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Evaluation de la toxicité de 12 lots
     du produit Mexel® 432/0
       par le test Microtox®
  utilisant les bactéries marines
  Photobacterium phosphoreum




     Document réalisé par le Dr François GHILLEBAERT
ECOTOX, 41 rue du Fort Gassion, 62120 Aire sur la Lys, France
           Tel : 02 33 34 76 44; Fax: 02 33 24 73 82
                   e-mail: ecotox@pronet.fr



                                                       Le 5 Novembre 1998
Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox®

Table des matières
1.     INTRODUCTION......................................................................................................................................... 1

2.     PRINCIPE ..................................................................................................................................................... 1

3.     MATERIEL ET METHODES..................................................................................................................... 1

4.     RESULTATS ET DISCUSSION ................................................................................................................. 2

5.     CONCLUSION ............................................................................................................................................. 3

6.     REFERENCES : ........................................................................................................................................... 3



Table des tableaux
Tableau 1 : Numéros des lots de produit Mexel® 432 testés et pesées réalisées..................................................... 1
Tableau 2 : Toxicité du Mexel® 432 selon l’essai microtox utilisant la bactérie marine Photobacterium
    phosphoreum................................................................................................................................................... 3




                                                                                                                                                                   I/I
Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox®


1.       Introduction
   Le but de cette étude est de vérifier l’homogénéité de la réponse toxicologique du produit
Mexel® 432/0 en fonction des lots de fabrication. Le test toxicologique retenu est le test
bactérien Microtox® utilisant les bactéries marines Photobacterium phosphoreum. Les 12 lots
de produit testés sont les lots livrés à la centrale thermique EDF du Havre, du mois de janvier
au mois de juillet 1998.
   Les essais ont été réalisés au sein du groupe de gestion de l’eau et environnement du
Département Environnement à la Direction des Etudes et Recherches (DER) d’Electricité de
France (EDF-DER, 6 quai Watier, 78401 Chatou Cedex).


2.       Principe
   Le test Microtox® utilise des bactéries marines bioluminescentes (Photobacterium
phosphoreum). La quantité de lumière émise par ces bactéries est proportionnelle à leur
activité métabolique. La mesure de l’inhibition de l’activité métabolique de ces bactéries,
reflétée par la diminution de la bioluminescence de ces dernières, indique la présence de
produits à des concentrations toxiques.


3.        Matériel et méthodes
   Pour chaque lot de produit Mexel® 432/0 étudié une pesée d’environ 50 mg (Tableau 1) est
réalisée sur un morceau de papier d’aluminium. Cette pesée est diluée à 500 ml par de l’eau
MilliQ® dans une fiole jaugée de 500 ml. Cinquante millilitres de cette solution sont prélevés
et dilués à 100 ml par de l’eau milliQ®.

Tableau 1 : Numéros des lots de produit Mexel® 432 testés et pesées réalisées.

                         Numéro de lot                               Pesée
                              971232/3                                49,6
                              980219/2                                49,7
                             9802245*                                 49,8
                              980320/7                                49,7
                              980320/8                                49,8
                              980421/2                                50,0
                            980224/5**
                              980511/2                                49,6
                             9806105*                                 50,2
                              980623/2                                49,4
                            980623/2**
                              980701/4                                50,7
                              980720/2                                50,6
                              980722/2                                49,4
     * échantillon fourni mais non signalé par Mexel S.A. (Cf. annexe 1)
     ** échantillon signalé par Mexel S.A. mais non fourni (Cf. annexe 1)

                                                                                                          1/3
Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox®

   Puis, selon la technique Microtox® les dilutions 0 – 3,51 – 5,27 – 7,90 – 11,85 – 17,78 –
26,67 – 40,00 – 60,00 et 90,00 % sont testées.
   La bioluminescence est mesurée pour chaque échantillon après 5, 10 et 15 minutes
d’exposition.

   Les concentrations inhibant 50 % de la bioluminescence (CE50) 5, 10 et 15 minutes sont
calculées après :
   - transformation de la concentration par la fonction Log,
   - un changement d’origine (G) de la valeur de la bioluminescence des échantillons traités
       (Bm) par rapport à la valeur obtenue pour le témoin (Bt), suivi d’une transformation de
       cette valeur par la fonction Log (Log G).

                                                    Bt − Bm
                                              G=
                                                      Bm
     où :
     G = valeur de luminescence transformée

     Bt = bioluminescence du témoin
     Bm = bioluminescence des échantillons traités au Mexel® 432/0

   Après transformations, le Log de la concentration est reporté sur l’axe des Y et le Log de G
sur l’axe des X. Dans ce cas, lorsque Bm = 0,5 Bt, G = 1 et donc log de G = 0. C’est
pourquoi, la CE50 correspond au point où la droite coupe l’axe des Y.

   Chaque concentration ayant été testée sans réplique, les CE50 sont calculée sans intervalle
de confiance.


4.       Résultats et discussion

   Pour l’ensemble des lots testés, une augmentation de la bioluminescence a été observée
pour les plus fortes dilutions (Cf. annexe 2). Du fait de cette augmentation, il a été impossible
de calculer les CE50 de quelques points (Tableau 2).

   Vis-à-vis du test Microto®, une grande homogénéité de réponse est obtenue sur l’ensemble
des lots (Tableau 2).
   Ainsi, en tenant compte des 12 lots étudiés, les CE50 5, 10 et 15 minutes sont
respectivement comprises entre 4,8 et 6,9 mg/L, 3,4 et 6,2 mg/L et 3,1 et 6,0 mg/L.

   Ces résultats sont conformes à ceux obtenus précédemment (Khalanski, 1997). En effet,
cet auteur rapporte des valeurs comprises entre 3,0 et 6,9 pour la CI50 5 minutes et entre 4,8 et
6,0 pour la CI50 15 minutes.




                                                                                                        2/3
Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox®


                                  ®
Tableau 2 : Toxicité du Mexel 432 selon l’essai microtox utilisant la bactérie marine
Photobacterium phosphoreum

                                         Concentration inhibant 50 % de
                    Numéro de               la bioluminescence (mg/L)
                       lot                5 min.     10 min.     15 min.
                       971232/3               6,8              6,2               6,0
                       980219/2               6,4              6,0              n.c.
                      9802245*                5,5              n.c.              5,2
                       980320/7               5,6              3,4               3,1
                       980320/8               5,0              4,6               4,4
                       980421/2               5,7              5,8               5,2
                       980511/2               5,9              5,4               4,8
                      9806105*                6,9              6,1               5,7
                       980623/2               5,3              5,0               4,8
                       980701/4               5,4              n.c.              5,1
                       980720/2               4,8              4,7               4,4
                       980722/2               5,7              n.c.             n.c.
     n.c. : valeur non calculable.


5.       Conclusion
   Les 12 lots testés du produit Mexel® 432/0 ont selon la procédure Microtox® une toxicité
analogue et similaire à celle déterminée précédemment (Khalanski, 1997).


6.       Références :
KHALANSKI, M., 1997. Données sur la toxicité du produit anti-corrosion Mexel 432 pour
  les organismes d’eau douce. EDF, Direction des Etudes et Recherches, HE-31/7/016,
  43 pp.




                                                                                                          3/3
Annexe 1
Annexe 2

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  • 2. Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox® Table des matières 1. INTRODUCTION......................................................................................................................................... 1 2. PRINCIPE ..................................................................................................................................................... 1 3. MATERIEL ET METHODES..................................................................................................................... 1 4. RESULTATS ET DISCUSSION ................................................................................................................. 2 5. CONCLUSION ............................................................................................................................................. 3 6. REFERENCES : ........................................................................................................................................... 3 Table des tableaux Tableau 1 : Numéros des lots de produit Mexel® 432 testés et pesées réalisées..................................................... 1 Tableau 2 : Toxicité du Mexel® 432 selon l’essai microtox utilisant la bactérie marine Photobacterium phosphoreum................................................................................................................................................... 3 I/I
  • 3. Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox® 1. Introduction Le but de cette étude est de vérifier l’homogénéité de la réponse toxicologique du produit Mexel® 432/0 en fonction des lots de fabrication. Le test toxicologique retenu est le test bactérien Microtox® utilisant les bactéries marines Photobacterium phosphoreum. Les 12 lots de produit testés sont les lots livrés à la centrale thermique EDF du Havre, du mois de janvier au mois de juillet 1998. Les essais ont été réalisés au sein du groupe de gestion de l’eau et environnement du Département Environnement à la Direction des Etudes et Recherches (DER) d’Electricité de France (EDF-DER, 6 quai Watier, 78401 Chatou Cedex). 2. Principe Le test Microtox® utilise des bactéries marines bioluminescentes (Photobacterium phosphoreum). La quantité de lumière émise par ces bactéries est proportionnelle à leur activité métabolique. La mesure de l’inhibition de l’activité métabolique de ces bactéries, reflétée par la diminution de la bioluminescence de ces dernières, indique la présence de produits à des concentrations toxiques. 3. Matériel et méthodes Pour chaque lot de produit Mexel® 432/0 étudié une pesée d’environ 50 mg (Tableau 1) est réalisée sur un morceau de papier d’aluminium. Cette pesée est diluée à 500 ml par de l’eau MilliQ® dans une fiole jaugée de 500 ml. Cinquante millilitres de cette solution sont prélevés et dilués à 100 ml par de l’eau milliQ®. Tableau 1 : Numéros des lots de produit Mexel® 432 testés et pesées réalisées. Numéro de lot Pesée 971232/3 49,6 980219/2 49,7 9802245* 49,8 980320/7 49,7 980320/8 49,8 980421/2 50,0 980224/5** 980511/2 49,6 9806105* 50,2 980623/2 49,4 980623/2** 980701/4 50,7 980720/2 50,6 980722/2 49,4 * échantillon fourni mais non signalé par Mexel S.A. (Cf. annexe 1) ** échantillon signalé par Mexel S.A. mais non fourni (Cf. annexe 1) 1/3
  • 4. Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox® Puis, selon la technique Microtox® les dilutions 0 – 3,51 – 5,27 – 7,90 – 11,85 – 17,78 – 26,67 – 40,00 – 60,00 et 90,00 % sont testées. La bioluminescence est mesurée pour chaque échantillon après 5, 10 et 15 minutes d’exposition. Les concentrations inhibant 50 % de la bioluminescence (CE50) 5, 10 et 15 minutes sont calculées après : - transformation de la concentration par la fonction Log, - un changement d’origine (G) de la valeur de la bioluminescence des échantillons traités (Bm) par rapport à la valeur obtenue pour le témoin (Bt), suivi d’une transformation de cette valeur par la fonction Log (Log G). Bt − Bm G= Bm où : G = valeur de luminescence transformée Bt = bioluminescence du témoin Bm = bioluminescence des échantillons traités au Mexel® 432/0 Après transformations, le Log de la concentration est reporté sur l’axe des Y et le Log de G sur l’axe des X. Dans ce cas, lorsque Bm = 0,5 Bt, G = 1 et donc log de G = 0. C’est pourquoi, la CE50 correspond au point où la droite coupe l’axe des Y. Chaque concentration ayant été testée sans réplique, les CE50 sont calculée sans intervalle de confiance. 4. Résultats et discussion Pour l’ensemble des lots testés, une augmentation de la bioluminescence a été observée pour les plus fortes dilutions (Cf. annexe 2). Du fait de cette augmentation, il a été impossible de calculer les CE50 de quelques points (Tableau 2). Vis-à-vis du test Microto®, une grande homogénéité de réponse est obtenue sur l’ensemble des lots (Tableau 2). Ainsi, en tenant compte des 12 lots étudiés, les CE50 5, 10 et 15 minutes sont respectivement comprises entre 4,8 et 6,9 mg/L, 3,4 et 6,2 mg/L et 3,1 et 6,0 mg/L. Ces résultats sont conformes à ceux obtenus précédemment (Khalanski, 1997). En effet, cet auteur rapporte des valeurs comprises entre 3,0 et 6,9 pour la CI50 5 minutes et entre 4,8 et 6,0 pour la CI50 15 minutes. 2/3
  • 5. Evaluation de la toxicité de 12 lots du produit Mexel® 432/0 par le test Microtox® ® Tableau 2 : Toxicité du Mexel 432 selon l’essai microtox utilisant la bactérie marine Photobacterium phosphoreum Concentration inhibant 50 % de Numéro de la bioluminescence (mg/L) lot 5 min. 10 min. 15 min. 971232/3 6,8 6,2 6,0 980219/2 6,4 6,0 n.c. 9802245* 5,5 n.c. 5,2 980320/7 5,6 3,4 3,1 980320/8 5,0 4,6 4,4 980421/2 5,7 5,8 5,2 980511/2 5,9 5,4 4,8 9806105* 6,9 6,1 5,7 980623/2 5,3 5,0 4,8 980701/4 5,4 n.c. 5,1 980720/2 4,8 4,7 4,4 980722/2 5,7 n.c. n.c. n.c. : valeur non calculable. 5. Conclusion Les 12 lots testés du produit Mexel® 432/0 ont selon la procédure Microtox® une toxicité analogue et similaire à celle déterminée précédemment (Khalanski, 1997). 6. Références : KHALANSKI, M., 1997. Données sur la toxicité du produit anti-corrosion Mexel 432 pour les organismes d’eau douce. EDF, Direction des Etudes et Recherches, HE-31/7/016, 43 pp. 3/3