1. EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ERGOSTEROL EN EL HONGO Ganoderma lucidum. JOHN JAIRO GÓMEZ ECHAVARRÍA CARLOS ALBERTO RAMIREZ BEDOYA Introducción Los hongos pertenecientes al género Ganoderma han estado en la cumbre de la medicina oriental desde hace 2000 años. Recientemente, se ha encontrado que el cuepo fructífero y las esporas son una fuente promisoria de fármacos. Numerosos compuestos con actividad sobre el sistema cardiovascular, citotóxica, inmunomoduladora, analgésica, antidiabética, antioxidante, insecticidad y nematicida, se han aislado en las últimas décadas (4). De la especie Ganoderma lucidum se han obtenido una gran cantidad de metabolitos con núcleos tipo lanostano y ergostano (principalmente ergosterol y los ácidos lanostánicos; (figura 8 para el Ergosterol). Este tipo de metabolitos secundarios es debida a que los hongos son incapaces de sintetizar macromoléculas a partir del dióxido de carbono y la energía procedente de la luz por el hecho de no poseer clorofila, por tal razón, su biogénesis está condicionada por el tipo de nutrientes que estén en el substrato donde se desarrollen, condiciones climáticas, que hacen que se altere y cambie su metabolismo generando una amplia variedad de compuestos químicos con diversas estructuras que pueden llegar a ser novedosas (4). En el presente estudio se aisló el metabolito ergosterol ( provitamina D2), el cual contribuye al conocimiento químico de este hongo y las posibilidades de encontrar nuevos metabolitos para beneficio de la salud en las diferentes aplicaciones farmacológicas. (1) Carmen W. Huie, Xin Di. Chromatographic and electrophoretic methods for Lingzhi pharmacologically active components. Journal of Chromatography B, 812 (2004) 241-257. (2) Yi Chen, Yan Yan, Ming-Yong Xie Shao-Ping Nie, Wei Lui, Xiao- Fend Gong, Yuan- Xing Wang. Development of a chromatographic fingerprint for the chloroform extracts of Ganoderma lucidum by HPLC and LC-MS. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 47(2008) 469-477. (3) Leon Oyola, Juan Fernando. Química y síntesis de los principios activos aislados de hongos superiores. Sus posibles aplicaciones farmacológicas. Universidad la Laguna. 2004. (4) Santafé Patiño, Gilmar. Búsqueda de compuestos bioactivos en hongos de la familia ganodermatacea del departamento de Córdoba. Grupo de Investigación Química de Productos Naturales. Universidad de Córdoba. Oct-2007. (5) Martinez M. Alejandro. Documento de Esteroles. Universidad de Antioquia. 2002. Referencias Objetivos OBJETIVO GENERAL Realizar un estudio Fitoquímico a una muestra del hongo Ganoderma lucidum , además de evaluar sus actividades como aporte al conocimiento de los productos naturales. OBJETIVOS ESPECÍFICOS Obtener el subextracto de diclorometano mediante el fraccionamiento del extracto etanólico del hongo Ganoderma lucidum , con solventes de polaridad creciente (n-hexano y acetato de etilo) Aislar por medio de técnicas cromatográficas (CCF y CCD), el Ergosterol como metabolito secundario presente en el subextracto de diclorometano del hongo Ganoderma lucidum. Identificar los máximos de absorción del Ergosterol como metabolito secundario aislado, utilizando principalmente cromatografía UV Visible. Identificar las bandas de absorción del Ergosterol por métodos de espectroscopia infrarrojo. Métodos CROMATOGRAFIA EN CAFA FINA Y ESPECTROFOTOMETRIA Resultados ANÁLISIS DE RESULTADOS Partiendo de los resultados obtenidos de las pruebas de identificación para el Ergosterol, se evidencia la existencia de los grupos funcionales característicos de este, indicando que la molécula aislada corresponde al Ergosterol. El Rf del ergosterol es 0.40. Así como se observa en el espectro ultravioleta (figura 4), se obtienen 2 máximos de absorción, los cuales son: 271nm y 283nm, característicos respectivamente para el Ergosterol en relación a compuestos esteroles con núcleo ∆ 5,7-3-hidroxiandrostadieno. ( 5). Relacionando los datos obtenidos en el espectro infrarrojo con las bandas que generalmente se observan para los esteroles (una banda de tensión O-H alrededor de 3600 cm-1, bandas de tensión de enlaces C-H saturados alrededor de 2960-2780 cm-1, bandas de tensión de enlaces =C-H alrededor de 3125-3030 cm-1, bandas de flexión de enlaces saturados C-H alrededor de 1440 y 1380 cm-1 y bandas de tensión de enlaces C=C olefínicos alrededor de 1670 cm-1) se comprueba la existencia de compuestos esteroles.(Figura 8) Como puede observarse, el extracto etanólico del Ganoderma lucidum posee actividad antioxidante, evidenciado en la la prueba DPPH. FIGURA 5. Tabla de resultados de la marcha fitoquímica FIGURA 6. Cromatografia en capa fina. FIGURA 7 Estructura del Ergosterol FIGURA 8. Espectro IR del Ergosterol. Conclusiones ⇒ Se aisló y caracterizó el Ergosterol del extracto etanólico del hongo Ganoderma Lucidum , mediante métodos cromatograficos y corroborado con pruebas químicas, espectroscopia Ultravioleta e infrarrojo. ⇒ Se comprobó que el hongo Ganoderma Lucidum posee actividad captadora de radicales libres comprobada mediante la prueba DPPH. Agradecimientos ♦ Diego Fernando Rojas, Grupo Biotecnología, SIU, Universidad De Antioquia. ♦ Jhonny Colorado Ríos, Docente encargado laboratorio Farmacognosia y Fitoquímica, Universidad de Antioquia. ♦ Walter Murillo Arango , Docente encargado laboratorio Farmacognosia y Fitoquímica, Universidad de Antioquia ♦ Víctor Arango, Docente encargado laboratorio Farmacognosia y Fitoquímica, Universidad de Antioquia. ♦ Alejandro Martínez M. Docente curso Farmacognosia y Fitoquímica, Universidad de Antioquia. Esterol más abundante en el hongos es el Ergosta-5,7,22-trien-3-  -ol (ergosterol) “ ESTE TRABAJO NO ES RESULTADO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN, ES UN TRABAJO ESTRICTAMENTE DE FORMACIÓN ACADEMICA PARA ESTUDIANTES DE PREGRADO” 2009-1 25 g DE Ganoderma lucidum . EXTRACTO ETANOL/ DICLOROMETANO 1:1 IDENTIFICACIÓN DE TRITERPENOIDES LIEBERMAN BURCHARD DPPH CROMATOGRAFIA PREPARATIVA FE: SILICA GEL 60 F254 FM: HEXANO/ACETATO DE ETILI 4:1 REVELADOR: UV 365 nm LA FASE ORGANICA SE PASA POR SULFATO DE SODIO ANHIDRO ANHIDRO ROTAEVAPORAR ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJO ESPECTROFOTOMETRIA UV-VISIBLE 200-400 nm (metanol) FIGURA 1. Diagrama de flujo FIGURA 2 Espectro UV Ergosterol. FIGURA 3. Espectro UV. Ergosterol. FIGURA 4. Espectro UV. Ergosterol. FIGURA 10. Foto del Ganoderma lucidum FIGURA 9. Foto del Ganoderma lucidum FIGURA 11. Foto del Ganoderma lucidum RESULTADOS DE LA MARCHA FITOQUíMICA Prueba para aminoácidos Negativa Prueba para flavonoides Negatva Prueba para leucoantocianidinas Negativa Prueba para compuestos fenolicos Negativa Prueba para taninos Negativa Prueba para terpenoides Positiva Prueba para cardiotónicos Positiva Prueba para quinonas Negativa Prueba para alcaloides Negativa