El microtomo es un instrumento que se utiliza para realizar secciones delgadas de tejido para su observación microscópica. Existen varios tipos de microtomos como de oscilación, rotación, deslizamiento, congelación y ultramicrotomo. El proceso de preparación de muestras de tejido incluye obtención de la muestra, fijación, deshidratación, inclusión en parafina, corte con el microtomo y tinción para su posterior observación.

1. microtomo

2. Es un instrumento mecanico con el que se realizan secciones tisulares de espesor micrometrico y por lo tanto lo suficientemente delgado para su posterior observacion en el microscopio. Existen 6 tipos basicos de microtomos:

3. Microtomo de Oscilacion Posee un sistema de avance de tornillo y las secciones se obtienen por un sistema oscilatorio de planaza que un portabloques sobre la cuchilla al vascular sobre ella.

5. Microtomo de rotacion o de Minot El portabloques colocado en posicion vertical se mueve de arriba abajo. Delante del filo de la cuchilla el portabloques avanza de manera automatica y constante en cada vuelta del mango.

7. Microtomo de Deslizamiento Existen principalmente dos tipos según se movilize el portabloques, sobre la cuchilla permaneciendo esta fija, o vicerversa, en ambos casos. El movimiento que produce el corte es el avance y retroceso de la porcionmovil sobre una guiametalica.

9. Microtomo de congelacion Se utiliza para efectuar secciones de tejido congelado y por tanto no deshidratado, la congelación se consigue haciendo circular CO2 por el interior del porta bloques procedente de una bomba y de esta forma el gas cuando se expande provoca el enfriamiento. Una vez congelada las secciones se trabaja con una cuchilla que se encuentra sobre un eje fijo de manera que el avance lo realiza el porta bloques por un mecanismo directo del tornillo.

10. Criostato o criotomo Colocado en un mueble frigorifico con una tapadera en la parte superior y tiene una manivela que se mueve desde fuera y consta de un microtomo tipo minot. Semejante al convencional de parafina que esta incluido en una camara de congelacion, permite obtener cortes de material sin fijar a menos -20°C o incluso -60°C.

12. ultramicrotomo Es un derivado del tipo minot pero con mejoras tecnicas que permiten efectuar secciones de nanometros de espesor incluso en plasticos. Se obtiene en microscopia electronica. El sistema optico tiene un microscopio o una lupa binocular incorporado, tiene una unidad de control independiente con selectores para avance macro y micrométrico regulable en amplitud y velocidad.

14. Técnicas de la parafina

15. Se utiliza para preparar cortes de tejido y poderlos observar a microscopio, por lo tanto el procedimiento a seguir es: Obtención o muestra. Fijación. Deshidratación. Aclara miento. Inclusión. Corte Tinción y montaje.

16. Obtención de muestra Se obtiene por una biopsia. Se diseca con cuidado, el tejido por medio de un instrumento cortante (bisturí, tijeras, pinzas de sacabocado, cuchilla para legrar). El tamaño aproximado es de 1 cm en todas su dimensiones y toma una muestra de tejido de preferencia recién muerto para la en caso de cadáver, es evitar la degradación.

17. Fijación Evita la degradación post-mortem Endurece los tejido blandos. Se utilizan diferentes tipos de fijadores tales como: formaldehido, glutaraldehido, tetraoxido de osmio, dicromato de potasio, etc.) Evita la lisis. Sirve de antiséptico.

18. Deshidratación. Es una deshidratación gradual (se logra pasar el bloque de tejido por alcohol de diferentes potencias hasta llegar el absoluto) El alcohol no es un solvente de la parafina, así que hay que sustituirlo por xilol u otro solvente que se mezcle con el alcohol.

19. Aclaramiento. Se pasa el bloque deshidratado con alcohol a través del xilol en cambios sucesivos, hasta sustituir el alcohol por xilol en preparación para inclusión.

20. inclusión El bloque penetrado por el xilol, se pasa por parafina caliente varias veces. La parafina derretida llena los espacios antes ocupados por el agua y al endurecerse, cuando se enfría hace que el bloque este listo para el corte.

21. Un protocolo común de inclusión en parafina es el siguiente:

23. Corte Se elimina la parafina Se hace el corte con el microtomo El espesor del corte es de 3 a 6 um.

24. Tinción y montaje La tinción se hace con soluciones acuosas para que la parafina que ha penetrado en el corte sea sustituido por agua y pasarla a través del xilol, para eliminar el xilol y pasa por varios baños de alcohol de diversas potencias y al final con agua. Montaje: se pasa por una serie de recipientes con alcohol de diversas potencias hasta llegar al absoluto y después por el xilol se pone una gota de bálsamo de Cañada.