1. ANTIBIOGRAMA Dra. Natalia Izurieta Cergneux PRÁCTICA NO. 4 - LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA Y MICOLOGÍA

2. DEFINICIÓN Prueba in vitro que determina la sensibilidad de un microorganismo frente a diferentes antibióticos. SENSIBLE RESISTENTE

3. OBJETIVOS

4. MÉTODOS - ANTIBIOGRAMA

6. CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA Es la mínima concentración de un antimicrobiano que inhibe la multiplicación y crecimiento visible de una cepa bacteriana en un medio de cultivo.

7. CONCENTRACIÓN BACTERICIDA MÍNIMA Para determinar la CBM se seleccionan tubos donde no haya turbidez y se siembra el contenido en un medio de cultivo sólido y se observa si hay o no crecimiento. LA CBM corresponde a aquella dilución donde no hay crecimiento bacteriano.

8. CIM Y CBM CONTROL SIN AB AB AB AB AB AB S/C S/C S/C S/C C/C C/C C/C C/C S/C C/C S/C C/C

9. MÉTODO DE DILUCION Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones decrecientes de un mismo antibiótico. Se observa el crecimiento de los microorganismos mediante la aparición de turbidez

10. MÉTODO DE DIFUSIÓN Es el método más empleado en el laboratorio. Se trabaja a partir de un microorganismo debidamente aislado e identificado (CULTIVO PURO)

11. MÉTODO DE DIFUSIÓNPRINCIPIO DEL MÉTODO

13. SELECCIÓN DE LAS COLONIAS Es el paso más importante. Se selecciona de 3 a 5 colonias del microorganismo.

15. PREPARACIÓN DEL INÓCULO Y ESTANDARIZACIÓN DE LA SUSPENSIÓN En ambos métodos, la turbidez de la suspensión debe ser estandarizada al estándar 0,5 de McFarland (que corresponde a aproximadamente 1,5 X 10 -8 CFU/ml).

16. SUSPENSIÓN DIRECTA DE LAS COLONIAS Se trabaja con cultivos jóvenes. En esta técnica se estandariza el inóculo al mismo tiempo que se prepara la suspensión. SS ó CALDO COMÚN 3 A 5 COLONIAS AJUSTAR TURBIDEZ 0,5 ESCALA DE McFARLAND ESTABILIZAR 15 MIN.

17. FASE LOGARÍTMICA DE CRECIMIENTO Se usa para la mayoría de microorganismos de rápido crecimiento. 3 A 5 COLONIAS SS ó CALDO COMÚN INCUBACIÓN A 35 0 C 2-6 HORAS AJUSTAR TURBIDEZ 0,5 ESCALA DE McFARLAND

19. PREPARACIÓN PARA LA INOCULACIÓN Losdiscos deben permanecer a temperatura ambiente durante 1-2 horas. El agar de elección para esta prueba es el agar Mueller-Hinton (MHA).

20. INOCULACIÓN DE LA PLACA 2 1 3

21. INOCULACIÓN DE LA PLACA 1ml de inóculo

22. APLICACIÓN DE LOS DISCOS DE ANTIBIÓTICOS MÉTODO MANUAL

23. MÉTODO AUTOMÁTICO

24. APLICACIÓN DE LOS DISCOS DE ANTIBIÓTICOS 1 8 7 2 9 3 6 5 4

25. MEDICIÓN DE LAS ZONAS DE INHIBICIÓN