Seminario llevado a cabo por Br. del tercer año de las ciencias básicas en la Facultad de Medicina- Universidad de la República, URUGUAY. Año 2014

1. UNIVERSIDAD DE LA REPÚBLICA
FACULTAD DE MEDICINA- BCC6 BLOQUE 3.
¿Son los Ac Monoclonales una alternativa terapéutica a considerar para el
tratamiento del Ébola?
Br.: Felipe Duarte
Br.: José Luis Locher-
Br.: Fernanda Nuñez
Br: Valentina Vargas

3. ¿QUÉ ES EL EBOLA?
Enfermedad infecciosa viral aguda.
Primera fotografía de EBOV del brote
en Zaire, 1976
Tasa de letalidad: hasta 70% (actualizada según revisión
bibliográfica).
Nuevo brote surgido en 2014: Tasa entre 55-60%

5. FAMILIA: FILOVIRIDAE.
GÉNERO: FILOVIRUS. (FORMA FILAMENTOSA).
ARN monocatenario lineal de
polaridad negativa.
Nucleocápside proteico con
forma tubular rodeado de cápside..
Membrana espiculada.
Glicoproteína de envoltura (GP)
es la responsable de la unión del
virus al receptor y la fusión de
la membrana viral a la de la
célula hospedadora.
Datos actuales sugieren que región tipo Mucina (mucin-like region- MLR)
Sobre GP juega un rol importante en union a células objetivo.

6. REPLICACIÓN DE EBOV.
ARN monocatenario negativo es complementario del ARNm y por lo tanto debe
convertirse a ARN + por una ARN pol antes de la traducción.
(-)ssARN no es infeccioso, debe ser traducido en ARN +.

7. ESTRUCTURA Y PROPAGACIÓN.

9. SIGNOS Y SÍNTOMAS:
Produce:
 Fiebre hemorrágica.
Sintomatología:
 Fiebre (solo 87% presentan)
 Mialgia
 Vómitos
 Diarrea
 Fallo renal
 Fallo hepático
 Hemorragia masiva interna y externa
Resultados de laboratorio muestran:
• Leucopenia
• Plaquetopenia
• Elevación de las enzimas hepáticas.

10. PATOGENIA
Células objetivo del virus:
• Células del Sistema Monocítico Fagocitario que liberan:
 Citoquinas y quimioquinas TORMENTA DE CITOQUINAS
 TFN
• CDs incapaces de madurar y regular la activación de LT.

11. PATOGENIA
 Células endoteliales se infectan en la última etapa de la enfermedad.
Glicoproteina GP de envoltura mayor determinante de a injuria vascular.
 Citoquinas contribuyen a:
 Desarrollo de coagulación intravascular diseminada.
 Inducción de procoagulantes y
 Moléculas de adhesión y la destrucción del tejido.
 Lisis masiva de:
 Linfocitos en bazo, timo y nódulos linfáticos en etapas tardías de la infección
 Citolisis masiva, disfunción inmune, cambios de fluidos, coagulación
microvascular y hemorragia intersticial
Fallo multiorgánico: SHOCK

12. DIAGNÓSTICO.
 Previamente se debe descartar otras enfermedades:
Paludismo,
Fiebre tifoidea
Cólera,
Leptospirosis.
 Virus del Ébola solo puede diagnosticarse mediante:
• ELISA
• Prueba de detección de antígenos.
• Prueba de seroneutralización
• RT-PCR: Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa
• Cultivo celular.

13. TRATAMIENTO
Timeline of Infection Diagnostic tests available
Within a few days after symptoms begin •Antigen-capture enzyme-linked immunosorbent
assay (ELISA) testing
•IgM ELISA
•Polymerase chain reaction (PCR)
•Virus isolation
Later in disease course or after recovery •IgM and IgG antibodies
Retrospectively in deceased patients
•Immunohistochemistry testing
•PCR
•Virus isolation
Información extraída de CDC (Center of Disease Control)
Las personas que se recuperan de la infección desarrollan anticuerpos
que pueden durar 10 años. (otra posible solución)

14. TRATAMIENTO
 Actualmente: Cuidados médicos de apoyo:
 Paliativo.
 Rehidratación
 Reposición electrolítica.
En curso: Ac. Monoclonales.
Pruebas experimentales que mostraron resultados prometedores.
•Proteína C humana recombinante activada
•Proteína C2 anticoagulante de nemátodo recombinante
•ARN interferencia
•Oligomeros morfolino fosforodiamidato cargado positivamente
•AC MONOCLONALES

15.  Supervivencia ante Dx y tto con MB003.
Método de estudio:
Tratamiento:
7/9 animales: PCR positivo antes de la fiebre. Titulo viral varia entre las poblaciones en
tiempos paralelos.
Animales que eran mas lentos en desarrollar títulos virales tuvieron muchas mas
probabilidades de sobrevivir a la prueba, para aquellos dos donde el desencadenador
de RT-PCR vino después de la fiebre.
Conclusión:
 Tto eficaz si se inicia pronto se detecta viremia.
 Entre animales tratados , 43% (3/7) sobreviven.
Dos de ellos mostraron síntomas mínimos, el
tercero mostro síntomas moderados
 Controles (2) fallecen.
 Controles históricos (4), sucumben.

16.  Ac monoclonales: Cocktail con MB003/ZMAb
 Ac quimérico: MB003 (mAbs c13C6, h13F6, c6D8)
 ZMAb: Ac murino (m1H3, m2G4, m4G7)
o Estudio con chanchos de Guinea, se les da una dosis de mAbs de
forma separada cada uno 1 día post infección con EBOV-M-GPA (virus
adaptado al chancho de variante Mayinga)
NHM se les dio tres dosis de cada uno de los antes mencionados mAbs
24 post infección con de EBOV variante Kikwit (EBOV-K)
Solo tratamiento con c13C6 mostro sobrevivientes

17.  Combinaciones utilizadas:
ZMapp 1: c13C6, c2G4, c4G7.
ZMapp 2: c13C6, c1H3, c2G4.
ZMapp 3: c13c6, c1H3, c4G7.
ZMapp1 es quien muestra mayor protección: 4/6
Para extender vida media de los Ac
en humanos y facilitar aceptación
clínica, Ac murinos (mAbs) fueron
quimerizados con regiones
constantes de humanos (c1h3, c2G4
y c4G7)

18.  Una vez comprobado que el mAbs mas efectivo era c13C6, se lo usa
en combinación con tres mAbs de ZMAb.
 Se obtiene que Zmapp1 muestra mejor protección. Se continua con
experimentación para testear el límite de protección.
NHPs tratados con Zmapp-1.
•Población: tres grupos de 6 macacos mas grupo
control de 3.
•Adm 50mg/kg/dosis espaciado 3 dias.
•Luego de desafío letal i/m con 1000x TCID50 de
EBOV-K se trato los animales con Zmapp :
Grupo D: 3-6-9 dpi
Grupo E: 4-7-10 dpi
Grupo F: 5-8-11 dpi.
Grupo G: CONTROL con buffer fosfato salino
ó IgG.: SUCUMBEN.
Abnormalidad en conteo sanguineo
y BQ del suero en TODOS los grupos:
Fiebre, leucocitosis, trombocitopenia
y. viremia.

19. ZMAPP1 EFECTIVO PARA EBOV-G TAMBIÉN?
Comparación directa de la secuencia de amino
ácidos entre EBOV-G y EBOV-K mostró que los
epítopes objetivo de Zmapp no estaban mutados
entre las dos variantes.
La concentración efectiva de ambas variantes
presenta diferencia significativa. A misma
concentracion de c13C6, mayor efectividad en
EBOV-G

20. OTRAS SOLUCIONES POSIBLES
• No se obtienen de la literatura recomendada.
• Utilización de suero convaleciente:
 Obtenida de pacientes que se infectó y logró la cura efectivamente.
 Se debe de tener en cuenta el grupo sanguíneo (ABO) entre D – R, así
como el donante tampoco debe tener enfermedades.
• Vacunas con ADN recombinante:
 Pequeños anillos de ADN llamados plásmidos en los que se introduce tan
sólo la pequeña fracción del material genético del patógeno contra el que
se pretende inmunizar.
 Penetra dentro de la célula y llega al núcleo, para generar desde allí la
producción de los antígenos del patógeno que desencadenarán la
respuesta inmune

22. CONCLUSIONES…VENTAJAS/DESVENTAJAS
 Se ha comprobado la eficacia del Zmapp en más de la mitad de la población a la
que se aplicó.
 Producción transgénica a partir en planta de tabaco (Nicotiana Benthamiana) lo
que supone una fácil obtención.
 No se tiene en cuenta las compatibilidades del suero de paciente receptor.
 Es caro, no hay stock disponible al momento.
 El número de personas tratadas no garantiza su efectividad, de hecho no ha
pasado la fase 1 de experimentación.
 Se debe tener en cuenta que el virus mute, y el Ac producido, no resulte efectivo.
 No supone un mecanismo de profilaxis, sino más bien de tratamiento luego de
exposición.
 Ante posible re-exposición existe incertidumbre de si sigue el individuo siendo
susceptible al virus.