1. Binding of circulating autoantibodies in
breast cancer to native and peroxynitrite-
modified RNA
Sheereen Tarannum, Zarina Arif, and Khursheed Alam
• David Mejía Arango.
• Manuela Obregón Giraldo.

2. INTRODUCTION.
http://www.reportajes.org

3. INTRODUCTION.

4. INTRODUCTION.
Autoantibodies.
Autoantibodies.
Protein involved in the immune system
that mistakenly attacks the body's own
tissues.
http://www.hablemosdesalud.com

5. Peroxynitrite modify a great number of
biomolecules ( nucleic acids).
Causing diseases (breast cancer).
There is autoantibody interaction in
this process.
http://www.canalgif.net

6. http://nidiasenagestionadministrativa.com

7. MATERIALES Y MÉTODOS.

8. MATERIALES.
• TEMED
• DTPA
• Albumina de suero bovino
• Para- nitrofenil fosfato
• Tween-20
• Acrilamida
• Bisacrilamida
• SDS

9. MUESTRA DE SANGRE
30 pacientes - sala de radioterapia. Muestras de control = 30
Diagnóstico
•imágenes radiológicas •No padecían ninguna enfermedad aguda o
•los síntomas clínicos crónica
•No tomar ninguna medicación.
Coagular / centrifugar/ Separación del suero/ Calentamiento 56°/ Almacenan -80°

10. AISLAMIENTO DE LA Ig G
La inmunoglobulina G (IgG) se aisló de
muestras de suero, utilizando la proteína
A- agarosa/ purificación.
La concentración de IgG aislada se
determinó por de densidad óptica a 280
nm (OD 280 ).
http://temasdebioquimica.wordpress.com

11. SÍNTESIS DE PEROXINITRITO

12. MODIFICACIÓN DEL ARN
POR El ONOO -
ONOO - a
concentraciones
variables
• 0,8 mmol / L
• 1,4 mmol / L
• 2,0 mmol / L

13. ELECTROFORESIS EN GEL DE
AGAROSA
RNA nativo de levaduras y RNA modificado se
trató con 0.8, 1.4, y 2.0 mmol / L ONOO -
EtBr se intercala entre las bases
Se tiñeron con Bromuro de Etidio
del RNA emitiendo fluorescencia.
se visualizaron bajo luz ultravioleta (UV).
Estudiar el efecto de peroxinitrito.

14. ELISA
El producto formado es α a la cantidad de Ac

15. ELISA DE INHIBICIÓN
Moléculas de cantidad
Moléculas de cantidad
Se les agrega una cantidad
Se les agrega una cantidad Se agrega un extracto de
Se agrega un extracto de
conocida se agregan aa
conocida se agregan
conocida de Ig G.
conocida de Ig G. la muestra problema
la muestra problema
una placa.
una placa.
La reacción entre las moléculas en la placa y las
inmunoglobulinas de cantidades conocidas disminuirá en
proporción a la cantidad de moléculas similares en la
muestra.

16. ELISA DE INHIBICIÓN
En este experimento la prueba de inhibición de Elisa permitió comprobar que
las características antigénicas de la muestra creada con ONOO- fueran
similares a las que se encuentran de forma natural en pacientes con cáncer
de mama.

17. ELECTROSCOPIA
La electroscopia es un experimento en el cual una muestra es irradiada con rayos
La electroscopia es un experimento en el cual una muestra es irradiada con rayos
de luz aauna determinada frecuencia de onda, dependiendo de la cantidad de luz
de luz una determinada frecuencia de onda, dependiendo de la cantidad de luz
absorbida por la muestra se pueden determinar si posee yy en que cantidad un
absorbida por la muestra se pueden determinar si posee en que cantidad un
componente cuya absorbancia para esa longitud de onda ya se conoce.
componente cuya absorbancia para esa longitud de onda ya se conoce.
En este estudio la disminución en la absorción lumínica por parte del RNA alterado
En este estudio la disminución en la absorción lumínica por parte del RNA alterado
por el ONOO- muestra la disminución en sus estructuras secundarias.
por el ONOO- muestra la disminución en sus estructuras secundarias.

18. RESULTADOS

19. RESULTADOS
La hipercromicidad
La hipercromicidad
mostraron una tendencia
mostraron una tendencia
creciente con el aumento
creciente con el aumento
de peroxinitrito
de peroxinitrito
El efecto
El efecto
hipercrómico es el
hipercrómico es el
incremento
incremento
de absorbancia
de absorbancia

20. RESULTADOS
Electroforesis en gel de
agarosa.
Efecto de peroxinitrito.
Efecto de peroxinitrito.
• RNA nativo
• RNA con 0.8 mmol / L, 1.4 mmol /
L, y 2.0 mmol / L ONOO -
Destrucción de la estructura secundaria del RNA
Destrucción de la estructura secundaria del RNA

21. RESULTADOS
• ELISA / Ensayo de Movilidad.
a) 0.8 mmol/L ONOO−-RNA
b) 1.4 mmol/L ONOO−-RNA
c) Cantidades variables de Cancer de mama
• 10, 20, 30, 40, and 50 μg de IgG. Líneas 2-6
ONOO− Destrucción de los epitopes.
Utilidad en el diagnostico
Utilidad en el diagnostico
precoz del cáncer de mama.
precoz del cáncer de mama.

22. Peroxynitrite is a cytotoxic reactive Ischiropoulos Agree
nitrogen species generated from the
reaction of superoxide radicals and and
nitric oxide has in vivo existence. Like nitric
oxide, peroxynitrite has both deleterious
and beneficial effects. Both neutrophil and
macrophages produce peroxynitrite by a
rapid biradica reaction generated
simultaneously from within the cells.
Ischiropoulos
The toxicity of peroxynitrite has been Peacher & pope Agree
attributed to its ability to oxidize thiols,
lipids, proteins, enzymes, nucleic acids and
cardiolipin.
Induced modification of H2A cause Khan Agree
hyperchromicity at 276nm, Peroxynitrite
hich could be attributed to peroxynitrite
induced denaturalization, oxidation and
nitration. It could be said that the nitration
effect of peroxynitrite has been masked by
the hiperchomisity produced due to its
oxidizing action.
The real clinical significance of Tan and zang Agree
autoantibodies for screening and early
diagnosis of breast cancer lies in the use of
a panel of native and altered auto antigens
to detect the full range of heterogeneous

23. CONCLUSIONS
• We find this experiment logical process enough to conclude the relation
between the augmented concentration of antibodies for ONOO- corrupted
RNA and the current the development of cancer for a certain patient.
• The advance in our known of the teratogenic capacity of ONOO- while lead us
to an earlier diagnosis of breast cancer, improving the diagnosis certainty and
giving better prospects for the patients healing.

24. CONCLUSIONS
• Despite being a central mechanism for the body to protect itself from external
threats, the creation of free radicals by the immunologic cells is also teratogenic if
the inflammation process is to prolonged, this may give a new perspective of the
cares that should be taken for the treatment of patients with chronic
inflammation.
• The existence of auto antibodies in breast cancer patients proves the mutated
cells produce highly specific products that separate them from the healthy cells,
by continuing this line of investigation; it may be possible to develop treatments
with more specificity for cancer cells and less damage for the patient.

27. GRACIAS.
THANKS.