1. INMUNOTERAPIA : VACUNAS ANTITUMORALES BASADAS EN CÉLULAS DENDRÍTICAS (DCs)

11. BIOLOGIA DE LAS DCs 1. Céls progenitoras 2.Precursores de sangre 3. DCs inmaduras 4. DCs maduras Estados Maduración

14. DCs Linfocitos Células con igual antígeno Presentación del antígeno Proliferación de linfocitos Transducción

15. ” buffy-coat ” CA (monocitos) CnA (linfocitos) DCimmaduras DCmaduras Linfocitos CMNs Purificación con gradiente de densidad Purificación por el método de adhesión al plástico Congelación Descongelac + IL-2 IL-4 + GM-CSF Transducción Ad- GFP/  GAL TNF-  + GM-CSF

16. Linfocitos sin pre-est.(0) Linfocitos pre-est. GFP linfocitos pre-est.  GAL Linfocitos DCs transducidas HeLas - HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con  GAL   Ensayo de proliferación con timidina tritiada Los linfocitos pre-estimulados con un antígeno (GFP o  GAL) se activan y PROLIFERAN al reconocer a este antígeno al cual esta pre-estimulado Transducción Ad-GFP/  GAL

17. “ Buffy-coat” CMNs CnA(linfocitos) CA (monocitos) Purificación por método de gradiente de densidad Purificación por método de adhesión al plástico

18. Proporción de CD14 positivo

19. Porcentaje de células positivas para marcadores celulares

20. CA (Monocitos) DCs inmaduras DCs maduras IL-4 + GM-CSF Transducción TNF-  + GM-CSF

21. Porcentaje de células positivas para marcadores celulares

22. Transducción con Ad-  , Ad-GFP y Ad-  GAL DCs HeLas 2.91% 17.34% 3.16% 2.96% 79.99% 88.17%

23. Linfocitos sin pre-est.(0) Linfocitos pre-est. GFP linfocitos pre-est.  GAL Linfocitos DCs transducidas HeLas - HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con  GAL   Ensayo de proliferación Transducción Ad-GFP/  GAL

24. Objectivos de la proliferación 1. Observar que a mayor nº estimuladoras mayor proliferación. Ratios (proporción de respondedoras:estimuladoras) cuando aumenta la ratio disminuye el nº de HeLas, el nº de linfocitoses siempre constante 2. Observar que cuando enfrentamos respondedoras (linfocitos) con estimuladoras (HeLas) de la misma expresión (GFP-GFP y  GAL-  GAL) tendríamos que observar mayor proliferación de estos linfocitos

25. HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con  GAL Control negativo/positivo

26. HeLas sin trasducir Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre-esti- mulados GFP Linfocitos pre-esti- mulados  GAL

27. HeLas transducidas con GFP Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre- estimulados con GFP Linfocitos pre- estimulados con  GAL

28. HeLas transducidas con  GAL Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre- estimulados con GFP Linfocitos pre- estimulados con  GAL