1. Manual de Bacteriología
Flora Corporal y del Aire
Stella Restrepo G. 1
FLORA CORPORAL Y DEL AIRE
Stella Restrepo G.
Los Prokaryotes son miembros esenciales de la biosfera y habitan todos los sitios
posibles donde está la vida y desde los que ofrecen las condiciones ideales para
el crecimiento y la reproducción, hasta aquellos ambientes extremos donde las
condiciones son limitantes para otros seres. La ubicuidad de los microorganismos
está basada en sus características de tamaño muy pequeño, fácilmente
dispersables por aire y agua, de su versatilidad metabólica y de su capacidad para
tolerar ambientes desfavorables.
Los microorganismos autóctonos son los que están siempre presentes en un
microambiente y tienen un flujo de nutrientes más o menos constante, mientras
que los transeúntes son aquellos que se localizan por períodos de tiempo; es
necesario tener en cuenta que las condiciones físico-químicas (temperatura,
humedad, pH, oxígeno, concentración de sal), las floras de los otros seres, la
disponibilidad de nutrientes y el contacto son las variables que determinan su
ubicación y cantidad.
Para un microbiólogo es necesario el conocimiento de la flora humana y del aire,
ya que le permite, en términos prácticos, entender la infección y/ó la enfermedad
como también la contaminación, la toma y el procesamiento de las muestras,
como también la decisión en la identificación, aspectos fundamentales en su
trabajo: por lo tanto, a continuación se revisan los conceptos de flora de aire y
humana.
FLORA DEL AIRE
El aire no es un medio apto para la multiplicación bacteriana ya que carece de los
nutrientes necesarios para ella, pero si puede albergar, como flora transeúnte,
microbios que están asociados a gotas de agua, polvo u otra materia particulada.
Dichos microorganismos son en general bacterias de bajo poder patógeno y
generalmente pigmentados (con carotenoides que presentan más de siete enlaces
dobles), ya que estos metabolitos secundarios los protegen de las radiaciones de
luz ultravioleta y del ozono presentes en nuestra atmósfera. (Ver capítulo anterior)
El aire puede considerarse como un vector de microorganismos ya que su
movimiento puede arrastrar gérmenes de un lugar a otro, los vientos pueden
levantar flora de tierras y desiertos y en los fenómenos de evaporación transportar
gotitas de agua con microorganismos. Por lo tanto, como ya se dijo, si bien
alberga bacterias de poca patogenicidad, en algunos momentos puede transportar
patógenos con el consecuente peligro para los humanos.
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El aire en ambientes cerrados sí puede contener un gran número de
microorganismos procedentes de los otros seres que allí se encuentran y, por lo
tanto, albergaría bacterias de baja, media y alta virulencia; tal es el caso del aire
de un galpón, de una sala de cirugía, de un teatro o de un laboratorio de
microbiología.
Tabla 1
MICROORGANISMOS GENERALMENTE ASOCIADOS AL AIRE
Micrococcus
Bacillus spp
Bacilos gram negativos ambientales
Corynebacterium
Como se leerá más adelante, la flora humana de piel, cuero cabelludo y vías
respiratorias, así como la flora que aparece en la tabla, puede ser contaminante de
cultivos en un laboratorio como también llevarnos al error de pasarla
desapercibida, cuando se trate de una infección oportunista en un paciente con
algún tipo de compromiso y, por ello, es imprescindible trabajar con un mechero
encendido y, cuando las condiciones lo permiten, en una cámara de bioseguridad.
En el primer caso, debido a la termodinámica la cual precisa que el calor se
difunde y, por lo tanto, crea un ambiente de cierta esterilidad al trabajar cerca al
mechero, o a la esterilidad que tienen las cámaras de flujo laminar, necesarias en
la bioseguridad y el autocuidado.
Cuando se presentan contaminaciones masivas en los laboratorios de
microbiología, se puede emplear la vaporización de compuestos fenólicos o
glutaraldehìdo durante 24 horas o, si se cuenta con ellas, el encendido de
lámparas de luz ultravioleta por 6 - 8 horas, las cuales logran una reducción muy
efectiva de todo tipo de flora ambiental.
FLORA CORPORAL
La flora normal se refiere a microorganismos de baja virulencia que siempre están
presentes en un hospedero adulto, cuya colonización se hizo en la infancia, y se
localizan en un microambiente específico, mantienen una población estable y se
asocian íntimamente con un epitelio. En los humanos, esta flora se encuentra en
sus superficies externas y algunas de las internas y no presenta un peligro para la
salud siempre que se conserven intactas las defensas naturales. No obstante, esta
flora puede causar infecciones graves cuando ella “cambia de ubicación en un
momento equivocado “ debido a algún trastorno en el hospedero y a esto se llama
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infección oportunista. Los microorganismos de la flora normal pueden ser
clasificados como parásitos (viven a expensas del hospedero), simbiontes (se
beneficia el hospedero) o comensales (un efecto neutro).
En condiciones normales, durante el período de gestación el feto es estéril y al
momento del nacimiento por vía vaginal o cuando se practica una cesárea, el bebé
empieza a colonizarse, primero la piel, luego la orofaringe, tracto gastrointestinal y
por último otras zonas mucosas, con la flora normal transmitida por la madre, el
obstetra, las enfermeras, las familias y hasta las mascotas y en cuestión de 24
horas ya tiene una buena cantidad en su piel, boca y tracto intestinal, ya que las
bacterias encuentran sus nichos en los diferentes sitios anatómicos llegando a ser
predominantes, otras serán transeúntes y otras no lograrán establecerse. En
poco tiempo la flora del bebé será igual a la de los otros individuos.
La presencia de la flora normal no es esencial para la vida. Pacientes con
enfermedad granulomatosa u otro tipo de desorden de este tipo son criados en
cápsulas que impiden su contacto con microorganismos, (como también
animales) y son llamados individuos gnotobióticos y presentan un desarrollo
normal; sin embargo esta flora presenta acciones benéficas al organismo como
proteger contra flora especialmente dañina, bien sea porque ocupa los receptores
de adherencia presentes en las células o porque segrega bacteriocinas como
sustancias letales para otras poblaciones microbianas, inducen producción de
anticuerpos contra flora no residente, ya que el sistema inmune es retado por el
contacto con estos microorganismos, porque están en lugares cercanos a ganglios
linfáticos, y porque ayudan a la absorción de nutrientes como la vitamina K,
producida en la membrana por un amplia gama de bacterias, (menaquinonas)
como metabolitos encargados del paso de electrones en la cadena respiratoria.
En el humano la flora normal está ubicada en la superficie interna y externa de la
piel, en el tracto intestinal y en algunos sitios del tracto genitourinario, siendo estos
órganos ecosistemas microbianos con poblaciones específicas de flora autóctona
o no y un gran número de factores determinan cuales microorganismos pueden
colonizar (condiciones nutricionales, potenciales de oxido-reducción, anticuerpos o
sustancias antibacterianas, pH, otra flora, etc.) y todas estas condiciones están
permanentemente variando con la edad, la nutrición, la limpieza, las
enfermedades, los hábitos y los efectos de antibióticos o medicamentos
Piel
Es un hábitat homogéneo respecto a la temperatura, sin embargo la humedad
varía y crea diferentes microambientes y es precisamente la humedad el factor
ambiental que influye el tamaño de la población.
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Tabla 2
MICROBIOS MÁS COMUNES QUE COLONIZAN LA PIEL
Acinetobacter spp Propionibacterium spp
Aerococcus spp Staphylococcus spp.
Bacillus spp Streptococcus spp
Clostridium spp Bacteroides spp
Corynebacterium spp Moraxella spp
Micrococcus spp Bacilos Gram negativos
Peptotococcus spp
Peptostreptococcus spp
Fuente: Murray, P. Med. Microb. 2002
Debido a su constante exposición y contacto con el ambiente, la piel alberga una
buena cantidad de microorganismos y esta flora puede modificarse por el hábito
de llevar determinado tipo de ropas, los ambientes en los que vive el individuo, la
cercanía a mucosas (áreas perineales y genitales, boca, etc.), pero en términos
generales las bacterias más comúnmente encontradas son Staphylococcus
coagulasa negativa, Corynebacterium spp y Propionibacterium spp.
En este tegumento, los nutrientes los da el sudor y los ácidos grasos volátiles
producidos por los Propionibacterium spp actúan como agentes antibacterianos
como también la lisosima secretada por las glándulas sudoríparas; las bacterias
pueden alojarse también en éstas últimas y en los folículos pilosos; por lo tanto,
no son barridas ni modificadas significativamente por la sudoración y el lavado
normal y esto garantiza la repoblación permanente a pesar de la exfoliación
constante. Por lo tanto, la flora normal de piel contribuye a mantener un pH bajo,
compite por los nutrientes o con otros microorganismos extraños, produce
sustancias bactericidas, todos ellos efectos favorecedores de la salud.
Pabellón auricular
Los organismo colonizantes más comunes en pabellón auricular son los
Staphylococcus coagulasa negativa, pero otros microorganismos como S.
pneumoniae y Pseudomonas spp pueden aislarse de allí y comportarse como
productores de otitis en personas inmunosuprimidas y en nadadores. Las
enterobacterias y otros microorganismos patógenos primarios también se aíslan.
El oído medio y el interno son lugares estériles en condiciones normales.
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Ojo
La superficie del ojo está colonizada por Staphylococcus coagulasa negativa,
Streptococcus viridans y Corynebacterium spp y la cantidad de lisosima que se
secreta junto con la Ig A de las lágrimas ayudan a controlar la población
microbiana.
Fosas nasales
La flora predominante de la nariz son los Staphylococcus coagulasa negativa y las
Corynebacterium spp
Tracto respiratorio (boca, orofaringe)
El tracto respiratorio superior esta colonizado con numerosos microorganismos,
con 10 -100 anaerobios por cada aerobio, y es importante anotar que la boca es
un ecosistema con sus propias características por su desarrollo anatómico y
fisiológico, como también por la composición de la saliva.
Tabla 3
MICROORGANISMOS COLONIZANTES DEL TRACTO RESPIRATORIO
Acinetobacter Moraxella
Actinobacillus Mycoplasma
Actinomyces Neisseria
Cardiobacterium Peptostreptococcus
Corynebacterium Porphyromonas
Eikenella Prevotella
Enterobcteriaceae Propionibacterium
Eubacterium Staphylococcus
Fusobacterium Streptococcus
Haemophilus Stomatococcus
Kingella Treponema
Lactobacillus Veillonella
Fuente: Murray, P. Med. Microb. 2002
Los anaerobios más comunes son Peptostreptococcus, Veillonella, Actinomyces y
Fusobacterium y entre los aerobios Streptococcus, Haemophilus y Neisseria spp.
La proporción relativa de estos microorganismos varía según el sitio anatómico.
Es diferente la flora en la superficie de un diente, que la de la saliva o de una
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cripta gingival. La mayoría de la flora es relativamente avirulenta y se asocia
raramente con enfermedad, a menos que pase a sitios “estériles “.
En la cavidad oral muchos microorganismos se unen a la mucosa y a las piezas
dentales formando placas o biopelículas, estas estructuras permiten potenciales
de óxido-reducción bajos en su superficie permitiendo el crecimiento de
anaerobios estrictos particularmente en las encías y entre las piezas dentales.
Naríz y nasofaringe
Las poblaciones de la nasofaringe son un espejo de la flora nasal, aunque la
humedad del ambiente puede ser tan diferente que seleccione organismos
adicionales
Tabla 4
FLORA DE NARÍZ Y NASOFARINGE
Staphylococcus coagulasa negativa
Difteroides
Streptococcus spp
Moraxella spp
Tracto respiratorio inferior
La laringe, tráquea, bronquios y vías inferiores son generalmente estériles aunque
puede ocurrir colonización transitoria con secreciones del respiratorio alto, cuando
se aspira. (Paso de garganta a pulmón). Estos sitios están protegidos por la acción
de las células epiteliales ciliares y por el movimiento del moco producido por las
células de Clara
Tracto gastrointestinal
Este tracto es el ecosistema con mayor densidad de población, ya que el número
de bacterias puede exceder el número de células del hospedero. Es un sistema
“abierto“ que semeja un tubo, que recibe alimentación por un extremo y, por el
otro, libera los deshechos y el proceso está acompañado por enzimas digestivas
del hospedero; aparte de su flora normal pueden encontrarse colonizaciones con
otros microorganismos que ingresan permanentemente con la ingestión de comida
y agua. Este tracto comprende seis áreas mayores: boca, esófago, estómago,
intestino delgado, ciego e intestino grueso.
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Tabla 5
MICROBIOS QUE COLONIZAN EL TRACTO GASTROINTESTINAL
Acinetobacter Lactobacillus
Actinomyces Mobiluncus
Bacteroides Peptostreptococcus
Bifidobacterium Porphyromonas
Campylobacter Prevotella
Clostridium Propionibacterium
Corynebacterium Pseudomonas
Eubacterium Staphylococcus
Enterobacteriaceae Streptococcus
Enterococcus Veillonella
Fusobacterium
Haemophilus
Fuente: Murray, P. Med. Microb. 2002
Esófago
Las bacterias orofaríngeas y las que colonizan estómago pueden aislarse del
esófago; sin embargo se cree que son colonizadores transitorios, ya que la saliva
y el bolo alimentario, remueven estas poblaciones, por lo que no se multiplican
acá.
Estómago
Debido a que el estómago produce ácido clorhídrico y pepsinógeno su pH es
sumamente ácido y por lo tanto, alberga solamente y en poco número
microorganismos tolerantes al ácido, tales como bacterias que producen ácido
láctico (Lactobacillus y Streptococcus) y Helicobacter pilori. Esta población
puede cambiar dramáticamente en número y diversidad en personas que toman
medicamentos para neutralizar o reducir la producción de ácido clorhídrico, o en
personas gastrectomizadas o vaguectomizadas.
Intestino delgado
En duodeno, yeyuno e íleon se aumenta el número de microorganismos que
dependen del pH, enzimas peptolíticas y lipolíticas, ácidos biliares y productos de
degradación, siendo la mayoría anaerobios y se encuentran Peptostreptococcus,
Porphyromonas y Prevotella. Cuando se presenta una obstrucción, el éstasis lleva
a la colonización y proliferación de organismos presentes en el intestino grueso.
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También en este ecosistema se encuentran E. coli, Bacteroides, Fusobacterium y
Eubacterium.
Intestino grueso
Se encuentran más bacterias en el intestino grueso que en cualquier otra parte del
cuerpo siendo las más comunes Bifidobacterium, Eubacterium, Bacteroides,
Enterococcus y Enterobacteriaceae. Y aunque este último representa menos del
1% de la población intestinal es el aerobio más responsable de infecciones
intraabdominales y marcador de potabilidad de aguas.
Sistema genitourinario
En general la uretra anterior y la vagina son las únicas áreas de este sistema
permanentemente colonizadas. Aunque la vejiga puede colonizarse
transitoriamente, el flujo urinario y las secreciones bactericidas de las células
uroepiteliales rápidamente las barren.
Tabla 6
MICROORGANISMOS COLONIZANTES DEL TRACTO GENITOURINARIO
Actinomyces Lactobacillus
Bacteroides Mobiluncus
Bifidobacterium Mycoplasma
Clostridium Peptostreptococcus
Corynebacterium Porphyromonas
Enterococcus Prevotella
Enterobacteriaceae Propionibacterium
Eubacterium Staphylococcus
Fusobacterium Streptococcus
Gardnerella Treponema
Haemophilus Ureaplasma
Uretra anterior
La población más numerosa de la uretra anterior esta conformada por
Lactobacillus, Streptococcus y Staphylococcus coagulasa negativa que son de
baja virulencia y escasamente asociados a enfermedad humana. Algunas veces
se presenta colonización transitoria con organismos fecales.
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Vagina
Su flora normal es muy diversa y esta bastante influida por los factores
hormonales. En el momento del nacimiento se coloniza con Lactobacillus, hasta
las 6 semanas aproximadamente, y luego, cuando se deprimen los estrógenos
maternos se coloniza con enterobacterias, Staphylococcus y Streptococcus.
Cuando en la pubertad se producen los estrógenos, reemergen los Lactobacillus
como organismos predominantes acompañados de Enterococcus, Gardnerella,
Micoplasma, Ureaplasma, Corynebacterium, Staphylococcus y bacterias
anaerobias. Esta flora residente al acidificar la vagina, como resultado del
desdoblamiento del glucógeno en ácido láctico tiende a inhibir la colonización y
por lo tanto la multiplicación de organismos patógenos.
BIBLIOGRAFÍA
MURRAY, P. 2002. ” Comensal and pathogenic microbial flora in humans.” En
Medical Microbiology. San Louis. 4 ed. Mosby
SHARP, S.E. 1999. “ Comensal and pathogenic M.O. of humans.” En: MURRAY,
P. Manual of Clinical Microbiology Washington. 7 ed. A.S.M.
BERCHE, P. 1989. “Flores commensales de l’homme.” En: BERCHE, P. et al.
Bactériologie. Les bactéries et des infections humaines. Paris, 2 ed. Flammarion
LARSEN, H. 1995. ” Normal microbial flora. ” En: MAHON, C.R. and
MANUSELIS, George. Textbook of diagnostic microbiology. Philadelphia. W.B.
Saunders Co.
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PRÁCTICA DE LABORATORIO
BACTERIAS DEL AIRE
I. OBJETIVOS
1. Conocer las bacterias que se encuentran en el aire.
2. Describir la morfología macro y microscópica, así como las características
tintoriales de algunas bacterias del ambiente.
II. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Colocar una caja de Petri con agar nutritivo durante 60 minutos en un sitio
expuesto al medio ambiente (cocina, baño, habitación, cafetería, jardín, etc.);
destapándola para permitir el contacto de las bacterias con el agar. Marcar la
caja y dejarla a temperatura ambiente durante 24 horas – 48 horas.
Lectura: Terminada la incubación, describir como mínimo 4 de las colonias
encontradas en ella y realizar los Gram respectivos.
NOTA: Si usted quiere tomar la muestra de la superficie de un objeto (teléfono,
llave de agua, pomo de una puerta, etc.), tome un escobillón estéril
humedecido con solución salina, frote fuertemente el área y luego siembra por
trapeado.
BACTERIAS DEL CUERPO
I. OBJETIVOS
1. Conocer las principales bacterias que hacen parte de la flora normal de
diferentes sitios del cuerpo.
2. Describir morfológica y microscópicamente, las características tintoriales
de algunas bacterias del cuerpo.
II. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Gram y cultivo de garganta:
Con un escobillón estéril frotar amígdalas y orofaringe. (Leer capítulo sobre
toma de muestras). Sembrar en una caja de agar sangre, incubar 24 horas
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a 37ºC. Con el mismo escobillón hacer un extendido en un portaobjetos y
colorearlo con Gram.
Lectura: A las 24 horas de incubación, leer el cultivo. Observe si hay
predominio de alguna bacteria y realizar como mínimo Gram a 4 colonias
diferentes.
NOTA: Si usted desea, puede tomar la muestra de pabellón auricular, fosas
nasales, cuero cabelludo, vagina, etc. Y para ello debe revisar el capítulo de
toma de muestras. Aca se recomienda la toma de cavidad oral por la gran
cantidad de M.O. que usted puede obtener.