UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – I...
CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br />
CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> A imunofluorescência permite a detecção e localização de antígenosemcélulas e tecido...
 De acordo com o mesmoprincípio, podemosdetectar e localizaranticorposemfluidosbiológicosusandoseuantígenocorrespondente.<...
Testequalitativo/semi-quantitativo.
Método de altasensibilidade e altaespecificidade.</li></li></ul><li>CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> FLUOROCROMOS:
 Nos testes de imunofluorescência são empregados conjugados constituídos de anticorpos ligados covalentemente a moléculas ...
 1941: primeira vez que anticorpos foram conjugados com fluorocromos.
Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz visível, ou seja, ficam fluorescentes.</li></li></...
São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios clínicos para imunofluorescência.
Isotionato de fluoresceína e compostos da rodamina são os fluorocromos mais usados para conjugação com anticorpos para tor...
 A reação imunofluorescente que é desencadeada no microscópio de epifluorescência ocorre através da emissão de luz de cor ...
 Para deixar passar somente a emissão</li></ul> secundária desejada, devem-se utilizar filtros<br /> apropriados dependend...
CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> TIPOS DE REAÇÃO:</li></ul>Detecção de Ag<br />Detecção de Ag<br />Detecção de Ac<br ...
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)<br />
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)<br />Y<br />O anticorpo específico marcado com Fluorocromo (conjugado) é adicionado e se f...
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)<br /><ul><li>VANTAGENS
Alta especificidade e sensibilidade
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Aula prática de Imunologia ICS - UFBA: Imunofluorescencia

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I M U N O F L U O R E S C E N C I A

  1. 1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045<br />IMUNOFLUORESCÊNCIA<br />Trabalho realizado pela Acadêmica de Medicina Veterinária da UFBA Aretha Alves Borges da Silva sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.<br />
  2. 2. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br />
  3. 3. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> A imunofluorescência permite a detecção e localização de antígenosemcélulas e tecidosutilizandoanticorposespecíficos, marcados com fluorocromos, de modoque a localização dos antígenos se tornavisívelaomicroscópio de fluorescência.
  4. 4. De acordo com o mesmoprincípio, podemosdetectar e localizaranticorposemfluidosbiológicosusandoseuantígenocorrespondente.</li></li></ul><li>CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li>Baseia-se nacapacidade das moléculas de anticorpo se ligaremcovalentemente a fluorocromossemperdersuareatividadeespecífica com o antígeno.
  5. 5. Testequalitativo/semi-quantitativo.
  6. 6. Método de altasensibilidade e altaespecificidade.</li></li></ul><li>CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> FLUOROCROMOS:
  7. 7. Nos testes de imunofluorescência são empregados conjugados constituídos de anticorpos ligados covalentemente a moléculas reveladoras denominadas fluorocromos.
  8. 8. 1941: primeira vez que anticorpos foram conjugados com fluorocromos.
  9. 9. Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz visível, ou seja, ficam fluorescentes.</li></li></ul><li>CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> FLUOROCROMOS:
  10. 10. São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios clínicos para imunofluorescência.
  11. 11. Isotionato de fluoresceína e compostos da rodamina são os fluorocromos mais usados para conjugação com anticorpos para torná-los fluorescentes sob condições adequadas de iluminação.</li></li></ul><li>CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> MICROSCÓPIO DE EPIFLUORESCÊNCIA:
  12. 12. A reação imunofluorescente que é desencadeada no microscópio de epifluorescência ocorre através da emissão de luz de cor quando o fóton é excitado por luz de curto comprimento de onda (UV).
  13. 13. Para deixar passar somente a emissão</li></ul> secundária desejada, devem-se utilizar filtros<br /> apropriados dependendo da cor <br />do fluorocromo.<br />
  14. 14. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS<br /><ul><li> TIPOS DE REAÇÃO:</li></ul>Detecção de Ag<br />Detecção de Ag<br />Detecção de Ac<br />INDIRETA<br />DIRETA<br />
  15. 15. IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)<br />
  16. 16. IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)<br />Y<br />O anticorpo específico marcado com Fluorocromo (conjugado) é adicionado e se fixa ao antígeno, formando um imunocomplexo estável. <br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />O anticorpo não ligado é removido por lavagens.<br />O preparado é observado em microscópio de fluorescência.<br />Antígeno pesquisado<br />Y<br />Conjugado<br />
  17. 17. IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)<br /><ul><li>VANTAGENS
  18. 18. Alta especificidade e sensibilidade
  19. 19. Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua localização.
  20. 20. DESVANTAGENS
  21. 21. Alto custo do microscópio de fluorescência
  22. 22. Necessidade de um conjugadoparacadaantígenoque se desejaidentificaroulocalizar
  23. 23. Subjetividadedaleitura</li></li></ul><li>IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)<br /><ul><li> APLICAÇÕES
  24. 24. Detecção direta de microrganismos em secreções, na urina, nas fezes, em cortes de tecidos etc. Também é utilizada na fenotipagem de células tumorais.
  25. 25. Embacteriologia, um dos poucosmétodos de IFD aindausadosemlaboratóriaclínico é a identificação do Streptococcus do grupo A.</li></li></ul><li>IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)<br />
  26. 26. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)<br />PARA A PESQUISA DE ANTÍGENOS<br />Incuba-se a célula ou tecido em que se quer pesquisar o antígeno com o anticorpo específico obtido em animal ou um monoclonal, levando à formação de um imunocomplexo. <br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Realiza-se lavagem para retirada do anticorpo não ligante excedente.<br />A preparação é incubada com um conjugado antiimunoglobulina, marcado com fluorocromo, produzido em outra espécie de animal. <br />Antígeno pesquisado<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Conjugado<br />O preparado é observado em microscópio de fluorescência.<br />Y<br />Anticorpo Monoclonal<br />
  27. 27. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)<br />PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS<br />Antígenos padronizados são fixados a lâminas de vidro. <br />O soro do paciente é diluído, colocado sobre o antígeno e incubado para permitir a formação do complexo antígeno-anticorpo. <br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Realizam-se lavagens para a retirada dos anticorpos não ligados. <br />A preparação é incubada com o conjugado fluorescente e, se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo específico para o antígeno. <br />Antígeno padronizado<br />Y<br />Conjugado<br />Observa-se o preparado em microscópio de fluorescência. <br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Y<br />Anticorpo pesquisado<br />
  28. 28. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)<br /><ul><li> VANTAGENS
  29. 29. Sensibilidade
  30. 30. Especificidade
  31. 31. Reprodutibilidade
  32. 32. De simples padronização e execução
  33. 33. O mesmo conjugado pode ser usado em sistemas diferentes
  34. 34. Para determinar as classes e subclasses de anticorpos são utilizados conjugados específicos
  35. 35. DESVANTAGENS
  36. 36. Necessidade de microscópio de fluorescência
  37. 37. Subjetividade na leitura
  38. 38. Não-automação</li></li></ul><li>IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)<br /><ul><li>APLICAÇÕES
  39. 39. Medicina humana
  40. 40. Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas como a Doença de Chagas, a SIDA/AIDS, as hepatites e complexos em doenças auto-imunes.
  41. 41. Medicina Veterinária
  42. 42. Toxoplasmose, Neosporose, Raiva, Campilobacteriose Genital Bovina.</li></li></ul><li>CONSIDERAÇÕES FINAIS<br />As técnicas de imunofluorescência ainda são empregadas na rotina laboratorial, mas estão sendo gradativamente substituídas por testes imunoenzimáticos, principalmente devido à necessidade de microscopia, subjetividade de leitura e impossibilidade de automação.<br />

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