INSTRUÇÕES DE
UTILIZAÇÃO – MEIOS EM
PLACAS PRONTOS A
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PA-254014.06 Rev.: April 2013
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  1. 1. INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO – MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR PA-254014.06 Rev.: April 2013 PA-254014.06 - 1 - BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified UTILIZAÇÃO PRETENDIDA O BD EMB Agar, Modified (formulação de Holt-Harris e Teague) é um meio para diferenciação ligeiramente selectivo utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram- negativos (Enterobacteriaceae e outros bastonetes gram-negativos) provenientes de amostras clínicas. PRINCIPIO E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO Método microbiológico O agar EMB baseia-se numa formulação descrita inicialmente por Holt-Harris e Teague em 1916. 1 A formulação original de Holt-Harris e Teague foi modificada por Levine. 2 A principal diferença entre as duas consiste na inclusão de sacarose no meio de Holt-Harris e Teague. A sacarose é fermentada por determinados organismos entéricos de forma mais rápida do que a lactose.3 O BD EMB Agar, Modified contém corantes de eosina Y e azul-de-metileno que inibe as bactérias gram-positivas num determinado grau. Os corantes funcionam também como indicadores de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose por microorganismos. Os coliformes produzem colónias pretas-azuladas, enquanto as colónias de Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente. As colónias de Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à rápida fermentação da lactose. O agar EMB (com ou sem sacarose) é incluído no conjunto de meios de isolamento de selectividade reduzida para a Salmonella de amostras fecais e de outro tipo.4 As bactérias gram-positivas como, por exemplo, estafilococos, leveduras e estreptococos fecais, poderão desenvolver-se neste meio e formar colónias punctiformes ou poderão ficar inibidas. REAGENTES BD EMB Agar, Modified Fórmula* por Litro de Água Purificada Hidrolisado pancreático de gelatina 10,0 g Lactose 5,0 Sacarose 5,0 Fosfato dipotássio 2,0 Agar 13,5 Eosina Y 0,4 Azul-de-metileno 0,065 pH 7,2 ± 0,2 *Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho. PRECAUÇÕES . Apenas para uso profissional. Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração, secura, fissuras ou outros sinais de deterioração. Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de eliminação do produto usado.
  2. 2. PA-254014.06 - 2 - ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8°C, dentro do invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e incubadas durante o tempo de incubação recomendado. As placas são fornecidas em pilhas de 10 placas e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8°C. CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO). Incubar as placas em condições aeróbias, a uma temperatura de 35 ± 2°C, durante 18 a 24 horas. Estirpes Resultados de Crescimento Escherichia coli ATCC 25922 Crescimento bom a excelente; colónias pretas- azuladas com reflexo verde metalizado Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Crescimento bom a excelente; colónias cinzentas claras a âmbar Shigella flexneri ATCC 12022 Crescimento razoável a bom; colónias incolores a âmbar claro Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inibição parcial; colónias incolores Não inoculadas Cor púrpura com um tom laranja-esverdeado; ligeiramente opalescente PROCEDIMENTO Materiais fornecidos BD EMB Agar, Modified (placas Stacker de 90 mm). Microbiologicamente controlados. Materiais não fornecidos Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento de laboratório conforme necessário. Tipos de amostra Este produto é um meio selectivo para bastonetes gram-negativos que pode ser utilizado para o isolamento de bacilos entéricos gram-negativos provenientes de todos os tipos de amostras clínicas (consultar também CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO). Procedimento do teste Espalhar a amostra para cultura imediatamente após esta ser recebida no laboratório. A placa para cultura é usada principalmente para isolar culturas puras das amostras que contêm flora misturada. Em alternativa, se o material estiver a ser cultivado directamente de uma zaragatoa, fazer rolar a zaragatoa sobre uma pequena área da superfície, na extremidade; em seguida, esfregar a partir desta área inoculada. Também deve ser feito o esfregaço de um meio não selectivo, como é o caso do agar de Columbia com sangue de ovelha a 5%, para fornecer uma indicação dos outros organismos presentes na amostra. Incubar as placas, ao abrigo da luz, a uma temperatura de 35 ± 2°C, durante 18 a 24 horas. Resultados A morfologia típica das colónias é a seguinte: Organismos BD EMB Agar, Modified E. coli De grande dimensão, pretas-azuladas, reflexo verde metalizado Enterobacter/Klebsiella De grande dimensão, mucóides, pretas-azuladas Proteus De grande dimensão, incolores Salmonella De grande dimensão, incolores a âmbar Shigella De grande dimensão, incolores a âmbar
  3. 3. PA-254014.06 - 3 - Pseudomonas Irregulares, incolores Bactérias gram-positivas Nenhum indício de crescimento a crescimento ligeiro CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO No agar BD EMB Agar, Modified, verificar-se-á o crescimento de organismos da família Enterobacteriaceae e uma variedade de outros bastonetes gram-negativos como, por exemplo, Pseudomonas e Aeromonas.3-5 Muitas vezes, os organismos gram-positivos não são completamente inibidos neste meio. Embora possam ser realizados alguns testes de diagnóstico directamente neste meio, é necessária a realização de testes bioquímicos para uma completa identificação e, se indicado, a realização de testes imunológicos usando culturas puras. Consulte a bibliografia apropriada. 3-5 BIBLIOGRAFIA 1. Holt-Harris, J.E., and O. Teague. 1916. A new culture medium for the isolation of Bacillus typhosus from stools. J. Infect. Dis. 18:596-600. 2. Levine, M. 1918. Differentiation of B. coli and B. aerogenes on a simplified eosin-methylene blue agar. J. Infect. Dis. 23:43-47. 3. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation – cultivation – maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London. 4. Farmer III, J.J. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Bopp, C.A., Brenner, F.W., Fields, P.I., Wells, J.G., and N.A. Strockbine. 2003. Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. EMBALAGEM / APRESENTAÇÃO BD EMB Agar, Modified Cat. No. 254014 Meios em placas prontos a usar, 20 placas Cat. No. 254073 Meios em placas prontos a usar, 120 placas INFORMAÇÕES ADICIONAIS Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 – 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD

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