clase de microscopio, UNIVERSIDAD experimental romulo gallegos

1. TÉCNICASTÉCNICAS
HISTOLÓGICASHISTOLÓGICAS
TECNICA DE MONTAJETECNICA DE MONTAJE
MICROSCOPIOMICROSCOPIO
ÓPTICO COMPUESTOÓPTICO COMPUESTO
COLORANTESCOLORANTES
COLORACIÓNCOLORACIÓN
Clase 1Clase 1

2. TÉCNICAS HISTOLÓGICASTÉCNICAS HISTOLÓGICAS
Es el conjunto de procesos aplicados paraEs el conjunto de procesos aplicados para
preservar la estructura y la organización depreservar la estructura y la organización de
la célula y los tejidos, a fin de obtener unala célula y los tejidos, a fin de obtener una
preparación microscópica que permita supreparación microscópica que permita su
examen con el microscopio óptico.examen con el microscopio óptico.
Abarcan desde el momento en que se tomaAbarcan desde el momento en que se toma
el material (toma de muestra) hasta que elel material (toma de muestra) hasta que el
preparado puede observarse.preparado puede observarse.

3. PASOS DE LAS TÉCNICASPASOS DE LAS TÉCNICAS
HISTOLÓGICASHISTOLÓGICAS
• 1.- Toma de la muestra1.- Toma de la muestra
• 2.- Fijación2.- Fijación
• 3.- Deshidratación3.- Deshidratación
• 4.- Aclaración4.- Aclaración
• 5.- Inclusión en parafina5.- Inclusión en parafina
• 6.- Modelado del bloque – catalogación6.- Modelado del bloque – catalogación
• 7.- Corte7.- Corte
• 8.- Montaje del corte en el portaobjeto8.- Montaje del corte en el portaobjeto
• 9.- Desparafinación9.- Desparafinación
• 10.-10.- HidrataciónHidratación
• 11.-11.- Coloración: de rutina o especialesColoración: de rutina o especiales

4. TÉCNICAS HISTOLÓGICASTÉCNICAS HISTOLÓGICAS
• TOMA DE MUESTRATOMA DE MUESTRA
– FROTISFROTIS
– IMPRONTAIMPRONTA
– ASPIRACIÓN Y/O LAVADOASPIRACIÓN Y/O LAVADO
– PUNCIÓN/ASPIRACIÓN CON AGUJA FINAPUNCIÓN/ASPIRACIÓN CON AGUJA FINA
– PUNCIÓN CON TROCARPUNCIÓN CON TROCAR
– BIOPSIABIOPSIA
– NECROPSIANECROPSIA

5. TÉCNICAS HISTOLÓGICASTÉCNICAS HISTOLÓGICAS
ETAPASETAPAS FINALIDADFINALIDAD DURACIÓNDURACIÓN
FIJACIÓFIJACIÓN: en fijador simple oN: en fijador simple o
mezclas fijadora (formol 10%, vol.mezclas fijadora (formol 10%, vol.
40/1)40/1)
Preserva la morfología yPreserva la morfología y
composición de los tejidos, detienecomposición de los tejidos, detiene
los procesos vitales, evita lalos procesos vitales, evita la
autolisisautolisis
De 12 a 24 horas, dependiendo delDe 12 a 24 horas, dependiendo del
fijador y del tamaño de la piezafijador y del tamaño de la pieza
DESHIDRATACIÓNDESHIDRATACIÓN : en alcohol: en alcohol
etílico (etanol), en concentracionesetílico (etanol), en concentraciones
crecientes, empezando con 70º ycrecientes, empezando con 70º y
terminando con 100ºterminando con 100º
Eliminar el agua de los tejidos,Eliminar el agua de los tejidos,
facilitando la penetración defacilitando la penetración de
solventessolventes
De 6 a 24 horas, dependiendo delDe 6 a 24 horas, dependiendo del
tamaño de la piezatamaño de la pieza
ACLARACIÓNACLARACIÓN : en benzol, xilol o: en benzol, xilol o
toluol, solventes del alcohol y latoluol, solventes del alcohol y la
parafinaparafina
Embeber la pieza con unaEmbeber la pieza con una
sustancia miscible con la parafina,sustancia miscible con la parafina,
favoreciendo la penetración de lafavoreciendo la penetración de la
parafinaparafina
De 1 a 6 horas dependiendo delDe 1 a 6 horas dependiendo del
tamaño de la piezatamaño de la pieza
IMPREGNACIÓNIMPREGNACIÓN : con parafina: con parafina
fundida en autotecnicon a 60ºCfundida en autotecnicon a 60ºC
La parafina penetra en los vasos,La parafina penetra en los vasos,
en los espacios intercelulares yen los espacios intercelulares y
también en el interior de la célulatambién en el interior de la célula
impregnando el tejidos otorgandoimpregnando el tejidos otorgando
dureza para facilitar la obtención dedureza para facilitar la obtención de
cortes en el microtomocortes en el microtomo
De 30 minutos a 6 horas,De 30 minutos a 6 horas,
dependiendo del tamaño de ladependiendo del tamaño de la
piezapieza
INCLUSIÓNINCLUSIÓN : la pieza se coloca: la pieza se coloca
en un molde rectangular queen un molde rectangular que
contiene parafina fundidacontiene parafina fundida
Obtención del bloque de parafinaObtención del bloque de parafina
de forma regular, para dar unde forma regular, para dar un
soporte al tejido y facilitar el cortesoporte al tejido y facilitar el corte
en el microtomoen el microtomo

6. TÉCNICAS HISTOLÓGICASTÉCNICAS HISTOLÓGICAS
ETAPASETAPAS FINALIDADFINALIDAD INSTRUMENTINSTRUMENT
OO
CORTE: 8- 10CORTE: 8- 10 µmµm Permite la visualización dePermite la visualización de
estructuras pequeñasestructuras pequeñas
MicrotomoMicrotomo: instrumento de: instrumento de
precisión, para obtener cortesprecisión, para obtener cortes
muy delgados (8-10muy delgados (8-10 µm)µm) yy
uniformesuniformes
MOMTAJE DELMOMTAJE DEL
CORTE EN ELCORTE EN EL
PORTAOBJETOPORTAOBJETO
Soporte para la observación en elSoporte para la observación en el
microscopiomicroscopio
PORTAOBJETOSPORTAOBJETOS : los cortes se: los cortes se
depositan en un recipiente condepositan en un recipiente con
agua y luego se montan en losagua y luego se montan en los
portaobjetosportaobjetos
DESPARAFINACIÓNDESPARAFINACIÓN Facilita la penetración del alcoholFacilita la penetración del alcohol Xilol, benzol, se sumengen losXilol, benzol, se sumengen los
tejidos en concentracionestejidos en concentraciones
decrecientesdecrecientes
HIDRATACIÓNHIDRATACIÓN Permite la penetración de losPermite la penetración de los
colorantes acuososcolorantes acuosos
La muestra se sumerge enLa muestra se sumerge en
soluciones de etanol ensoluciones de etanol en
concentraciones decrecientesconcentraciones decrecientes
hasta el lavado final en aguahasta el lavado final en agua
destiladadestilada
COLORACIÓNCOLORACIÓN Otorga colores diferentes a laOtorga colores diferentes a la
muestramuestra
Es necesaria para dar mayorEs necesaria para dar mayor
contraste a los tejidoscontraste a los tejidos
DESHIDRATACIÓNDESHIDRATACIÓN Facilita el montaje con mediosFacilita el montaje con medios
hidrófoboshidrófobos
Soluciones crecientes de etanolSoluciones crecientes de etanol
ACLARACIÓNACLARACIÓN Otorga transparencia a los tejidosOtorga transparencia a los tejidos Otorga transparencia a los tejidosOtorga transparencia a los tejidos

7. COLORACIÓNCOLORACIÓN
• Es la propiedad que poseen algunos cuerpos de ejercerEs la propiedad que poseen algunos cuerpos de ejercer
sobre la luz una absorción selectiva, es decir, un cuerpo sesobre la luz una absorción selectiva, es decir, un cuerpo se
ve con color porque él absorbe algunas ondas de luz.ve con color porque él absorbe algunas ondas de luz.
• Los cuerpos absorben las ondas de los colores de acuerdoLos cuerpos absorben las ondas de los colores de acuerdo
a su composición química, es decir, el color es la morfologíaa su composición química, es decir, el color es la morfología
de la constitución químicade la constitución química
• El color de una sustancia se debe a la presencia deEl color de una sustancia se debe a la presencia de
radicales, que dan a la molécula el color.radicales, que dan a la molécula el color.
• Esos grupos se denominan cromóforos y la sustancias queEsos grupos se denominan cromóforos y la sustancias que
contienen sus moléculas son llamadas cromógenas.contienen sus moléculas son llamadas cromógenas.
• Tiene por objeto aumentar el contraste de las estructurasTiene por objeto aumentar el contraste de las estructuras

8. TÉCNICAS HISTOLÓGICAS COLORATESTÉCNICAS HISTOLÓGICAS COLORATES
• ColoranteColorante: es una sustancia natural o artificial: es una sustancia natural o artificial
que tiene la capacidad de transmitir su color a otraque tiene la capacidad de transmitir su color a otra
sustancia o elemento afín a él, según susustancia o elemento afín a él, según su
composición química o la presencia de ciertoscomposición química o la presencia de ciertos
radicales en su estructura.radicales en su estructura.
• Pueden ser:Pueden ser:
ÁcidosÁcidos----negativo----aniónico-----acidófilas---------negativo----aniónico-----acidófilas-----
rosadorosado
Básicos-Básicos----positivos---catiónicos----basófilos--------positivos---catiónicos----basófilos-----
azulazul

9. COLORANTESCOLORANTES
• Aunque existen varios tipos de colorantes paraAunque existen varios tipos de colorantes para
observar los múltiples componentes de las célulasobservar los múltiples componentes de las células
y tejidos, pueden agruparse en tres clases:y tejidos, pueden agruparse en tres clases:
– Colorantes que diferencian los componentes ácidos yColorantes que diferencian los componentes ácidos y
básicos de las célulasbásicos de las células
– Colorantes especializados que distinguen losColorantes especializados que distinguen los
componentes fibrosos de la matriz extracelularcomponentes fibrosos de la matriz extracelular
– Sale metálicas que se precipitan en los tejidos y formanSale metálicas que se precipitan en los tejidos y forman
depósitos de metales en ellos.depósitos de metales en ellos.

10. COLORACIÓNCOLORACIÓN RESULTADORESULTADO
HematoxilinaHematoxilina
Color azul:Color azul: núcleo, matriz del cartílago, regionesnúcleo, matriz del cartílago, regiones
ácidas del citoplasmaácidas del citoplasma
EosinaEosina
Color rosado:Color rosado: fibras colágenas, región básica delfibras colágenas, región básica del
citoplasmacitoplasma
Tricrómica de MassonTricrómica de Masson
Color azul oscuro:Color azul oscuro: núcleosnúcleos
Color rojo:Color rojo: músculo, queratina, citoplasmamúsculo, queratina, citoplasma
Color azul claro:Color azul claro: mucinógeno, colágenomucinógeno, colágeno
Elástica de OrceínaElástica de Orceína
Color pardo:Color pardo: fibras elásticasfibras elásticas
Elástica de WeigertElástica de Weigert
Color azul:Color azul: fibras elásticasfibras elásticas
ArgénticaArgéntica
Color negro:Color negro: fibras reticularesfibras reticulares
Hematoxilina férricaHematoxilina férrica Color negroColor negro: estrías del músculo, núcleos, eritrocitos: estrías del músculo, núcleos, eritrocitos
Ácido Periódico de SchiffÁcido Periódico de Schiff
Color magenta:Color magenta: glucógeno, moléculas ricas englucógeno, moléculas ricas en
carbohidratoscarbohidratos
Wrigth y GiemsaWrigth y Giemsa
Color rosadoColor rosado: eritrocitos, gránulos de eosinófilos.: eritrocitos, gránulos de eosinófilos.
Color purpúreo:Color purpúreo: núcleos de los leucocitos, gránulosnúcleos de los leucocitos, gránulos
de basófilosde basófilos
Color azul:Color azul: citoplasma de monocitos y linfocitoscitoplasma de monocitos y linfocitos

11. EL MICROSCOPIOEL MICROSCOPIO
• El Microscopio es cualquiera de los distintosEl Microscopio es cualquiera de los distintos
tipos de instrumentos que se utilizan paratipos de instrumentos que se utilizan para
obtener una imagen aumentada de objetos.obtener una imagen aumentada de objetos.
• Los microscopios compuestos surgieron en elLos microscopios compuestos surgieron en el
siglo XVII, diestramente utilizados por elsiglo XVII, diestramente utilizados por el
holandés Antonie van Leewenhock en elholandés Antonie van Leewenhock en el
estudio de la microfauna de los estanques yestudio de la microfauna de los estanques y
charcas y por Robert Hooke, con los primeroscharcas y por Robert Hooke, con los primeros
estudios de células.estudios de células.

12. TIPOS DE MICROSCOPIOSTIPOS DE MICROSCOPIOS
• El microscopio compuestoEl microscopio compuesto u óptico utiliza lentes parau óptico utiliza lentes para
ampliar las imágenes de los objetos observados. El aumento obtenidoampliar las imágenes de los objetos observados. El aumento obtenido
con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda decon estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de
la luz visible que impone limitaciones.la luz visible que impone limitaciones.
• Microscopio de campo oscuroMicroscopio de campo oscuro .. Este microscopioEste microscopio
está provisto de unestá provisto de un condensador paraboloidecondensador paraboloide , que hace que los, que hace que los
rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino querayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que
iluminan oblicuamente la preparación. Los objetos aparecen comoiluminan oblicuamente la preparación. Los objetos aparecen como
puntos luminosos sobre un fondo oscuropuntos luminosos sobre un fondo oscuro..
• Microscopio de fluorescenciaMicroscopio de fluorescencia .. La fluorescencia esLa fluorescencia es
la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propiala propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propia
cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas.cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas.

13. TIPOS DE MICROSCOPIOSTIPOS DE MICROSCOPIOS
• Microscopio de contraste deMicroscopio de contraste de
fasesfases.. Se basa en las modificaciones de laSe basa en las modificaciones de la
trayectoria de los rayos de luz, los cualestrayectoria de los rayos de luz, los cuales
producen contrastes notables en la preparación.producen contrastes notables en la preparación.
• El microscopio electrónicoEl microscopio electrónico utilizautiliza
como fuente de iluminación un haz decomo fuente de iluminación un haz de
electrones de alta velocidad acelerados en altoelectrones de alta velocidad acelerados en alto
vacío y enfoca sobre una pantalla por medio devacío y enfoca sobre una pantalla por medio de
un campo electromagnéticoun campo electromagnético

14. MICROSCOPIO ÓPTICOMICROSCOPIO ÓPTICO
COMPUESTOCOMPUESTOEl microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:
• El sistema mecánicoEl sistema mecánico está constituido por una serie deestá constituido por una serie de
piezas en las que se instalan las lentes y partes que permitenpiezas en las que se instalan las lentes y partes que permiten
el movimiento para el enfoque.el movimiento para el enfoque.
• El sistema ópticoEl sistema óptico comprende un conjunto de lentescomprende un conjunto de lentes
dispuestas de tal manera que produce el aumento de lasdispuestas de tal manera que produce el aumento de las
imágenes que se observan a través de ellas.imágenes que se observan a través de ellas.
• El sistema de iluminaciónEl sistema de iluminación comprende las partes delcomprende las partes del
microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad demicroscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de
luz necesaria para efectuar la observación a través delluz necesaria para efectuar la observación a través del

15. La parte mecánica delLa parte mecánica del
microscopiomicroscopio
Estos elementos sostienen la parte óptica y deEstos elementos sostienen la parte óptica y de
iluminación, y permiten los desplazamientosiluminación, y permiten los desplazamientos
necesarios para el enfoque del objeto:necesarios para el enfoque del objeto:
• El pieEl pie
• El tuboEl tubo
• El revólverEl revólver
• El asa o columnaEl asa o columna
• La platinaLa platina
• El carroEl carro
• El tornillo macrométricoEl tornillo macrométrico
• El tornillo micrométricoEl tornillo micrométrico

16. Sistema óptico delSistema óptico del
microscopiomicroscopio
Es el encargado de reproducir y aumentar lasEs el encargado de reproducir y aumentar las
imágenes mediante el conjunto de lentesimágenes mediante el conjunto de lentes
dispuestas de tal manera que produce eldispuestas de tal manera que produce el
aumento de las imágenes que se observan aaumento de las imágenes que se observan a
través de ellas.través de ellas.
• Los ocularesLos oculares
• Los objetivos.Los objetivos.

17. Sistema de iluminación delSistema de iluminación del
microscopiomicroscopio
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luzEste sistema tiene como finalidad dirigir la luz
de tal manera que ilumine la preparación ude tal manera que ilumine la preparación u
objeto que se va a observar en el microscopio.objeto que se va a observar en el microscopio.
Comprende los siguientes elementos:Comprende los siguientes elementos:
• El condensadorEl condensador
• El DiafragmaEl Diafragma

19. Propiedades del microscopioPropiedades del microscopio
• Poder separadorPoder separador oo poder de resoluciónpoder de resolución , es la, es la
distancia mínima entre dos puntos próximos quedistancia mínima entre dos puntos próximos que
pueden verse separados. (0,2 micras)pueden verse separados. (0,2 micras)
• Poder de definiciónPoder de definición . Se refiere a la nitidez de las. Se refiere a la nitidez de las
imágenes obtenidas, sobre todo respecto a susimágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus
contornos. Depende de la calidad y de la correccióncontornos. Depende de la calidad y de la corrección
de las aberraciones de las lentes utilizadas.de las aberraciones de las lentes utilizadas.
• Aumento del microscopioAumento del microscopio . Es la relación entre. Es la relación entre
el diámetro aparente de la imagen y el diámetro oel diámetro aparente de la imagen y el diámetro o
longitud del objeto. Para calcular el aumento de unlongitud del objeto. Para calcular el aumento de un
microscopio, basta multiplicar el aumento del ocularmicroscopio, basta multiplicar el aumento del ocular
por el aumento del objetivo.

21. Célula, funciones, propiedades,
Membrana y citoplasma