procedimiento de la coloracion Ácido peryodico schiff (PAS) en laminas de histológicas

1. ÁCIDO PERYODICO-SCHIFF
(PAS)
LILIANA MARIA AGRESOTT BELTRAN
BACTERIOLOGA

2. ÁCIDO PERYODICO-SCHIFF
(PAS)
Muy utilizada en histoquimica debido a que:
De amplia aplicación en el diagnostico histopatológico
rutinario.
Colorea carbohidratos o sustancias relacionadas con ellos.
La introduccion de estar tecnica se deba a Mac Manus (1946) ,
su desarrollo por Lillie (1949) y Hotchkiss (1948).

3. ÁCIDO PERYODICO-SCHIFF
(PAS)
Esta técnica consiste en oxidar los tejidos mediante el ácido
peryódico para incrementar el número de grupos carbonilo
(aldehído o cetona) presentes en ellos, de forma que puedan
ser demostrados posteriormente mediante reactivo de Schiff.
Los carbohidratos contienen grupos carbonilos aislados,
aproximadamente de uno por molécula de monosacárido.
Por esta razón es necesario oxidarlos con el fin de
incrementar dichos grupos, que solo pueden ser detectados
por el reactivo de Schiff si se encuentran situados en
carbonos contiguos y delimitados por grupos alcohólicos o
amino.

5. PROCEDIMIENTO
Preparación de reactivos:
1. Acido peryodico al 0.5%:
0,5gr de acido peryodico
100ml de agua destilada.
2. Reactivo de Schiff:
Llevar hasta ebullicion el agua destilada.
Tomar 200ml de agua destilada.
Agregar 1gr de Fuscina basica.
Mezclar.
Dejar enfriar a 50°C y filtrar.
Añadir 1gr de metabisulfito de sodio.
Dejar en reposo 24 horas, en un frasco oscuro.
NOTA: en esta fase, la solución debe tomar un color rosa pálido.
Agregar 4gr de carbon activado (sirve como filtro y debe decolorarla).
Envasar y guardar a 4°C.

6. 3. Baño de Ácido Sulfuroso:
5ml de Ácido Clorhídrico (HCl) 1N
6ml Metabisulfito sódico 10 %.
100ml de Agua destilada.
4. Colorante de contraste
Hematoxilina de Harris.
TECNICA
1. Desparafinar e hidratar.
2. Adicionar acido peryodico al 0,5%. 5 minutos.
3. Lavar con agua destilada.
4. Agregar el reactivo de Schiff. 15− 30 min.
5. Aclarar en 3 baños de agua sulfurosa 2 min. Cada uno.
6. Lavar en agua corriente. 5 minutos.
7. Sumergir en hematoxilina de harris de 30 a 60 segundos.
8. Lavar con agua corriente durante 5 minutos.
9. Deshidratar, aclarar y montar

7. OTRA FORMA
Preparación del reactivo de schiff:
Hervir el agua destilada y agregar fuscina basica, dejar enfriar y agregar
metabisulfito de sodio y 10 ml de acido clorhidrico 1N. Se envasa en un frasco
oscuro y se deja madurar por 24 horas. Agregar 4 gr de carbón activado.
Almacenar en refrigerador.
TECNICA
1. Desparafinar e hidratar.
2. Adicionar acido peryodico al 0,5%. 5 minutos.
3. Lavar con agua destilada.
4. Agregar el reactivo de Schiff. 20 minutos.
5. Lavar con agua corriente.
6. Sumergir en hematoxilina de Harris 5 minutos.
7. Lavar con agua corriente.
8. Deshidratar, aclarar y montar

8. Según el Manual de técnicas de histoquímica básica, UASLP

9. RESULTADOS
Material PAS positivo: rojo oscuro a magenta.
Compuestos PAS positivo :
 Polisacáridos simples: como el glucógeno y la celulosa.
 Mucopolisacaridos neutros: se encuentran en el epitelio gástrico, en glándulas
del duodeno y en cápsulas bacterianas, también en intestino y estómago.
 Mucoproteínas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del árbol
respiratorio o bronquial, también la tiroglobulina que está en el tiroides y la
hormona estimulante.
 Glucoproteínas del suero, membrana basal y fibras de reticula.
 Glucolípidos: como los gangliósidos y cerebrosidos.

10.  Compuestos PAS negativos.
Los mucopolisacaridos ácidos no pueden ser oxidados por el
ácido periódico y por eso son PAS negativos.