Este documento describe la citogenética molecular y la técnica de hibridación fluorescente in situ (FISH) para el diagnóstico de alteraciones cromosómicas. Explica los tipos de sondas FISH, como las centroméricas y las específicas de loci, y cómo se usa FISH para detectar trisomías, anomalías del número y estructura de cromosomas. También cubre el uso de FISH en diagnóstico preimplantacional, prenatal y postnatal.

1. CITOGENÉTICA MOLECULAR
DIAGNÓSTICO POR FISH
Luz Mery Bernal Parra Ph.D
UNAD
2014 II

2. DE LA MOLECULA DE ADN AL CROMOSOMA:
NIVELES DE OBSERVACION

3. CITOGENETICA MOLECULAR
 Identificación y aislamiento de genes específicos
 Diseño de sondas moleculares
 Técnica de FISH (hibridización “in situ”por fluorescencia)
 Núcleos interfásicos y/o metafásicos
 Análisis de alteraciones cromosómicas numéricas y
estructurales e identificación de cromosomas marcadores

4. CITOGENETICA MOLECULAR
FISH
HIBRIDIZACION DE SECUENCIAS COMPLEMENTARIAS
DE DNA
sonda marcada (biotina o digoxigenina)
⇓
hidridiza con el DNA en estudio (secuencia diana)
⇓
sitios de hibridización son visualizados como puntos
fluorescentes

5. CITOGENETICA MOLECULAR
FISH
Tipos de sondas
centroméricas: específicas de regiones de DNA repetitivo
⇓
identificar el numero de copias de un determinado cromosoma
⇓
detección rápida de las trisomias cromosómicas mas
frecuentes (13, 18, 21) y anormalidades de X - Y

8. CITOGENETICA MOLECULAR
FISH
Tipos de sondas
específicas para regiones no repetitivas
⇓
evidencian un loci cuya alteración produce un determinado
cuadro clínico
⇓
sindrome de Prader-Willi (15q11)
sindrome de Cri du Chat (5p15.2)
sindrome de Williams (7q11.23)
sindrome de Kallmann (Xp22.3)

10. CITOGENETICA MOLECULAR
FISH
Tipos de sondas
“chromosome painting”
⇓
permiten evidenciar el material genético perteneciente a un
determinado cromosoma
⇓
anomalías cromosómicas estructurales complejas

14. CITOGENETICA MOLECULAR
FISH
Diagnóstico
Preimplantacional: blastómeros, corpúsculo polar
Prenatal: vellosidad corial, líquido amniótico,
sangre fetal
Postnatal: linfocitos, médula ósea, tejidos sólidos (tumores)
material de aborto

15. CITOGENETICA MOLECULAR
FISH
Diagnóstico preimplantacional (DPI)
Es una técnica que puede ser usada durante los
procedimentos de fertilización in vitro, para el
análisis genético de los embriones antes de la
transferencia a el útero.

16. IGMIGM FISH EN EL DIAGNOSTICOFISH EN EL DIAGNOSTICO
PREIMPLANTACIONALPREIMPLANTACIONAL

17. FISH EN DIAGNÓSTICO
DE PREIMPLANTACIÓN
Reproducción Asistida
⇓
procedimientos de micromanipulación
⇓
biopsia embrionaria
⇓
técnicas de genética molecular aplicables en una
única célula

18. FISH EN DIAGNÓSTICO
DE PREIMPLANTACIÓN
DNA para el estudo es obtenido por biopsia :
del primer corpúsculo polar de ovocitos no fertilizados
de uno o mas blastómeros de un embrión en el estadio de
clivage (usualmente 3 dias despues de la FIV: de 6-10 células)
de células del trofoectodermo en el estadio de blastocisto

19. FISH EN DIAGNÓSTICO
DE PREIMPLANTACIÓN
Dos tipos de sondas son utilizadas
1- AneuScreen (Vysis) para la marcación de los
cromosomas X, Y e 18
cromosomas 13 y 21
2- MultiVysion (Vysis) para la marcación de los
cromosomas X, Y, 13, 18 e 21 (16)

20. FISH EN DIAGNOSTICO
PREIMPLANTACIONAL
AneuScreen
(p4)
XXY, 1818
XY, 1818
XXX, 181818

21. FISH multicolorida permite
analizar simultaneamente
en un único blastómero
las aneuploidias mas comunes
(X, Y, 13, 18, 21 e 16)
.
FISH EM DIAGNOSTICO
PREIMPLANTACIONAL

22. FISH EN DIAGNOSTICO
PREIMPLANTACIONAL
Blastómeros
XX, 1313, 18, 2121
X
18
21
13
MONOSOMIA 18

23. FISH EN DIAGNOSTICO
PREIMPLANTACIONAL DE SEXO
INDICACION
SINDROME X-FRAGIL
DPI : XX,1818
DPN : 46,XX (vellosidad)
18
X

24. FISH ENFISH EN DIAGNOSTICO
PREIMPLANTACIONAL DE SEXO
X
18
INDICACION
DISTROFIA MUSCULAR
DE DUCHENNE
DPI : XX, 1818

28. CARIOTIPO MULTICOLOR
(SKY-FISH / M-FISH)
el espectro de emisión de
cada cromosoma es único y
diferenciable de los demás
⇓
neoplasias hematológicas
⇓
translocaciones complejas
alteraciones cromosómicas
crípticas

29. HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA
(CGH)
ADNs (tumoral y control normal)
⇓
marcados con distintos fluorocromos)
⇓
hibridizacion competitiva sobre cromosomas normales
↓ ↓
normales patológicas
cromosomas amarillos detección de ganacia o perdida
⇓
COMPARACION DE LAS INTENSIDADES DE LAS SEÑALES DE
HIBRIDIZACION

30. HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA
(CGH)

31. HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA
(CGH)