollamiento  de      las
hebras de ADN en la
cabeza de la horquilla de
replicación



Rotura transitoria que sirve
como eslabón giratorio
para permitirla rotación
libre de las hebras de ADN
 Errores de replicación: Alteraciones de la polimerasa en la
selección del nucleótido por ejemplo ocasionado por presencia
excesiva de un nucleótido en particular.

 Daños espontáneos: Ocurre a 37°C, que se pierden bases
espontaneamente quedando sitios apurinicos o apirimidicos que
influyen en la sintesis de la cadena complemantaria.

 Daños endógenos: Producidos por radicales libres.

 Daños exógenos:

       A) Radiaciones ionizantes (rayos X y γ) producen
ruptura de doble cadena, bases dañadas.

       B) Radiaciones UV produce dimerización de pirimidinas
REPARACIÓN DIRECTA: por este mecanismo se reparan metilación de
guanina y en alguno casos dimeros de pirimidinas, no hay intervención de
nucleasas ni ADN polimerasas.

REPARACIÓN INDIRECTA: Con intervención de nucleasas y ADN
polimerasas, se requiere hebra molde perteneciente al mismo cromosoma o
cromosoma homólogo.

 Escisión de base: reparación puntual de alteraciones en bases nitrogenadas,
se origina un sitio AP que luego es retirado y se resintetiza la hebra.

 Escisión de nucleótidos: reparación de alteraciones que distorsionan la
conformación del duplex y que obstaculizan la trascripción y replicación (bases
alteradas o mal apareadas). Una nucleasa escinde una porción de la hebra
próxima al daño y luego se resintetiza.

 Recombinación de regiones homólogas/unión de fragmentos terminales de
hebras rotas: reparan lesiones en las que se afectan ambas hebras o en las
que no existe una hebra que pueda actuar como molde fiable. Mecanismo
complejo.
Proceso de síntesis de ARN. Mecanismo celular por
el cual la información genética contenida en el ADN
es transferida a una molécula de ARN
Durante la transcripción la información genética del ADN es
copiada al ARN mensajero (ARNm):


La transcripción comienza al inicio del gen, en 5' (región del
promotor) y continua hasta el fin del gen en 3'.


La secuencia del ARNm es complementaria a la del molde
de ADN usada para la transcripción, excepto que las bases
de uracilo sustituyen a las timinas.
La nueva molécula de ARN es procesada a través
                         de:

“Splicing”: escisión de los intrones.

“Capping”: modificación del extremo 5’.

Poli-adenilación: adición de adeninas en el
extremo 3’.
Utiliza el molde de ADN para
polimerizar ribonucleótidos 5´trifosfato
(NTPs).
 El crecimiento es en dirección 5´-3´
 No requiere un cebador
 Solo se trascribe un fragmento del
ADN    utilizando    una   sola   hebra,
denominada sin sentido y la otra es la
hebra con sentido.
Fases:
1) Iniciación: tiene lugar en secuencia promotora o
  promotores
2) Elongación: por acción de la ARN Polimerasa
  (ARNP)
3) Terminación:
  a) Independiente del factor
  b) Dependiente del factor
1)  Pre-iniciación:
        Se requiere el reconocimiento de una región promotora, lo cual
se da gracias a los factores de iniciación.

       Esos promotores tienen secuencias                especificas,   muy
conservadas en varias especies (cajas TATA).

       La formación del complejo de transcripción se realiza sobre el
promotor TATA, allí se forma el núcleo del complejo de iniciación.

         Sobre la caja TATA se fija una proteína de unión (TBP) junto con
el factor de transcripción (TFIID). Después, a ellos se unen otros factores
de transcripción específicos

Esto conforma el complejo de pre-iniciación cerrado (Hemivida 10 seg aprox.)
1) Iniciación:
Apertura de hebras de ADN (helicasa), en las cajas
   TATA
Unión de los factores y proteínas de transcripción,
   permitiendo el posicionamiento de ARN pol
   (Subunidad σ) al molde de ADN.
Esto se denomina complejo abierto. Una vez formado
   la ARN pol comienza a unir rNTPs, culminando de
   esta manera la fase de iniciación.

Cuando la cadena transcrita alcanza unos 23
nucleótidos se inicia la elongación
2) Elongación:
 Sitio para los rNTP, semisaturación de 10μM.


 Las   primeras     reacciones   de   formación    de   enlaces
fosfodiester tienen eficiencia baja. Aborto de 2 a 9 residuos.


 Disociación de la subunidad σ y se continua por la
polimerasa “core”.
MODELO DE BURBUJA
MODELO DE
 GUSANO
3) Terminación:
a) Independiente del factor (características):
 Dos segmentos simétricos ricos en GC, que en el
trasncrito forman un bucle troncal.
 Trayecto posterior de 4 a 8 residuos de A.

La ARNP reduce la velocidad o realiza una pausa. La
estabilidad de los pbde GC hace que el molde sea
difícil de desenrollar.
b) Dependiente del factor ρ:
Características:
 Se lleva a cabo por una proteína con actividad ADN-ARN
helicasa. La proteína ρ (rho) se une al transcrito en
formación cuando la ARNP realiza una pausa.


 La pausa de la ARNP en lugares de terminación
dependiente de ρ posiblemente por acción de la proteína
NusA.
 Síntesis de proteínas guiada por un molde de ARNm.


 No es más que la etapa final de la expresión génica.


 Es sólo el primer paso en la constitución de una proteína
funcional.


 Todos los ARNm se leen en dirección 5´- 3´.


 Las cadenas polipeptídicas se sintetizan desde el extremo
amino terminal al carboxi terminal.
 Cada aminoácido viene codificado por tres bases (codón)
en el ARNm.


 Tiene lugar en los ribosomas.


 Implica la interacción de tres tipos de moléculas de ARN
(ARNm, ARNt y ARNr).


 El ARNt sirve de adaptador entre el ARNm y los
aminoácidos de la proteína.
Etapas:
1) Iniciación: unión del ARNt iniciador y del ARNm a la
   subunidad pequeña del ribosoma.


2) Elongación: unión de varios aminoácidos a la cadena
   polipeptídica creciente.


1) Terminación: se encuentra el codón de terminación y se
   disocia el ribosoma liberando la cadena polipeptídica
   sintetizada.
Factores de traducción. Proteínas que intervienen en cada
             una de las etapas de la traducción.




IF: factor de iniciación.
EF: factor de elongación.
RF: factor de liberación.
Inicio    de       la    traducción   en   células
procariotas:
1)Unión de tres factores de iniciación (IF-1,
2 y 3) a la subunidad pequeña ribosómica.


2)Unión        a    la    subunidad    ribosómica
pequeña del ARNm y del ARNt iniciador
(fMet). Liberación de IF-3 y unión de la
subunidad ribosómica grande.


3)Unión de la subunidad ribosómica grande
al complejo por hidrólisis del GTP, con
liberación de IF-1 e IF-2 unido a GDP.
Inicio de la traducción en células eucariotas.
1)Unión de tres factores de iniciación (eIF-3, 1 y 1A)
a la subunidad pequeña ribosómica.


2)Llegada al ribosoma del ARNt iniciador (Met) por
el eIF-2 (formando complejo con GTP) y del ARNm
por varios IF.


3)Reconocimiento del codón de iniciación (AUG)
con hidrólisis de ATP.


4)Liberación de eIF-2 y otros IF por hidrólisis de
GTP.


5)Unión de la subunidad ribosómica grande al
complejo.
Etapas de la elongación de la
traducción.

1)Unión del ARNt iniciador
(fMet o Met) al sitio P (peptidil)
del ribosoma.

2)Llegada de un segundo
aminoacil al sitio A (aminoacil)
del ribosoma dirigido por EF-Tu
(unido a GTP) que se libera
luego de la hidrólisis del GTP.
Etapas de la elongación de la traducción.

3)Formación del enlace peptídico y
transferencia del fMet al aminoacil ARNt
ubicado en el sitio A.

4) Translocación del peptidil ala-met al sitio P
y la del ARNt libre al sitio E (liberación).

El sitio A queda vacío, ocasionado por el
desplazamiento del ribosoma tres nucleótidos
a través del ARNm mediado por EF-G por
hidrólisis de GTP.
Terminación      de      la
traducción.

1) Reconocimiento de un
   codón de terminación
   (ej: UAA) por un factor
   de liberación y no por
   un ARNt.

2) Liberación de la cadena
   polipeptídica completa y
   disociación del ARNt y
   ARNm del ribosoma
 El código está organizado en tripletes o codones


 El código genético es degenerado: existen más tripletes o codones que aminoácidos,
de forma que un determinado aminoácido puede estar codificado por más de un triplete.


 El código genético es no solapado o sin superposiciones: un nucleótido solamente
pertenece a un único triplete.


 La lectura es "sin comas": el cuadro de lectura de los tripletes se realiza de forma
continua , sin que existan espacios en blanco.


 El código genético nuclear es universal: el mismo triplete en diferentes especies codifica
para el mismo aminoácido. La principal excepción a la universalidad es el código genético
mitocondrial
Con 3 bases hay 64 combinaciones posibles
                     (redundancia)

¿Cuál es la secuencia de aminoácidos que se traduce de
  esta secuencia de ARN?

                    CCA CAA GAC UAG

   a) Pro GIn Asp Stop        b) Pro His Asp Trp
   c) His GIn Asp Stop        d) Pro GIn His Stop
DADAS LAS HEBRAS CODIFICANTES:
5--TGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATG --3 

    5--TGCATATCGTAGGCGATAACAATATCAGTCCATCAGCAGCTATC --3 


a) REALICE LA PLANTILLA

b) ARNm

c) TRADUZCA EL TRANSCRITO

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Unidad XIV biologia molecular

  • 2. ♣ La base química de la herencia es el ADN, este se encuentra organizado en genes . ♣ Esos genes codifican información , que es transcrita o copiada en forma de ARNm ♣ Es el ARNm quien se encarga de llevar la información para que sea traducida. ♣ Esos genes no funcionan de manera autónoma, son dependientes de la regulación por transducción de señales y productos de los mismos genes
  • 3. Avery, MacLeod y McCarty (1944): El DNA contiene la información genética. Determinación genética del carácter (tipo) de la cápsula de un neumococo específico podía ser transmitida a otro neumococo de un tipo capsular diferente introduciendo DNA purificado del primer tipo en el segundo.
  • 4. Reglas de Chargaff para ADN de Doble hélice, 1949
  • 5.
  • 6. En 1953, James Watson y Francis Crick combinaron los datos químicos y físicos del ADN y propusieron el modelo estructural del ADN, con las siguientes características: ♣ Las dos hebras están enrolladas una alrededor de la otra formando una doble hebra helicoidal ♣ Las dos cadenas de polinucleótidos se mantienen equidistantes, al tiempo que se enrollan en torno a un eje imaginario ♣ El esqueleto azúcar-fosfato sigue una trayectoria helicoidal en la parte exterior de la molécula ♣ Las bases se dirigen hacia el interior. Las de una hebra enfrentadas con la de la otra (pb) e interactúan entre si por puentes de H. Cada pb esta en el mismo plano y este es perpendicular al eje de la hélice
  • 7.
  • 8. Constituido por 4 desoxinucleótidos: Desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxicitidina, desoxitimidina Los pares de bases están conformados: A ----- T y C ------- G Gobierna la síntesis de proteínas, la información (código genético) está determinada por la secuencia de nucleótidos. NO TODO EL ADN ESTÁ FORMADO POR GENES
  • 9. ♣ El “inicio” se define como 5‘ y el “fin” como 3‘ ♣ Los términos 5’ y 3’ indican la posición de los nucleótidos en el esqueleto de ADN en relación con la molécula de azúcar ♣ Las dos cadenas de la doble hélice están orientadas en direcciones opuestas
  • 10. Dependen del enrollamiento de la cadena y su orientación: ADN B: hélice orientada a la derecha con una distancia de 3,4 Aº entre pares de bases y 10,4 pares de base por vuelta. Forma predominante in vivo.
  • 11. ADN A: predomina en los híbridos ADN-ARN es similar a la B pero mas compacta 2,3 Aº entre pares de bases y 11 pares de bases por vuelta.
  • 12. ADN Z: las bases de las dos cadenas se posicionan mas hacia la periferia de una hélice orientada a la izquierda. Hay una distancia de 38 Aº entre pares de bases y 12 bases por vuelta
  • 13. Constituido por una sola hebra, sus nucleótidos son: Uridina, Adenosina, Guanosina, Citdina. Es de 5 a 10 veces más abundante que el ADN Tipos ARNr ARNm ARNt
  • 14. ♣ ARN heterogéneo nuclear (hnRNA). ♣ ARN mensajero (mRNA). ♣ ARN ribosómico (rRNA). ♣ ARN de transferencia (tRNA). ♣ ARN citoplasmático pequeño (scRNA) ♣ ARN nuclear pequeño (snARN)
  • 15. Representa las moléculas precursoras del RNAm que son transcritas directamente del DNA y que codifican para una proteína determinada. Incluye secuencias codificantes (exones) y no codificantes (intrones). Es el RNA que será procesado. ARNhn
  • 16. Representan las moléculas procesadas del hnRNA que codifican para una proteína determinada. Su secuencia de nucleótidos es traducida en una secuencia de aminoácidos en el proceso de traducción para sintetizar una proteína . Se incluyen formas muy heterogéneas tanto en tamaño como en secuencia, existiendo, en general, una molécula de mRNA para cada gen o grupo de genes que vayan a expresarse
  • 17. Es el más pequeño con unos 75 nucleótidos de medida. Su función es transportar los aminoácidos en forma activada hasta el ribosoma, durante el proceso de traducción del mRNA. Existe al menos un tipo de tRNA para cada uno de los 20 aminoácidos. Todos presentan en su extremo 3´ la secuencia de nucleótidos CCA, independientemente del aminoácido que transporten. El extremo 3´ constituye el extremo aceptor del aminoácido.
  • 18. Es el tipo de ARN predominante en la célula, forma parte de los ribosomas y por ende participa en la traducción de proteínas. Actúan como ribozimas en la síntesis protéica, teniendo actividad peptidil-transferasa, permitiendo la formación del enlace peptídico. Hay diferentes tipos en función de sus coeficientes de sedimentación: Procariotas: 16 S (Subunidad pequeña 30S); 23 S y 5 S (Subunidad grande 50S) Eucariotas: 18S (Subunidad pequeña 40S); 28S, 5,8S y 5S (subunidad grande 60S)
  • 19. Participa en el proceso de soldadura de los exones durante la formación del ARNm. Son pequeñas secuencias de unos 150 nucleótidos de media. Es un ARN de unos 300 nucleótidos es el RNA que forma parte del SRP (Signal Recognition Particle) que ejerce una función específica en el envío de proteínas recién sintetizadas hacia compartimentos intra-o extracelulares.
  • 20. Secuencias pequeñas de unos 150 nucleótidos de media. Participan en el proceso de eliminación de intrones y unión de exones. Forma parte de los espliceosomas (SNURPS, factores de empalme y pre-ARNm), que participan en la maduración del ARNm
  • 21. ADN ARN El azúcar es la El azúcar es la desoxirribosa ribosa Sus bases son: Sus bases son: A, T, C, G A, U, C, G Conformado por Es solo una tira doble tira de nucleótidos Familia Familia homogénea heterogénea ADN polimerasas ARN polimerasas
  • 22. Histonas: Proteínas asociadas con la cromatina del DNA. Nucleosomas: Unidad estructural construida con ocho moléculas de histona y DNA superenrollado con giro a la izquierda.
  • 23. 1 Bucle son 50x106pb 1 Roseton son 6 bucles 1 Vuelta de espiral son 30 rosetones 2 Cromatidas con 2x10 vueltas de espiral
  • 24.
  • 25.
  • 26. Proceso por el cual se sintetiza el ADN y se dice que es semiconservativa porque las cadenas de ADN parental sirven como moldes para las dos cadenas complementarias Cada molécula generada por el proceso de replicación contiene una cadena parenteral intacta y una nueva de síntesis.
  • 27. En procariotas el ADN es circular, este proceso de replicación ha sido ampliamente estudiado en E. coli. La replicación tiene un lugar de inicio denominado OriC, al cual se unen aproximadamente 30 moléculas de proteína A y su característica principal es ser bidireccional. Con ayuda de proteínas de replicación las hebras parentales se separan en OriC y se forma una doble horquilla que se desplaza en ambos sentidos alejándose del origen.
  • 28. En procariotas la replicación debe ser guiada por la intervención de las siguientes enzimas: Enzima Función Helicasa Separan las cadenas y desenrollan la doble hélice parental Alivia el superenrrollamiento, en la doble cadena parental por Topoisomerasa efecto de la separación de las cadenas Se encargan de elongar la cadena de nucleótidos, siendo la Polimerasas principal pol III todas copian molde 3’----5’, es decir polimerizan en sentido 5’ ---- 3’. Impiden que las cadenas se reasocien y las protegen del ataque Proteínas de unión de enzimas que escinden los enlaces fosfodiéster en el ADN de de cadena sencilla cadena única. Primasa Sintetizar el cebador (ARN)
  • 29. Cebadores: Para que la ADN polimerasa pueda dar inicio a la síntesis es necesario un extremo 3’-OH libre que es aportado por el cebador (oligonucleótido de ARN) y se sintetiza en dirección 5’ 3’ por una primasa (ARN polimerasa) que añade inicialmente un desoxirribonucleótido al grupo 3’-OH y luego continúa añadiendo al extremo 3’ de la cadena en crecimiento.
  • 30.
  • 31.
  • 32. Eliminación de errores en el apareamiento de bases: El primer punto de control es ejercido por la Pol III en su función exonucleasa y tras la replicación otros mecanismos reparan apareamientos erróneos que escapan a la primera corrección de errores.
  • 33.
  • 34. El proceso es similar que en procariotas las diferencias principales radican en el tamaño del ADN eucariota y la asociación del ADN eucariota con las histonas en los nucleosomas. Hay muchos puntos de origen para la replicación de este ADN.
  • 35. Polimerasas en eucariotas: Existen al menos 9 clases de ADN polimerasas (α, β, γ, δ, ζ, ε, κ, η, ι) la δ es la principal enzima replicativa las polimerasas α, β y ε participan en la reparación del ADN, la polimerasa γ en la replicación del ADN mitocondrial.
  • 37.
  • 38. En 1968, Reiji Okazaki demostró que la síntesis de una de las cadenas (conductora) en dirección 5’-3’ hacia la horquilla es continua y la otra cadena (retrasada) es discontinua y se sintetiza en fragmentos cortos (fragmentos de Okazaki) en sentido 5’------3’ alejándose de la horquilla para posteriormente unirse pero e conjunto el proceso avanza hacia la horquilla de replicación.
  • 39. Modelo de acción de la helicasa
  • 40. Desenrollamiento del ADN parental Enrollamiento de las hebras de ADN en la cabeza de la horquilla de replicación Rotura transitoria que sirve como eslabón giratorio para permitirla rotación libre de las hebras de ADN
  • 41.  Errores de replicación: Alteraciones de la polimerasa en la selección del nucleótido por ejemplo ocasionado por presencia excesiva de un nucleótido en particular.  Daños espontáneos: Ocurre a 37°C, que se pierden bases espontaneamente quedando sitios apurinicos o apirimidicos que influyen en la sintesis de la cadena complemantaria.  Daños endógenos: Producidos por radicales libres.  Daños exógenos: A) Radiaciones ionizantes (rayos X y γ) producen ruptura de doble cadena, bases dañadas. B) Radiaciones UV produce dimerización de pirimidinas
  • 42. REPARACIÓN DIRECTA: por este mecanismo se reparan metilación de guanina y en alguno casos dimeros de pirimidinas, no hay intervención de nucleasas ni ADN polimerasas. REPARACIÓN INDIRECTA: Con intervención de nucleasas y ADN polimerasas, se requiere hebra molde perteneciente al mismo cromosoma o cromosoma homólogo.  Escisión de base: reparación puntual de alteraciones en bases nitrogenadas, se origina un sitio AP que luego es retirado y se resintetiza la hebra.  Escisión de nucleótidos: reparación de alteraciones que distorsionan la conformación del duplex y que obstaculizan la trascripción y replicación (bases alteradas o mal apareadas). Una nucleasa escinde una porción de la hebra próxima al daño y luego se resintetiza.  Recombinación de regiones homólogas/unión de fragmentos terminales de hebras rotas: reparan lesiones en las que se afectan ambas hebras o en las que no existe una hebra que pueda actuar como molde fiable. Mecanismo complejo.
  • 43.
  • 44. Proceso de síntesis de ARN. Mecanismo celular por el cual la información genética contenida en el ADN es transferida a una molécula de ARN
  • 45. Durante la transcripción la información genética del ADN es copiada al ARN mensajero (ARNm): La transcripción comienza al inicio del gen, en 5' (región del promotor) y continua hasta el fin del gen en 3'. La secuencia del ARNm es complementaria a la del molde de ADN usada para la transcripción, excepto que las bases de uracilo sustituyen a las timinas.
  • 46. La nueva molécula de ARN es procesada a través de: “Splicing”: escisión de los intrones. “Capping”: modificación del extremo 5’. Poli-adenilación: adición de adeninas en el extremo 3’.
  • 47. Utiliza el molde de ADN para polimerizar ribonucleótidos 5´trifosfato (NTPs).  El crecimiento es en dirección 5´-3´  No requiere un cebador  Solo se trascribe un fragmento del ADN utilizando una sola hebra, denominada sin sentido y la otra es la hebra con sentido.
  • 48. Fases: 1) Iniciación: tiene lugar en secuencia promotora o promotores 2) Elongación: por acción de la ARN Polimerasa (ARNP) 3) Terminación: a) Independiente del factor b) Dependiente del factor
  • 49. 1) Pre-iniciación: Se requiere el reconocimiento de una región promotora, lo cual se da gracias a los factores de iniciación. Esos promotores tienen secuencias especificas, muy conservadas en varias especies (cajas TATA). La formación del complejo de transcripción se realiza sobre el promotor TATA, allí se forma el núcleo del complejo de iniciación. Sobre la caja TATA se fija una proteína de unión (TBP) junto con el factor de transcripción (TFIID). Después, a ellos se unen otros factores de transcripción específicos Esto conforma el complejo de pre-iniciación cerrado (Hemivida 10 seg aprox.)
  • 50. 1) Iniciación: Apertura de hebras de ADN (helicasa), en las cajas TATA Unión de los factores y proteínas de transcripción, permitiendo el posicionamiento de ARN pol (Subunidad σ) al molde de ADN. Esto se denomina complejo abierto. Una vez formado la ARN pol comienza a unir rNTPs, culminando de esta manera la fase de iniciación. Cuando la cadena transcrita alcanza unos 23 nucleótidos se inicia la elongación
  • 51.
  • 52. 2) Elongación:  Sitio para los rNTP, semisaturación de 10μM.  Las primeras reacciones de formación de enlaces fosfodiester tienen eficiencia baja. Aborto de 2 a 9 residuos.  Disociación de la subunidad σ y se continua por la polimerasa “core”.
  • 55. 3) Terminación: a) Independiente del factor (características):  Dos segmentos simétricos ricos en GC, que en el trasncrito forman un bucle troncal.  Trayecto posterior de 4 a 8 residuos de A. La ARNP reduce la velocidad o realiza una pausa. La estabilidad de los pbde GC hace que el molde sea difícil de desenrollar.
  • 56. b) Dependiente del factor ρ: Características:  Se lleva a cabo por una proteína con actividad ADN-ARN helicasa. La proteína ρ (rho) se une al transcrito en formación cuando la ARNP realiza una pausa.  La pausa de la ARNP en lugares de terminación dependiente de ρ posiblemente por acción de la proteína NusA.
  • 57.
  • 58.
  • 59.
  • 60.  Síntesis de proteínas guiada por un molde de ARNm.  No es más que la etapa final de la expresión génica.  Es sólo el primer paso en la constitución de una proteína funcional.  Todos los ARNm se leen en dirección 5´- 3´.  Las cadenas polipeptídicas se sintetizan desde el extremo amino terminal al carboxi terminal.
  • 61.  Cada aminoácido viene codificado por tres bases (codón) en el ARNm.  Tiene lugar en los ribosomas.  Implica la interacción de tres tipos de moléculas de ARN (ARNm, ARNt y ARNr).  El ARNt sirve de adaptador entre el ARNm y los aminoácidos de la proteína.
  • 62.
  • 63. Etapas: 1) Iniciación: unión del ARNt iniciador y del ARNm a la subunidad pequeña del ribosoma. 2) Elongación: unión de varios aminoácidos a la cadena polipeptídica creciente. 1) Terminación: se encuentra el codón de terminación y se disocia el ribosoma liberando la cadena polipeptídica sintetizada.
  • 64. Factores de traducción. Proteínas que intervienen en cada una de las etapas de la traducción. IF: factor de iniciación. EF: factor de elongación. RF: factor de liberación.
  • 65. Inicio de la traducción en células procariotas: 1)Unión de tres factores de iniciación (IF-1, 2 y 3) a la subunidad pequeña ribosómica. 2)Unión a la subunidad ribosómica pequeña del ARNm y del ARNt iniciador (fMet). Liberación de IF-3 y unión de la subunidad ribosómica grande. 3)Unión de la subunidad ribosómica grande al complejo por hidrólisis del GTP, con liberación de IF-1 e IF-2 unido a GDP.
  • 66. Inicio de la traducción en células eucariotas. 1)Unión de tres factores de iniciación (eIF-3, 1 y 1A) a la subunidad pequeña ribosómica. 2)Llegada al ribosoma del ARNt iniciador (Met) por el eIF-2 (formando complejo con GTP) y del ARNm por varios IF. 3)Reconocimiento del codón de iniciación (AUG) con hidrólisis de ATP. 4)Liberación de eIF-2 y otros IF por hidrólisis de GTP. 5)Unión de la subunidad ribosómica grande al complejo.
  • 67. Etapas de la elongación de la traducción. 1)Unión del ARNt iniciador (fMet o Met) al sitio P (peptidil) del ribosoma. 2)Llegada de un segundo aminoacil al sitio A (aminoacil) del ribosoma dirigido por EF-Tu (unido a GTP) que se libera luego de la hidrólisis del GTP.
  • 68. Etapas de la elongación de la traducción. 3)Formación del enlace peptídico y transferencia del fMet al aminoacil ARNt ubicado en el sitio A. 4) Translocación del peptidil ala-met al sitio P y la del ARNt libre al sitio E (liberación). El sitio A queda vacío, ocasionado por el desplazamiento del ribosoma tres nucleótidos a través del ARNm mediado por EF-G por hidrólisis de GTP.
  • 69. Terminación de la traducción. 1) Reconocimiento de un codón de terminación (ej: UAA) por un factor de liberación y no por un ARNt. 2) Liberación de la cadena polipeptídica completa y disociación del ARNt y ARNm del ribosoma
  • 70.  El código está organizado en tripletes o codones  El código genético es degenerado: existen más tripletes o codones que aminoácidos, de forma que un determinado aminoácido puede estar codificado por más de un triplete.  El código genético es no solapado o sin superposiciones: un nucleótido solamente pertenece a un único triplete.  La lectura es "sin comas": el cuadro de lectura de los tripletes se realiza de forma continua , sin que existan espacios en blanco.  El código genético nuclear es universal: el mismo triplete en diferentes especies codifica para el mismo aminoácido. La principal excepción a la universalidad es el código genético mitocondrial
  • 71.
  • 72. Con 3 bases hay 64 combinaciones posibles (redundancia) ¿Cuál es la secuencia de aminoácidos que se traduce de esta secuencia de ARN? CCA CAA GAC UAG a) Pro GIn Asp Stop b) Pro His Asp Trp c) His GIn Asp Stop d) Pro GIn His Stop
  • 73. DADAS LAS HEBRAS CODIFICANTES: 5--TGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATG --3  5--TGCATATCGTAGGCGATAACAATATCAGTCCATCAGCAGCTATC --3  a) REALICE LA PLANTILLA b) ARNm c) TRADUZCA EL TRANSCRITO