Este documento describe el proyecto "Propagación de orquídeas en vía de extinción para su conservación y comercialización" llevado a cabo por el Grupo de Estudio para el Mejoramiento Ambiental (GEMA) de la Institución Educativa Sol de Oriente en Medellín, Colombia. El proyecto busca propagar especies nativas de orquídeas en peligro de extinción utilizando la técnica de cultivo in vitro con el fin de conservar las especies y generar conciencia ambiental entre los estudiantes. El proyect

1. IDENTIFICACIÓN
 INSTITUCIÓN EDUCATIVA SOL DE ORIENTE
 Sector: urbano de carácter oficial
 Medellín
 GRUPO DE ESTUDIO PARA EL
MEJORAMIENTO AMBIENTAL - GEMA
 Dirigida a estudiantes de la institución, la
comunidad, la ciudad, el país y el mundo
 Año de inicio 2005

2. ORIGEN DE LA EXPERIENCIA
 La institución educativa atiende una
población conformada a partir del
desplazamiento y localizada en una zona de
alto riesgo
 Los comportamientos que asume esta
población son generadores de problemas
que afectan las condiciones naturales y
sociales.
 Exige respuestas urgentes de distintos
ordenes.

3. Se pretende crear un espacio educativo
ambiental que desde la investigación y
seguimiento de los procesos se realicen
trabajos de concientización, capacitación y
aplicación que permitan construir futuro y
garantizar calidad de vida.

4. ENFOQUE TEORICO
 Los estudiantes, docentes y comunidad
tienen un sin numero de conocimientos
previos, creencias, valores, costumbres,
cosmovisiones, normas, alegrías y tristezas.
 En el espacio educativo se obvia esta rica y
diversa experiencia acumulada, así como el
proceso de vivencia en la escuela.

5.  Se fundamenta en la relación participante
(observador y observando).
 Se tiene en cuenta la naturaleza
cualitativa y cuantitativa de una
investigación.
 La clave es el desarrollo de competencias
que permitan descubrir el entorno, entrar
en contacto con la realidad y ser
creativos en la búsqueda de soluciones.

6. CULTURA
BIOTICO ABIOTICO
SISTEMA NATURAL
INDIVIDUO SOCIEDAD
SISTEMA SOCIAL
CRISIS
GENERALIZADAS
ORIEGEN ACCIONES
REGIONAL NACIONAL MUNDIAL ?
IMPACTO
EDUCACIÓN AMBIENTAL

7. METODOLOGIA
Este modelo supone cuatro pasos
generales
1. Delimitación del problema
2. Determinación de las condiciones
3. Análisis de alternativas de solución
4. Planeación y desarrollo de propuestas

9. PRINCIPALES ACTIVIDADES
 Realización de actividades lúdico-
educativas
 Capacitación
 Implementación de material didáctico
 Capacitación para la elaboración de
proyectos.
 Accesoria y apoyo a proyectos

10. LOGROS
 Parte activa en la construcción de la I.E. Sol
de Oriente , y en la solución de sus
problemas.
 Premio Nacional Unilever Andina con el
proyecto “PROPAGACIÓN DE ORQUIDEAS
EN VIA DE EXTINCIÓN PARA SU
CONSERVACIÓN Y COMERCIALIZACIÓN
 Reconocimiento programa ONDAS proyecto
plantas medicinales, barrio Villatina.
 Ganadores del 4to concurso Capital Semilla
con la propuesta de capacitaciones
ambientales.

11. “PROPAGACIÓN DE ORQUIDEAS EN
VIA DE EXTINCIÓN PARA SU
CONSERVACIÓN Y
COMERCIALIZACIÓN”

12. INTRODUCCIÓN
Este proyecto ha sido conformado con el
propósito de generar investigación en la
comunidad estudiantil, para recuperar
especies que están en vía de extinción
además de generar conciencia en el tema
ambiental. Partiendo de una idea
innovadora como lo es el cultivo in Vitro.

13. INTRODUCCIÓN
Colombia mega diversidad orquídeas
205 géneros 3500 especies 10%
Ampliamente distribuidas en todo el territorio

14. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
SISTEMA AMBIENTAL
RECUPERACIÓN EXTINCION DE ESPECIES
IMPACTO

15. OBJETIVO GENERAL
Propagar orquídeas en vía de extinción para
su conservación y comercialización en el
cerro “Pan de Azucar” y parque “Arví”.

16. OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Recolección plantas madres en el cerro Pan
de Azúcar y parque Arví
 Adecuar en el Aula Ambiental de la I.E. Sol
de Oriente el laboratorio para el cultivo in
Vitro de orquídeas.
 Estandarizar protocolo para reproducción de
orquídeas a partir de semillas y explantes
 Propagar especies nativas en vía de
extinción por cultivo in Vitro.

17.  Construir un invernadero para el cultivo de
orquídeas y especies nativas en vía de
extinción.
 Formar a los estudiantes en los principios
fundamentales que intervienen en la
propagación vegetal, así como con los
métodos y las técnicas útiles a emplear en
este campo.
 Generar cultura ambiental.

18. METODOLOGÍA
El cultivo in vitro se define como el cultivo
en un medio nutritivo, en condiciones
estériles, de plantas, semillas, órganos,
explantos, tejidos, células y protoplastos de
plantas superiores.

19. CULTIVO DE TEJIDOS
Técnicas mediante las
cuales un explante se
cultiva asépticamente
en un medio de
composición química
definida y se incuba en
condiciones
ambientales
controladas.
- Estudios básicos de
fisiología, genética y
bioquímica.
- Bioconversión y
producción de
compuestos.
- Incremento en la
variabilidad genética.
- Obtención de plantas
libres de patógenos.
- Propagación de plantas.
- Conservación e
intercambio de
germoplasma.

20. FASES DE LA PROPAGACIÓN
ESTABLECIMIENTO
DEL CULTIVO
ASEPTICO
Fase 0 o Preparativa
Fase I o
Establecimiento o de
Iniciación
Selección de la
planta donadora
Asepsia y viabilidad
de los cultivos

21. CRECIMIENTO DEL INOCULO
Fase II o
Multiplicación
↓
Organogénesis y
embriogénesis
↓
Miles de plantas en
corto tiempo

22. 5.65.55.55.7-5.85.5pH
-20-30--Sacarosa (g/L)
0.01-0.5---Biotina
100.0100.0100.0100.0100.0-Mioinositol
--0.5---Acido Fólico
1.010.00.50.1-0.1Tiamina - ClH
1.01.00.50.5-0.1Piridoxina HCl
1.01.00.50.5-0.5Ac. nicotínico
--2.02.0-3.0Glicina
COMPUESTOS ORGANICOS
----1.0-Fe3Cl3 · 6 H2O
-----2.5Fe2(SO4)3
--27.827.8--FeSO4 · 7 H2O
--37.337.3--Na2EDTA · 2H2O
FE – EDTA
----0.03-NiCL2 · 6 H2O
----0.03-AlCL3
0.0250.025-0.025--CoCl2 · 6 H2O
0.0250.0250.0250.0250.03-CuSO4 · 5 H2O
-0.0250.25---CuSO4
0.250.250.250.25--Na2MoO4 · 2 H2O
0.750.75-0.830.010.75KI
3.03.010.06.21.01.5H3BO3
2.02.010.08.61.03.0ZnSO4 · 7 H2O
10.010.0----MnSO4 · H2O
--25.022.30.17.0MnSO4 · 4 H2O
MICRONUTRIENTES
-150--12519NaH2PO4 · H2O
-----200Na2SO4
300---75065KCl
170-68170--KH2PO4
300250185370250720MgSO4 · 7 H2O
--166---CaCL2
600150-44075-CaCL2 · 2 H2O
190025009501900-80KNO3
-134----(NH4)2SO4
600-7201650--NH4NO3
----600-NaNO3
-----300Ca(NO3)2 · 4 H2O
MACRONUTRIENTES
KMB5NITSCHMSHELLERWHITE
MEDIOS
COMPONENTES
5.65.55.55.7-5.85.5pH
-20-30--Sacarosa (g/L)
0.01-0.5---Biotina
100.0100.0100.0100.0100.0-Mioinositol
--0.5---Acido Fólico
1.010.00.50.1-0.1Tiamina - ClH
1.01.00.50.5-0.1Piridoxina HCl
1.01.00.50.5-0.5Ac. nicotínico
--2.02.0-3.0Glicina
COMPUESTOS ORGANICOS
----1.0-Fe3Cl3 · 6 H2O
-----2.5Fe2(SO4)3
--27.827.8--FeSO4 · 7 H2O
--37.337.3--Na2EDTA · 2H2O
FE – EDTA
----0.03-NiCL2 · 6 H2O
----0.03-AlCL3
0.0250.025-0.025--CoCl2 · 6 H2O
0.0250.0250.0250.0250.03-CuSO4 · 5 H2O
-0.0250.25---CuSO4
0.250.250.250.25--Na2MoO4 · 2 H2O
0.750.75-0.830.010.75KI
3.03.010.06.21.01.5H3BO3
2.02.010.08.61.03.0ZnSO4 · 7 H2O
10.010.0----MnSO4 · H2O
--25.022.30.17.0MnSO4 · 4 H2O
MICRONUTRIENTES
-150--12519NaH2PO4 · H2O
-----200Na2SO4
300---75065KCl
170-68170--KH2PO4
300250185370250720MgSO4 · 7 H2O
--166---CaCL2
600150-44075-CaCL2 · 2 H2O
190025009501900-80KNO3
-134----(NH4)2SO4
600-7201650--NH4NO3
----600-NaNO3
-----300Ca(NO3)2 · 4 H2O
MACRONUTRIENTES
KMB5NITSCHMSHELLERWHITE
MEDIOS
COMPONENTES

23.  Hacer las soluciones
macro y micro
Vitaminas, Hormonas
y Azúcar

24.  Adición del agente
gelificante (Si lo
requiere) y
calentamiento

25.  Ajuste del volumen
final.

26.  Medición del pH

27.  Servida y tapado del
medio, empaque en
los frascos con medio
para ser esterilizados.

28. ORGANOGENESIS
 Proceso de iniciación y
desarrollo de una
estructura que muestra
la forma y/o función
del órgano natural:
Citoquininas
Auxinas
Yemas
(Caulogénesis)
Raices
(Rizogénesis)
Callos
Explantes

29. ENRAIZAMIENTO
Fase III o
Enraizamiento
↓
preparar al material
vegetal para su
reacondicionamiento
en campo
↓
sistema radical

30. ACLIMATACIÓN
Fase IV o Aclimatación
o Endurecimiento
↓
Condiciones para el
transplante definitivo a
campos comerciales o
de producción.

31. ETAPA I
MONTAJE DE LABORATORIO
CONSECUCIÓN DE
RECURSOS-
PROYECTO
UNILEVER
ADECUACIÓN DE
ESPACIO

32. ETAPA II
PROPAGACIÓN ORQUIDEAS
RECOLECCIÓN PLANTAS
MADRES EN EL CERRO
PAN DE AZUCAR Y
PARQUE ARVÍ.
ESTANDARIZACIÓN
PROTOCOLOS PARA
SEMILLA
ESTANDARIZACIÓN
PROTOCOLO PARA
ESPLANTES

33. ETAPA II
PROPAGACIÓN ORQUIDEAS
RECOLECCIÓN PLANTAS
MADRES EN EL CERRO
PAN DE AZUCAR Y
PARQUE ARVÍ.
ESTANDARIZACIÓN
PROTOCOLOS PARA
SEMILLA
ESTANDARIZACIÓN
PROTOCOLO PARA Ex
PLANTES

34. ETAPA III
PROCESO EX-VITRO
PRODUCCIÓN
SUSTRATO PARA
SIEMBRA EX-VITRO.
ACLIMATACIÓN EN
BANDEJAS
PRODUCCIÓN EN
INVERNADERO

35.  Aclimatación:
- Extraer la plántula del tubo y lavar las raíces para eliminar
los restos del medio de cultivo, seccionar según el
número de esquejes posibles de obtener.
- Aparte agujerear la tapa de las cajas rectangulares de
plástico (18 cm largo x 12 cm ancho x 7 cm profundidad)
y colocar sustrato orgánico comercial. Con una varilla
marcar sobre el sustrato los lugares donde se colocarán
los esquejes (aproximadamente 20 esquejes/caja),
plantarlos y regar con agua destilada.
- Llevar las cajas a cámara de cultivo a 20ºC, fotoperíodo
16 hs de luz y 8 hs oscuridad, intensidad lumínica de
3000 lux.
- Una vez enraizados los esquejes, llevar las cajas al
invernáculo y se colocarlas bajo mesada por una o dos
semanas hasta su plantación final en macetas.

36. RESULTADOS

37. Etapa I
Equipos y reactivos
 Cámara de asepsia
 pHmetro
 Lámpara Ultravioleta
 Estantería para crecimiento
 Lámparas de neón
 Reactivos para protocolo casero y protocolo
M.S.

38. Plantas madre
 Se recolectaron 42
individuos de los
géneros
masdevallia y
cattleya
 Se recolectaron 2
capsulas verdes de
cattleya

39. Áreas del laboratorio
PREPARACION
TRANSFERENCIA
LAVADO
ESTERILIZACION
Incubación in vitro
Crecimiento in vivo Crecimiento in vivo
Observación
Terapia y Control
ALMACEN

40. ETAPA II

41. Protocolo para semilla
Medio de cultivo
 Extracto de banano: una papilla de
banano, se adiciona agua destilada
y abono que posea nitrógeno,
fosforo y potasio) vitamina, acido
micotinico, piroxidina, glicina y
mioinositol.
 con extracto de banano ya listo y
para dar consistencia se utiliza
agar y como medio energético
sacarosa. para un litro de medio, 3
gr de agar y 30 gr/L de extracto de
banano.

42. Protocolo para semilla
siembra
 Se remueve la flor con bisturí.
 Se limpia con solución jabonosa
 Se enjuaga con agua destilada.
 Se introduce en solución de
hipoclorito al1% durante 10
minútos.
 Se sumergen en alcohol industrial y
se flamea.
 Se hace corte de la capsula, y se
extraen las semillas llevándolas al
medio.
 Se añade agua destilada sobre
cada frasco para su distribución.

43. RESULTADOS
Se realizaron 5 siembras de
20 frascos cada una, con
un intervalo de 30 días.

44.  contaminación en
las siembras
50% siembras
contaminadas
50% siembras sin
contaminar
 germinación
5% de germinación
95% sin germinar

45. TAMAÑO DEL EXPLANTE
 Grande → Posibilidad de formar callos
 Heterogeneidad y contaminación con
microorganismos
 Muy pequeño → No hay formación de callos

46. Protocolo Murashige Skoog

47. SOLUCIÓN MADRE CONCENTRACIÓN GRAMOS (500 mL)
A. Na2EDTA (EDTA Sal de sodio) 37,3 mg/L 0.01865
FeSO47H2O (Sulfato Ferroso) 27,8 mg/L 0.0139
B NH4NO3 (Nitrato de amonio) 1,65 g/L 0.825
KNO3 (Nitrato Potásico) 1,9 g/L 0.95
C H3BO3 (Ácido bórico) 0,62 g/L 0.31
KH2PO4 (Fosfato de potasio) 170 mg/L 0.085
KI (Iodo de Potasio) 83 g/L 0.0415
Na2MO4.2H2O (Molibdato de sodio) 25 mg/L 0.0125
CoCL2.5H2O (Dicloruro de cobalto) 2,5 mg/L 0.00125
D MgSO47H2O (Sulfato de magnesio) 370 mg/L 0.185
MnSO4$H2O (Sulfato de manganeso) 1,69 g/L
0.845
ZnSO4 (Sulfato de Zinc) 0,86 g/L 0.43
CuSO5H2O (Sulfato de cobre ) 2,5 mg/L 0.00125
E CaCl2.2H2O (Cloruro de calcio) 440 mg/L 0.22
Vitaminas
H Mioinositol 10 g/L 0.005
F Tiamina 10 mg/L 0.005
I Ác. Nicotínico 50 mg/L 0.025
J Piridoxina 50 mg/L 0.025
K Glicina 0,2 g/L 0.1
sacarosa 30 g/ l 15
pH 5,7

49. Contaminación
 Se realizaron 6 siembras para un total de
135 frascos sembrados con ex plantes
 En las cuatros primeras siembras dieron
como resultado un 83.7% de frascos
contaminados.
 La quinta y sexta siembra dieron como
resultado un 65% de muestras
contaminadas .

50. Producción de callo
97,8% de explantes
sin callo
2,2% de explantes
con callo

51. ANALISIS Y
RECOMENDACIONES

52. FACTORES QUE AFECTAN
 En la planta donadora tener en cuenta su estado fisiológico de
desarrollo y fitosanitario además de su genotipo y especie en
los que en ocasiones pueden ofrecer diferentes respuestas.
 En el explante la edad fisiológica, la ubicación en la planta
madre y el tamaño, un explante muy grande puede
contaminarse fácilmente y muy pequeño puede no responder al
cultivo.
 Los factores físicos y químicos como luz temperatura y pH
pueden ser cruciales, algunos explantes responden mejor a
condiciones de baja temperatura que otros, o de acidez.
 En cuanto al medio de cultivo es pertinente realizar una revisión
bibliográfica para tratar de aproximarnos al medio de cultivo
más adecuado para la planta, además la consistencia del medio
también puede afectar la respuesta.

53. MEDIO DE CULTIVO
Murashige o sus modificaciones.
↓
Benéficas para el desarrollo de callos
embriogénicos.
Sacarosa → 12% Eleva el potencial.
Carbón Activado → Evita la oxidación

54. LIMITACIONES DEL CULTIVO DE
TEJIDOS
 La planta madre como material de partida
debe ser cuidadosamente seleccionado
 Conocimiento de las técnicas para elegir la
más adecuada a las necesidades.

55. ETAPA IV
GENERAR CULTURA AMBIENTAL
DAR A CONOCER EL
PROYECTO
CAPACITACIÓN EN
BIOTECNOLOGIA
VEGETAL-FORMACIÓN
SEMILLERO
EDUCACIÓN
AMBIENTAL A LA
COMUNIDAD
GENERAR EMPRESA

57. HACIA DONDE NOS
DIRIGIMOS