O documento resume uma pesquisa sobre a liberação de GABA no estriado de ratos sadios e lesados com 6-OHDA. O resumo apresenta os principais objetivos, métodos, resultados e conclusões parciais da pesquisa, que incluem a caracterização da dependência da liberação de GABA ao cálcio, os efeitos opostos dos receptores D1 e D2, a pouca influência dos receptores NMDA e algum efeito dos receptores kainato. Há também a conclusão parcial de que a liberação de GABA tende

1. Mestranda: Karen Silvia de Carvalho Homem
Orientador: Lanfranco R.P. Troncone
Apresentação para Seminários Gerais da Farmacologia – Outubro/2012

2. » Introdução
» Objetivos
» Material e Métodos
» Resultados e Discussão
» Conclusões Parciais

3. » Doença neurodegenerativa e progressiva;
» Atinge neurônios dopaminérgicos;
» Principais sintomas são motores: tremores de
repouso, rigidez muscular, bradicinesia ou até mesmo
acinesia, alterações de marcha, falta de expressão
facial;
» Há sintomas não motores: demora em responder
perguntas, lentidão de pensamentos, ausência e
pode-se chegar à demência.

4. » 10% dos casos são hereditários, o restante não tem
causas definidas;
» Atinge ≈ 1,5% da população mundial >65 anos,
subindo para 4-5% aos 85 anos de idade;
» Possíveis causas: neurotoxinas ambientais,
neuroinflamação, estresse oxidativo, disfunções
mitocondriais, prejuízo do tráfego intracelular, entre
outras.

5. » Tratamento:
˃ Farmacológico: L-DOPA, agonistas de DA, inibidores de MAO-B, inibidores de
COMT, drogas anticolinérgicas, amantadina (propriedades de antagonistas
glutamatérgicos)
+ Podem ser utilizados como monoterapia ou concomitantemente;
+ L-DOPA normalmente é necessária dentro dos 3 primeiros anos após o
diagnóstico, por ser melhor tolerada, mas o uso crônico leva às discinesias
˃ Cirúrgico: Lesão do Núcleo Subtalâmico que se encontra hiperativo e
Estimulação Cerebral Profunda (DBS)
+ Poucos pacientes elegíveis, alternativa extremamente invasiva
˃ Fisioterapêutico: exercícios para melhorar o equilíbrio e a marcha, treinos
para aumentar força muscular e mobilidade de juntas

6. » Modelos animais para estudo
˃ 6-OHDA
˃ MPTP
˃ Rotenona
˃ Paraquat e maneb
Fonte: Oliver von Bohlen und Halbach, Neurotransmitters and
Neuromodulators – Handbook of Receptors and Biological Effects, 2ª ed.,
pág. 72.

7. Núcleos da Base no rato
Fonte: Paxinos, G., The Rat Nervous System, 3ª ed., pág. 459.

8. Fonte: Adaptado de Fabio Blandini, 2000 e Atsushi Nambu, 2005

9. Fonte: Modificado de Fabio Blandini, 2000

10. » Neurotransmissor inibitório
» Receptores GABAA e GABAB
» Altera principalmente condutância de canais de
Cl- (GABAA) e Ca2+ e K+ (GABAB)
Neurônio medium spiny - NP
» No estriado GABA/parvalbumina - FS
GABA/somatostatina/NOS

11. Fonte: The Synaptic Organization of
The Brain, Gordon M. Shepherd, 4ª ed.,
pág. 346.

12. » Introdução
» Objetivos
» Material e Métodos
» Resultados e Discussão
» Conclusões Parciais

13. » Caracterizar a liberação de GABA no estriado de
ratos sadios e compará-la à de animais lesados
unilateralmente por 6-OHDA, tentando, desta
forma, descobrir mecanismos mediados por este
neurotransmissor e eventualmente explorá-los
como caminhos terapêuticos alternativos para a
Doença de Parkinson.

14. » Introdução
» Objetivos
» Material e Métodos
» Resultados e Discussão
» Conclusões Parciais

15. » Inibidores de mensageiros intracelulares
˃ Ca2+, Calcineurina, Calmodulina, CaMKII
» Drogas dopaminérgicas
˃ agonistas e antagonistas de DA e receptores D1 e D2
» Drogas glutamatérgicas
˃ agonistas e antagonistas de receptores NMDA e kaínico
» Ratos wistar, machos, do biotério do Instituto Butantan,
com peso entre 240 e 290g, regime de luz 12/12 h
(claro/escuro), umidade e temperatura controladas,
água e alimentos à vontade.

17. Câmaras com
estriado picado
Frações
coletadas
Agulhas de
gaseamento
Rack com reagentes:
Ringer KRB, Ringer KCl,
drogas de interesse, HCl

20. LL: +1,50 mm
AP: -1,90 mm
DV: -7,70 mm
Fonte: Paxinos, G. & Watson, C., The Rat Brain In Stereotaxic Coordinates, 6ª ed, pág. 49.

22. » Introdução
» Objetivos
» Material e Métodos
» Resultados e Discussão
» Conclusões Parciais

23. S1
S2
B2
B1
Estímulo com KCl 35 mM
Entrada das drogas

24. Liberação 3H-GABA x Solução sem Ca2+ Liberação 3H-GABA x W-7
0.8
0.6 Controle
Controle 100 M
N controle: 9, N Ca2+0: 6
N controle: 24, N W7: 13
0.6
0.4 Sem Ca2+
~50%
S2/S1
S2/S1
0.4
~80% *
0.2
0.2
*
0.0 0.0
Inibidor Calmodulina
3
Liberação H-GABA x KN-62
Controle
1.0
3 M
N controle: 6, N KN-62: 6
0.8
0.6
S2/S1
0.4
0.2
Inibidor CMKII
0.0

25. Liberação 3H-GABA x Spiperona Liberação 3H-GABA x Bromocriptina
0.8 0.8
N controle: 6, N Bromocriptina: 6
Controle ~20%
N controle: 18, N Spiperona: 9
100 M 0.6
Controle
0.6 * 100 nM
S2/S1
S2/S1
0.4 ~60% 0.4
* 0.2
0.2
0.0 0.0
Antagonista Agonista

26. Liberação 3H-GABA x SCH 23390
Liberação GABA x SCH 23390
Controle
0.8 1.0
3 nM
N controle: 6, N SCH23390: 6
N controle: 12, N SCH23390: 6
Controle 0.8 ~20%
0.6
~60%
100 M
0.6 *
S2/S1
S2/S1
0.4
* 0.4
0.2
0.2
0.0 0.0
Antagonista
Liberação 3H-GABA x SKF 38393
0.8
N controle: 6, N SKF38393: 6
Controle
100 M
0.6
S2/S1
0.4
0.2
0.0
Agonista

27. Liberação 3H-GABA x Apomorfina Liberação 3H-GABA x Apomorfina
Controle
N controle: 21, N Apomorfina: 12
N controle: 6, N Apomorfina: 6
0.8 1.0 Controle
100 M 1 M
0.8
0.6
0.6
S2/S1
S2/S1
0.4
0.4
0.2
0.2
0.0 0.0

28. Liberação 3H-GABA x NMDA Liberação 3H-GABA x MK801
N controle: 3, N NMDA em cada conc.: 3
1.0 2.0
Controle
Controle
N controle: 6, N MK801: 6
0.8 10 uM
1.5 100 M
30 uM
0.6 100 uM
S2/S1
S2/S1
300 uM 1.0
0.4
1000 uM
0.5
0.2
0.0 0.0
Agonista NMDA Antagonista NMDA
Liberação de 3H-GABA x Kainato
1.5
Controle
N controle: 6, N kainato: 6
100 M
1.0
~45%
S2/S1
*
0.5
0.0
Agonista kainato

29. 250
Análise comportamental giratório
animais lesados 6-OHDA
200
Número de giros (1/4 volta)
Número de giros (1/4 volta)
300
150
200
Média = 83,35 ± 56,73
100
100
50
0
0
in in in in in
5m 10 m 15 m 20 m 25 m in
15 m
Tempo (minutos)

30. Liberação de 3H-GABA x Agonistas D1 e D2
N controles: 6, N em cada droga: 6
1.0
Controle Lado Esquerdo
lado lesado
0.8 SKF 38393 50 M E
lado controle
Bromocriptina 50 M E
0.6 Controle Lado Direito
S2/S1
SKF 38393 50 M D
0.4
Bromocriptina 50 M D
0.2
0.0

31. » Introdução
» Objetivos
» Material e Métodos
» Resultados e Discussão
» Conclusões Parciais

32. » Liberação de GABA é fortemente cálcio-dependente;
» Receptores dopaminérgicos D1 e D2 têm efeitos
opostos sobre a liberação;
» Receptores NMDA têm pouca ou nenhuma
influência, neste modelo; já receptores kainato
exercem algum efeito, embora o mecanismo precise
ser melhor investigado;
» Até onde pudemos avaliar, em animais lesados, há
tendência de aumento da liberação de GABA no lado
lesado.