1. NORTHERN BLOT

2. PLANT DE TRAVAIL
Introduction
6-Avantages
et 1-Historique
inconvénients
5-Protocol 2-Définition
4-Principe 3-Utilisation

3. INTRODUCTION
Nos connaissances actuelles sur les événements
biologiques qui se produisent dans les cellules des organismes
vivants peut être attribuée à l'existence de beaucoup
techniques de laboratoire utilisées dans l'étude de ces
processus.
Parmi ces techniques est la technique
’’Northern blot’’ est très utile dans l'analyse de l'ARN .
La plupart des informations disponibles qui sont connaissons
aujourd'hui sur l'expression des gènes et les fonctions
d’ARN peuvent être attribués à ce technique.

4. 1-HISTORIQUE
 Northern blot est une technique d'ARN blot qui a
été développé en par Alwine, Kemp, et Stark en
1977 à l'Université Stanford .
 Il a été nommé d'après le Southern blot
technique qui détecte pour l'ADN, inventé par
Edwin M. Southern en 1975.
 Western blot , une méthode pour des protéines
est également une pièce de théâtre sur la
dénomination Southern blot et a été nommé en
1981

5. 2-DÉFINITION
 Une méthode de laboratoire utilisée pour
détecter des molécules d'ARN spécifiques au
sein d'un mélange d'ARN.
 Northern blot peut être utilisé pour analyser
un échantillon d'ARN à partir d'un tissu ou un
type particulier de cellule afin de mesurer
l'expression de gènes d'ARN spécifiques.

6. 3-UTILISATION
la recherche en biologie moléculaire :
 l'étude directe de l'expression des gènes au
niveau de l'ARNm
 détection de la taille de transcription ARNm
 étudier la dégradation des ARN
 étudier épissage de l'ARN peut détecter des
transcrits d'épissage alternatif
 étude la demi-vie de ARN
 IRES étude (site d'entrée interne des ribosomes)
Pour supprimer la possibilité de la digestion d'ARN
 souvent utilisé pour confirmer et de vérifier
transgéniques

7. 4-PRINCIPE
1. Séparation des ARN sur gel par
électrophorèse
2. Transfert des ARN sur membrane
(capillarité)
3. Hybridation de la membrane avec une
sonde spécifique du gène d’intérêt

8. 5-PROTOCOL
Isolation d'ARN (total ou de poly (A) ARNm)
Génération de sonde
Électrophorèse sur gel dénaturant d'agarose
Transfert à un support solide et
l'immobilisation
Pré- hybridation et l'hybridation avec la sonde
Lavage
Détection

13. 6-AVANTAGES ET INCONVINIENS
AVANTAGES :
 la détection de la taille d'ARN.
 l'observation des produits d'épissage
alternatifs d’ARN.
 l'utilisation de sondes ayant une homologie
partielle.
 la qualité et la quantité d'ARN peut être
mesurée sur le gel avant buvard, et les
membranes peuvent être stockées et sondé
pendant des années après buvard.
 L’expression des marqueurs tumoraux
spécifique par hybridation ARN –ADN

14.  INCOVINIENTS:
 La dégradation de l'échantillon par ARNases qui peuvent
être évitées par une bonne stérilisation de la verrerie et
l'utilisation des inhibiteurs de RNase comme DEPC
( diéthylpyrocarbonate).
 Les produits chimiques utilisé dans la plupart des taches
du Northern peut être un risque pour le chercheur, comme
le formaldéhyde, les matières radioactives, le bromure
d'éthidium, DEPC, et la lumière UV sont tous nuisibles dans
certaines expositions.

15. CONCLUSION
Northern blot, même si une technique relativement ancienne
est encore aujourd'hui utile dans l'étude et l'analyse de l'ARN.
Cette situation est attribuable à sa flexibilité ,simplicité.
Il exige essentiellement que l'ARN extrait est soumis à un gel
électrophorèse, qui est ensuite blotter à une membrane solide
, puis hybridé avec la sonde appropriée qui aide à la l'identification
et l'analyse de la molécule d'ARN.
La technique s'est avérée utile et indispensable dans létude
et l'analyse de molécules d'ARN dans les cellules de la vie
organismes. L'application de cette technique dans l'ARN lié
demandes de renseignements devrait se poursuivre dans plusieurs
décennies à venir.