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Angélica Narváez
Evaluación de la actividad
antimicrobiana del extracto etanólico de
Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia
   por el método de difusión en agar.
GENERAL:
Evaluar la actividad antimicrobiana del extracto etanólico de
Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia, de uso frecuente en la
medicina tradicional en Zamora Chinchipe, por el método de
difusión en agar.


ESPECÍFICOS:
• Evaluar la actividad antibacteriana del extracto etanólico de
  Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia.

• Determinar la actividad antifúngica del extracto etanólico de
  Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia.

• Difundir la investigación realizada a los estudiantes de la carrera
  de Laboratorio clínico.
Agentes naturales:
                               principios activos



Constitución Ecuador:
                                                        Importancia: recurso de
 Artículo 84, literal 12
                                                        Salud y riqueza cultural.
 UNL-ASH- CEDAMAZ

                              Plantas
                             Medicinales
                                                    -Mundial: 10.000 especies
Alternativa menos
                                                    -Ecuador: 10% total mundial
  costosa y fácil
                                                    -Provincia de Z. Chinchipe
      acceso
                                                    -OMS: 80%


                                 E. Infecciosas
                           broncorespiratorias 59%, y
                             gastrointestinales 25%
Piper pseudochurumayo
              Nombre común:   Ámbar - ámbar




                                - Arbustos
                                - Hojas alternas y lobuladas
                                - Inflorescencias terminales
Triterpenos, Saponinas,         (umbelas o panículas)
Fenoles, Aminoácidos            - Flores forman bandas alrededor
                                de la espiga
Olyra latifolia
                  Nombre común:       Shishin




                                     - Culmos 5m x 1cm
                                     - Internodio o híspido
                                     - Hojas de vainas, glabras o
                                     híspidas,       con       limbos
                                     asimétricos,           oblongas
Triterpenos, Saponinas,              lanceoladas
      Aminoácidos                    -Inflorescencia        panícula
                                     piramidal, espículas sobre las
Tipo de     Área de           Criterios de
estudio     estudio           inclusión y
                               exclusión




Universo              Piper pseudochurumayo
           Muestra          Olyra latifolia
Cepa: E. coli                 Validación del método:
                                         papel Whatman Nº1




       Actividad           CMI: Concentración    CMB: Concentración
antimicrobiana: extracto    mínima inhibitoria   mínima bactericida
    de clavo de olor
FASE 1: Preparación de la solución de trabajo y discos con los
                          extractos
FASE    2:    Preparación    de     los   medios     de    cultivos
bacterianos, micóticos y reconstitución de las cepas de referencia
internacional (ATCC)
Escherichia coli




Staphylococcus aureus
Klebsiella pneumoniae




Pseudomona aeruginosa
FASE 3 Evaluación de la actividad antimicrobiana
TABLA 1.
                   NOMBRE CIENTIFICO: Piper pseudochurumayo
                                    DILUCIONES                           CONTROLES
MICROORGANISMO                                                   POSITIVO          NEGATIVO
                           DILUCIONES       RESULTADOS
                                                                  s/mm           (ETANOL 70%)
                                                                   Cip
                               1/100          Negativo          28 mm (s)           Negativo
      E. coli                 1/1.000         Negativo          29 mm (s)           Negativo
                             1/10.000         Negativo          29 mm (s)           Negativo
                                                                  Amc
                               1/100          Negativo          25 mm (s)           Negativo
    S. aureus                 1/1.000         Negativo          26 mm (s)           Negativo
                             1/10.000         Negativo          26 mm (s)           Negativo
                                                                   Sam
                               1/100          Negativo          17 mm (s)           Negativo
K. pneumoniae                 1/1.000         Negativo          17 mm (s)           Negativo
                             1/10.000         Negativo          17 mm (s)           Negativo
                                                                    G
                               1/100          Negativo          24 mm (s)           Negativo
 P. aeruginosa                1/1.000         Negativo          23 mm (s)           Negativo
                             1/10.000         Negativo          24 mm (s)           Negativo
                                                                    Fl
                               1/100          Negativo          24 mm (s)           Negativo
   C. albicans                1/1.000         Negativo          23 mm (s)           Negativo
                             1/10.000         Negativo          23 mm (s)           Negativo
Fuente: Registro de resultados de actividad antimicrobiana de P. pseudochurumayo por método
de difusión en agar.
Autora: Narváez Figueroa Angélica María
TABLA 2.
                            NOMBRE CIENTIFICO: Olyra latifolia
                                      DILUCIONES                             CONTROLES
MICROORGANISMO                                                      POSITIVO            NEGATIVO
                            DILUCIONES         RESULTADOS
                                                                     s/mm             (ETANOL 70%)
                                                                       Cip
                                1/100            Negativo           29 mm (s)           Negativo
       E. coli                 1/1.000           Negativo           31 mm (s)           Negativo
                              1/10.000           Negativo           30 mm (s)           Negativo
                                                                      Amc
                                1/100            Negativo           25 mm (s)           Negativo
    S. aureus                  1/1.000           Negativo           25 mm (s)           Negativo
                              1/10.000           Negativo           27 mm (s)           Negativo
                                                                       Sam
                                1/100            Negativo           17 mm (s)           Negativo
K. pneumoniae                  1/1.000           Negativo           15 mm (s)           Negativo
                              1/10.000           Negativo           15 mm (s)           Negativo
                                                                        G
                                1/100            Negativo           24 mm (s)           Negativo
 P. aeruginosa                 1/1.000           Negativo           25 mm (s)           Negativo
                              1/10.000           Negativo           24 mm (s)           Negativo
                                                                        Fl
                                1/100            Negativo           24 mm (s)           Negativo
   C. albicans                 1/1.000           Negativo           24 mm (s)           Negativo
                              1/10.000           Negativo           24 mm (s)           Negativo
Fuente: Registro de resultados de actividad antimicrobiana de O. latifolia por método de difusión en
agar.
Autora: Narváez Figueroa Angélica María
Piper pseudochurumayo y
                       Olyra latifolia

                       Etanol 70%
                       1/100, 1/1.000, 1/10.000
Universidad Nacional
       de Loja         S. aureus, E. coli, P. aeruginosa,
                       K. pneumoniae, C. albicans

                       Difusión en agar




                       Especies de familia Piperaceae


    Colombia           Extracto puro
Benítez & Córdova
                       S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, K.
                       pneumoniae, S. tiphy, B. Subtilis,

                       Difusión y dilución
P. umbellatum y P.
                        jacquemontanium

                        Diclorometánico y metanol
                        Aceites esenciales
     Guatemala
     Ana Gómez          B. subtillis, M. smegmati y P.
                        aeruginosa

                        Difusión y dilución




                        alcaloides, flavonoides, saponinas,
                         fenoles, aminoácidos, principios
Screening fitoquímico      amargos , y aceites volátiles
    Ana Gómez

                        Saponinas, fenoles, aminoácidos,
                        triterpenos
El extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia no
presentaron actividad antibacteriana mediante el método de difusión
en agar.


El extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia no
presentaron actividad antifúngica mediante el método de difusión en
agar.


Se difundieron los resultados a los estudiantes de la carrera de
Laboratorio Clínico.


Los resultados de las dos especies vegetales Piper pseudochurumayo y
Olyra latifolia, son negativos de acuerdo a la metodología aplicada.
Se recomienda a los estudiantes realizar más estudios de
especies vegetales no solamente aportando como estudio
científico, sino rescatando la medicina tradicional.


Realizar otros estudios     de    las      especies   de   Piper
pseudochurumayo y Olyra latifolia


Evaluar otras partes de la plantas en estudio.


Utilizar muestras de pacientes con microorganismo identificados.
Protocolo 1, 2, 3: Instructivo de: colecta de drogas, obtención de extractos
y operación de concentración por rotavapor.

Protocolo 4: Bioseguridad

Protocolo 5 – 17: Preparación de medios de cultivo

Protocolo 18 y 19: Procedimiento para la prueba Catalasa y Coagulasa.

Protocolo 20, 21, 22: KOH, tinción de Gram y test de Filamentación.

Protocolo 23 y 24: Preparación Patrón N. 5 Mac Farland y del inóculo.

Protocolo 25 - 29: Viabilización y conservación de microorganismos

Protocolo 30 y 31: Preparación de discos de sensibilidad y validación.

Protocolo 32 y 33: Evaluar la actividad antibacteriana y antifúngica por
método de difusión.

Protocolo 34 y 35: Procedimiento de CMI y CMB

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Actividad Antimicrobiana de Plantas Medicinales

  • 2.
  • 3. Evaluación de la actividad antimicrobiana del extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia por el método de difusión en agar.
  • 4.
  • 5. GENERAL: Evaluar la actividad antimicrobiana del extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia, de uso frecuente en la medicina tradicional en Zamora Chinchipe, por el método de difusión en agar. ESPECÍFICOS: • Evaluar la actividad antibacteriana del extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia. • Determinar la actividad antifúngica del extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia. • Difundir la investigación realizada a los estudiantes de la carrera de Laboratorio clínico.
  • 6.
  • 7. Agentes naturales: principios activos Constitución Ecuador: Importancia: recurso de Artículo 84, literal 12 Salud y riqueza cultural. UNL-ASH- CEDAMAZ Plantas Medicinales -Mundial: 10.000 especies Alternativa menos -Ecuador: 10% total mundial costosa y fácil -Provincia de Z. Chinchipe acceso -OMS: 80% E. Infecciosas broncorespiratorias 59%, y gastrointestinales 25%
  • 8.
  • 9. Piper pseudochurumayo Nombre común: Ámbar - ámbar - Arbustos - Hojas alternas y lobuladas - Inflorescencias terminales Triterpenos, Saponinas, (umbelas o panículas) Fenoles, Aminoácidos - Flores forman bandas alrededor de la espiga
  • 10. Olyra latifolia Nombre común: Shishin - Culmos 5m x 1cm - Internodio o híspido - Hojas de vainas, glabras o híspidas, con limbos asimétricos, oblongas Triterpenos, Saponinas, lanceoladas Aminoácidos -Inflorescencia panícula piramidal, espículas sobre las
  • 11.
  • 12. Tipo de Área de Criterios de estudio estudio inclusión y exclusión Universo Piper pseudochurumayo Muestra Olyra latifolia
  • 13. Cepa: E. coli Validación del método: papel Whatman Nº1 Actividad CMI: Concentración CMB: Concentración antimicrobiana: extracto mínima inhibitoria mínima bactericida de clavo de olor
  • 14. FASE 1: Preparación de la solución de trabajo y discos con los extractos
  • 15. FASE 2: Preparación de los medios de cultivos bacterianos, micóticos y reconstitución de las cepas de referencia internacional (ATCC)
  • 18. FASE 3 Evaluación de la actividad antimicrobiana
  • 19.
  • 20. TABLA 1. NOMBRE CIENTIFICO: Piper pseudochurumayo DILUCIONES CONTROLES MICROORGANISMO POSITIVO NEGATIVO DILUCIONES RESULTADOS s/mm (ETANOL 70%) Cip 1/100 Negativo 28 mm (s) Negativo E. coli 1/1.000 Negativo 29 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 29 mm (s) Negativo Amc 1/100 Negativo 25 mm (s) Negativo S. aureus 1/1.000 Negativo 26 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 26 mm (s) Negativo Sam 1/100 Negativo 17 mm (s) Negativo K. pneumoniae 1/1.000 Negativo 17 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 17 mm (s) Negativo G 1/100 Negativo 24 mm (s) Negativo P. aeruginosa 1/1.000 Negativo 23 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 24 mm (s) Negativo Fl 1/100 Negativo 24 mm (s) Negativo C. albicans 1/1.000 Negativo 23 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 23 mm (s) Negativo Fuente: Registro de resultados de actividad antimicrobiana de P. pseudochurumayo por método de difusión en agar. Autora: Narváez Figueroa Angélica María
  • 21. TABLA 2. NOMBRE CIENTIFICO: Olyra latifolia DILUCIONES CONTROLES MICROORGANISMO POSITIVO NEGATIVO DILUCIONES RESULTADOS s/mm (ETANOL 70%) Cip 1/100 Negativo 29 mm (s) Negativo E. coli 1/1.000 Negativo 31 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 30 mm (s) Negativo Amc 1/100 Negativo 25 mm (s) Negativo S. aureus 1/1.000 Negativo 25 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 27 mm (s) Negativo Sam 1/100 Negativo 17 mm (s) Negativo K. pneumoniae 1/1.000 Negativo 15 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 15 mm (s) Negativo G 1/100 Negativo 24 mm (s) Negativo P. aeruginosa 1/1.000 Negativo 25 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 24 mm (s) Negativo Fl 1/100 Negativo 24 mm (s) Negativo C. albicans 1/1.000 Negativo 24 mm (s) Negativo 1/10.000 Negativo 24 mm (s) Negativo Fuente: Registro de resultados de actividad antimicrobiana de O. latifolia por método de difusión en agar. Autora: Narváez Figueroa Angélica María
  • 22.
  • 23. Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia Etanol 70% 1/100, 1/1.000, 1/10.000 Universidad Nacional de Loja S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, C. albicans Difusión en agar Especies de familia Piperaceae Colombia Extracto puro Benítez & Córdova S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, S. tiphy, B. Subtilis, Difusión y dilución
  • 24. P. umbellatum y P. jacquemontanium Diclorometánico y metanol Aceites esenciales Guatemala Ana Gómez B. subtillis, M. smegmati y P. aeruginosa Difusión y dilución alcaloides, flavonoides, saponinas, fenoles, aminoácidos, principios Screening fitoquímico amargos , y aceites volátiles Ana Gómez Saponinas, fenoles, aminoácidos, triterpenos
  • 25.
  • 26. El extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia no presentaron actividad antibacteriana mediante el método de difusión en agar. El extracto etanólico de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia no presentaron actividad antifúngica mediante el método de difusión en agar. Se difundieron los resultados a los estudiantes de la carrera de Laboratorio Clínico. Los resultados de las dos especies vegetales Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia, son negativos de acuerdo a la metodología aplicada.
  • 27.
  • 28. Se recomienda a los estudiantes realizar más estudios de especies vegetales no solamente aportando como estudio científico, sino rescatando la medicina tradicional. Realizar otros estudios de las especies de Piper pseudochurumayo y Olyra latifolia Evaluar otras partes de la plantas en estudio. Utilizar muestras de pacientes con microorganismo identificados.
  • 29.
  • 30.
  • 31. Protocolo 1, 2, 3: Instructivo de: colecta de drogas, obtención de extractos y operación de concentración por rotavapor. Protocolo 4: Bioseguridad Protocolo 5 – 17: Preparación de medios de cultivo Protocolo 18 y 19: Procedimiento para la prueba Catalasa y Coagulasa. Protocolo 20, 21, 22: KOH, tinción de Gram y test de Filamentación. Protocolo 23 y 24: Preparación Patrón N. 5 Mac Farland y del inóculo. Protocolo 25 - 29: Viabilización y conservación de microorganismos Protocolo 30 y 31: Preparación de discos de sensibilidad y validación. Protocolo 32 y 33: Evaluar la actividad antibacteriana y antifúngica por método de difusión. Protocolo 34 y 35: Procedimiento de CMI y CMB