cromatografia técnica utilizada para separar compuestos por medio de dos faces una movil y otra estacionaria.... o extracción de un principio activo de un medicamento.

1. CROMATOGRAFÍA
JOEL SANTOS LOPEZ PEREZ
Lic.:
OMAR TORRES
QUIMICO FARMACEUTICO
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA REGENCIA EN FARMACIA
MONTERÍA _ CÓRDOBA
2011

2. INTRODUCCIÓN
La clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde y
que absorbe la luz necesaria para la fotosíntesis, principalmente luz violeta roja y
azul y refleja luz verde.
Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculas
químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. El
color de un pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes de
onda de la luz y de la reflexión de otras. Constituyen el sustrato fisicoquímico
donde se asienta el proceso fotosintético.
Hay diversas clases de pigmentos:
• Clorofilas (a, b, c, d y bacterioclorofilas) de coloración verde.
• Carotenoides (carotenos y xantofilas) de coloración amarilla y roja.
• Ficobilinas de coloración azul y roja presentes en las algas verdeazuladas, que
comprenden el filo de los Coanocitos.
Los colores que presentan los vegetales son debido a unos compuestos químicos
llamados pigmentos; el color que presenta un determinado órgano vegetal
depende generalmente del predominio de uno a otro pigmento o la combinación
de ellos. Además, algunos de los pigmentos que condicionan el color están
estrechamente ligados a las actividades fisiológicas del propio vegetal.
El estudio de los diferentes pigmentos presentes en los vegetales se pueden
estudiar a partir de unas técnicas cromatografías que permiten conocer los
distintos carotenos presentes en las plantas.
Estas técnicas dependen en gran forma de la distribución de los componentes de
la mezcla de una muestra entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada
también activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en
relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser un
líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. Las
combinaciones de estos componentes dan lugar a los distintos tipos de técnicas
cromatografías.

3. OBJETIVOS
GENERAL
 Realizar procesos de deshidratación, extracción y separación de
diferentes pigmentos vegetales, mediante técnicas cromatografías que
permitan identificar los metabolitos presentes en estas.
ESPECIFICOS
 Seleccionar una serie alotrópica de eluentes que mejor separe los
carotinoides presentes en diferentes muestras vegetales.
.
 Desarrollar fraccionamiento cromatografico, mediante con el mejor
eluente que contribuya a la extracción de carotinoides hasta aislar
compuestos puros y caracterizarlos por métodos de coloración,
cromatografías.
 Conocer otros sistemas cromatografico para la separación de
carotenos.

4.  .Aplicar la cromatografía como técnica de separación de mezclas de
sustancias, aprovechando sus características y los factores que en ella
intervienen.
 Analizar la influencia del diclorometano en la separación cromatografía,
mediante su comportamiento frente a las distintas técnicas utilizadas
para la determinación de su eficacia.
 Determinar la efectividad de la cromatografía de capa fina y en columna,
a partir de la muestra salsa de tomate, para la asimilación de sus
diferentes pigmentos.
TEORÍA RELACIONADA
La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución
de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o
estacionaria y otra móvil.
En cromatografía liquida la fase móvil es un liquido que fluye a través de una
columna que contiene la fase fija.
La cromatografía liquida “clásica” se lleva a cabo en una columna
generalmente de vidrio, la cual está llena con la fase fija. Luego de sembrar la
muestra en la parte superior, se hace fluir la fase móvil a través de la columna
por efecto de la gravedad con el objeto de aumentar la eficiencia en las
separaciones, el tamaño de las partículas de fase fija se fue disminuyendo
hasta el tamaño de los micrones, lo cual genero la necesidad de utilizar altas

5. presiones para lograr que fluya la fase móvil. De esta manera nació la técnica
de cromatografía liquida de alta resolución, que requiere de instrumental
especial que permita trabajar con altas presiones requeridas.
Tanto los extractos de los productos naturales, como los crudos de las
reacciones orgánicas, suelen res mezclas multicomponentes, a menudo muy
complejas. Este hecho constituyo un serio impedimento para el estudio de
unos y de otros, por parte de los químicos, hasta la implantación de los
modernos métodos de separativos. Entre estos, uno de los de mayor
revelación ha alcanzado, es la cromatografía de absorción en columna.
Es comprensible que, después de realizar una reacción largo tiempo
programada, les resulte duro separar al desenlace de una separación
cromatografía, que puede requerir semanas para disponer de una muestra de
productos puros.
El proceso desarrollado para la obtención y estudio de los distintos pigmentos
de los vegetales se puede realizar mediante:
Deshidratación: Es la pérdida excesiva de agua y sales minerales de un
cuerpo. Puede producirse por estar en una situación de mucho calor (sobre
todo si hay mucha humedad). En plantas se realiza con el fin de que la
muestra quede libre de solventes, utilizando un alcohol, y sometiendo a
calentamiento durante uno minutos. Por último se filtra sobre gasa o algodón.
Extracción: Método utilizado para la preservación de la muestra vegetal,
donde se presenta evaporación del solvente de los extractos a presión
reducida, lo que permite una mayor concentración de la muestra mediante la
disminución de la temperatura de ebullición del solvente, para la obtención de
un mejor extracto.

6. Fraccionamiento cromatografico: Recolección de pequeñas cantidades de la
muestra vegetal extraída mediante un proceso de separación que permite
obtener los carotenos en partes menos sucias de la muestra.
Cromatografía en capa fina: Está basada en la preparación de una capa,
uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro
soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio,
un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar
la capa de adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas
cubiertas. Es preciso también poder guardar con facilidad las placas
preparadas y una estufa para activarlas.
La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase
estacionaria será un componente polar y el fluyente será por lo general menos
polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se
desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
Cromatografía en columna: En esta cromatografía, las moléculas de una
mezcla son separadas con base a la afinidad de las moléculas por la fase
estacionaria o por la fase móvil. Si una molécula A tiene más afinidad por la
fase estacionaria que la B, B bajará más rápido que A.

7. TÉCNICAS GENERALES DE SEPARACIÓN
(CROMATOGRAFÍA CAPA FINA Y EN COLUMNA)
DESHIDRATACIÓN EXTRACCIÓN FRACCIONAMIENTO ANÁLISIS
CROMATOGRAFICO CROMATOGRAFICO EN
CAPA FINA
La muestra se coloca
Se coloca 30g de la en un sistema de Se escogen tres Se hace una
muestra en un reflujo solventes preparación de
erlermeyer (fresca y columna
triturada)
Luego
1. Diclorometano Teniendo esto
montado con la
Se coloca a baño maría Se le adiciona 2. Diclorometano 98:2 silica gel y la
por 5 minutos diclorometano
3. Diclorometano 9.1 muestra se observa
gran variación de
colores
Calentamiento y filtramos
Filtramos Este se extrae
varias veces para
Se guarda protegido En cada solvente se Una vez caiga la primera
un buen
de luz, humedad, y coloca una placa para gota se van cogiendo cada
mejoramiento
calor. saber cual es más una de las fases en frascos
eficiente pequeños estos van de
Este es colocado en colores diferentes
un rota evaporador Se escoge el
para recuperar la solvente con el
Este filtrado se
fase orgánica que se va a
guarda protegido de trabajar durante el
la luz, calor paspo sgte

8. Se guardan para después
seguir con las placas
MATERIALES Y REACTIVO
2 Baker de 400ml
2 erlermeyer
1 estufa
1 agitador
Muestra (zanahoria fresca y triturada)
Reactivos
Di cloro metano
Di cloro hexano1:1
Hexano octato 4:1
Etanol al 95%
Sulfato de sodio
Éter de petróleo

9. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS
DESHIDRATACIÓN:
En un erlermeyer colocamos unos 50g de la muestra (salsa de tomate) se le
adicionó un volumen suficiente de etanol al 95% hasta cubrir la muestra, luego se
puso a baño maría durante unos 5 minutos, lo filtramos en caliente con papel filtro;
procurando así que la muestra quede libre de solvente. Esta muestra se colocó en
un frasco con tapa y se cubrió bien con papel aluminio para así evitar que los
rayos de luz lleguen a ella.

11. EXTRACCIÓN
La muestra es colocada en una bolsa de papel filtro bien envuelta para que no se
Salga, para así ser colocada en un extractor o un sistema de reflujo; se le adiciona
un volumen determinado de diclorometano.”Se debe tener cuidado con estos
solventes puesto que pueden ser tóxicos”.
Después de un tiempo se filtra sola, el residuo se extrae varias veces con el fin de
obtener el mayor rendimiento posible. El extracto que queda es colocado en un
rota evaporador para recuperar la fase orgánica se seca con sulfato de sodio. Este
filtrado que queda de los carotinoides se guarda, se tapa bien para protegerlo de
la luz, humedad, color y aire.

12. FRACCIONAMIENTO CROMATOGRAFICO:
El filtrado que obtuvimos de la extracción lo utilizamos para realizar las placas.
Aquí tomamos tres placas para realizar cromatografía en capa fina se marca
respectivamente de 1 al 3 y se colocan en diferentes solventes.
1: CH2Cl (DCM).
2: DCM 98.2
3: DCM 9.1
Luego al ver el profesor las placas y detallar bien el movimiento que tuvo cada
solvente nos recomendó que el sistema más conveniente para seguir trabajando
era el solvente diclorometano (DCM)

13. ANÁLISIS POR ESPECTROSCOPIA VISIBLE:
Se prepara un proceso de columna en el cual se coloca la base de Silica gel en
éter de petróleo o n-hexano se le adiciona la muestra y se le coloca un pedacito de
algodón, ya teniendo todo esto montado se observan varios colores en diferente
lugar de la columna. Todo esto para así realizar las cromatografías necesarias
para encontrar l RF.

14. Una vez que salga la primera gota de la columna montada se coloca un frasco
pequeño y se van cogiendo las muestras con los colores respectivos, que se van
reuniendo para realizar la cromatografía. Ya teniendo la cantidad suficiente de
frascos con el liquido se van enumerando correctamente 1,2,3,4,5,……… teniendo
ya esto se colocan en una placa para cromatografía de menor a mayor. Ya hechas
las primeras placas se empiezan a unir las que más se parezca, para realizar
otras placas mas .esta última placa es donde se va a definir el RF.

16. ANÁLISIS DE RESULTADOS
El licopeno es el carotenoide más abundante en el tomate. Aunque el
contenido depende mucho del grado de maduración (aumenta con ella),
exposición a la luz (también aumenta), tipo de suelo, y de la variedad, puede
considerarse representativa la cifra de 40 mg de licopeno por cada 100
gramos.
Una diferencia fundamental entre la estructura del licopeno y la del b-caroteno
es que los anillos de los extremos se encuentran abiertos. De hecho, el
licopeno es el precursor biocinética del b-caroteno en el tomate. El licopeno no
tiene actividad como vitamina A, pero es un antioxidante muy eficiente frente al
oxigeno ringlete, el que más de todos los carotenoides comunes
A medida que se efectuó la extracción de los pigmentos carotenoides se
notaron los cambios en la coloración de la muestra; puesto que se partió de
una pasta color rojo intenso y después de mezclar el producto con el solvente
utilizado, se adquirieron soluciones con distintos matices al color de origen.

17. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Realizar una búsqueda bibliográfica de la especie trabajada en el
laboratorio
Clasificación taxonómica
Prescripción botánica
Componentes químicos
2. Tipos de pigmentos presentes en la especie
3. Que tipos de pigmentos de acuerdo a la coloración y su RF fueron aislados
de la especie analizada
SOLUCIÓN
TOMATE

18. REINO: Plantae
DIVISIÓN: Magnoliophyta
CLASE: Magnoliopsida
SUBCLASE: Asteridae
ORDEN: Solanales
FAMILIA: Solanaceae
GÉNERO: Solanum
ESPECIE: S. lycopersicumSolanum
SOLANUM LYCOPERSICUM
La tomatera, es una planta de la familia de las solanáceas (solanáceas) originaria
de America y cultivada en todo el mundo por su fruto comestible, llamado tomate
(o jitomate en el sur y centro de Mexico.
Dicho fruto es una baya muy coloreada, típicamente de tonos que van del
amarillento al rojo, debido a la presencia de los pigmentos (licopeno y caroteno).
Posee un sabor ligeramente ácido, mide de 1 a 2 cm de diámetro en las especies
silvestres, y es mucho más grande en las variedades cultivadas.
Se produce y consume en todo el mundo tanto fresco como procesado de
diferentes modos, ya sea como salsa, puré, jugo, deshidratado o enlatado.
HISTORIA
Los españoles distribuyeron el tomate a lo largo de sus colonias en el caribe
después de la conquista de Sudamérica. También lo llevaron a Filipinas y por allí
entró al continente asiatico.

19. Su llegada a Europa
Los tomates amarillos fueron los primeros en cultivarse en Europa; más tarde, los
de color rojo se hicieron más populares.
TOMATE ROJO, CRUDO
 Valor nutricional por cada 100 g
Energía 20 kcal 80 kJ
Carbohidratos 4g
Azucares 2.6g
Grasas 0.2g
Proteinas 1g
Agua 95g
Vitamina C 13 mg (22%)
El tomate es una fuente importante de ciertos minerales (como el potasio y el
magnesio). De su contenido en vitaminas destacan la B1, B2, B5 y la vitamina C.
Presenta también carotenoides como el licopeno (pigmento que da el color rojo
característico al tomate).
La vitamina C y el licopeno son antioxidantes con una función protectora de
nuestro organismo. Durante los meses de verano, el tomate es una de las fuentes
principales de vitamina C. En la tabla se provee información sobre los principales
constituyentes nutritivos del tomate.
En nuestra dieta obtenemos licopeno a partir de alimentos muy definidos,
fundamentalmente a través del consumo de tomate y derivados (salsas, tomate
frito, tomate triturado, kétchup, pizzas, zumos) y de sandía.
En el tomate maduro, el carotenoide mayoritario es el licopeno que lo contiene en
aproximadamente en un 83% y en porcentaje también importante, se encuentra el

20. β-caroteno, entre un 3-7%, y otros como son el γ-caroteno, que al igual que el β-
caroteno tienen actividad provitamínica A, fitoeno, fitoflueno, etc.
El contenido en licopeno aumenta con la maduración de los tomates y puede
presentar grandes variaciones según la variedad, condiciones del cultivo como el
tipo de suelo y clima, tipo de almacenamiento
Estructura del ß-caroteno
Estructura del licopeno
CÓMO ACTÚA EL LICOPENO
Estas sustancias se encuentran en el tomate fresco y en todos sus derivados:
jugos, salsas y conservas. Del grupo de los carotenoides es el más abundante en
la sangre, se almacena en hígado, pulmones, próstata, cuello uterino, colon y piel.
Su principal función es ser antioxidante, es decir, evita por ejemplo que el
colesterol “malo” o LDL se oxide y produzca daños (lo que se denomina “estrés
oxidativo”), el mecanismo de acción consiste en actuar sobre los radicales libres,
moléculas extremadamente inestables con gran poder reactivo que se producen
normalmente en el organismo por el contacto con el oxígeno, afectando las
membranas celulares y atacando el material genético de las células.

21. Se ha demostrado una reducción importante en el riesgo del cáncer de próstata al
consumir tomates, salsa de tomates, kétchup y extracto de tomate con una
frecuencia superior a 2 veces por semana.
PROPIEDADES MEDICINALES DE LAS HOJAS
Las hojas de la tomatera tienen sus aplicaciones en medicina popular, pues con
ellas se prepara un cataplasma emoliente, que da muy buenos resultados en las
inflamaciones, para ello simplemente se aplica a la parte afectada una vez que ha
sido triturada y literalmente asada.
CONCLUSION
Por medio de esta practica se logró extraer de la salsa de tomate los carotenos o
pigmentos pertenecientes a este producto, los cuales poseen gran cantidad de
licopeno y en este caso le proporcionan el color rojo que caracteriza al tomate,
siendo este su pigmento vegetal constituyente. Sin embargo, la finalidad de esta
practica era realizar dicha separación y esto no hubiera sido posible sin la
aplicación de las distintas técnicas cromatograficas, las cuales brindan un espectro
completo y detallado de las fracciones o manchas obtenidas.

22. Para cuantificar el licopeno del tomate, en el proceso de mezcla, hay que añadir
solvente tantas veces como sea necesario hasta la desaparición de la coloración,
y así poder calcular con la mayor exactitud la concentración de licopeno. Mientras
que si sólo se quiere identificar es necesario tan sólo un poco de color para leer su
espectro en el espectrofotómetro.
La importancia de esta práctica radica en que nos permite determinar y conocer
procesos como deshidratación, extracción y separación de los diferentes
pigmentos vegetales, mediante las técnicas anteriormente mencionadas
contribuyendo a la identificación de los metabolitos presentes en cada muestra.
Además ayuda a distinguir los distintos eluentes y eluyentes a utilizar en dicho
procedimiento, observando las fases que intervienen en cada prueba y los
solventes empleados en la separación de los pigmentos, para identificar la
proporción en que existen los distintos metabolitos constituyentes de la muestra de
tomate utilizada.
BIBLIOGRAFIA
David Abbot y R.S. Andrews “Introducción a la cromatografía”, 2ª ed. Madrid:
Alhambra, 1970.
Martínez Martínez, A. “Carotenoides”. [en línea]. Facultad de Química
Farmacéutica. Medellín: Universidad de
Antioquia, 2003.

23. INFOGRAFIA
http://www.alimentariaonline.com/
http://www.scielo.cl
http://upcommons.upc.edu