1. Tecnología Del DNA Recombinante

2. ¿Qué es el DNA Recombinante?
Es una molécula que proviene de la unión artificial de 2
fragmentos de DNA
*La primera molécula de DNA Recombinante fue
creada en 1972 por el biólogo molecular Paul Berg.
A través de este DNA podemos distinguir:
 DNA Recombinante Natural: Se genera de
manera biológica dentro de los organismos
 DNA Recombinante Sintético (DNA Quimérico):
Es el obtenido por los científicos y usado en
ingeniería genética para innovaciones
biotecnológicas.

3. Tecnología del DNA
Recombinante
 Es una técnica que ha permitido introducir
material genético foráneo en un individuo, y
hacer que éste organismo incorpore dicho
material a su genoma y lo exprese como si fuera
suyo.
 Esta tecnología se desarrollo a partir del
descubrimiento de las enzimas de restricción y
su acción sobre los ácidos nucleicos.

4. Conceptos
 Enzimas de restricción
( Endonucleasas de restricción) :
* Son enzimas sumamente específicas y son capaces de cortar
ambas hebras del DNA en lugares específicos, creando de esta
manera una serie de fragmentos.
* Trabajan únicamente sobre secuencias específicas de bases
nitrogenadas.
* La función de las enzimas de restricción es la de proteger al
organismo de DNA extraño.

5.  Vectores
* El vector es el vehículo que transporta el gen o genes
de interés al organismo hospedador.
* permiten la unión de los fragmentos de DNA extraño
a su propio DNA por medio de sitios de restricción
compatibles
* Una vez dentro la célula, el vector se multiplica
produciendo varias copias idénticas del gen que
transporta.
* Debe ser fácil de recuperar.

6.  Plásmidos
• Son moléculas de DNA
bicatenario de carácter
extracromosómico y
tienen la capacidad de Dibujo esquemático de un plásmido en
replicarse una bacteria: en verde, el ADN del
cromosoma; en rojo, el plásmido
autónomamente.
• Contienen un número
limitado de sitios de
restricción.
• Poseen genes de
resistencia para varios
antibióticos.
• El vector PBR322 fue uno
de los primeros plásmidos
usados para la
construcción de DNA
recombinante.

7. • Fagos o Bacteriófagos:
 Los virus más empleados como vectores para
DNA recombinante son los bacteriófagos
lambda por su facilidad de incorporar genes de
otros individuos a su genoma
 La transducción especializada que presentan
los fagos lambda hacen que sean usados como
vectores.

8. • Cósmidos:
 Son modernos vectores híbridos que emplean genes
específicos del fago lambda: la secuencia cos.
 Estos vectores se construyen con la secuencia cos
más la porción de DNA foráneo insertada en el
extremo cohesivo de este fragmento.
 El DNA foráneo se une con la secuencia cos y
penetra en la célula como un virus, pero una vez que
está dentro, se comporta como un plásmido.
 Puesto que la mayoría del genoma del fago lambda
se elimina, la porción de DNA foráneo que se puede
introducir es mucho mayor.

9.  Southern Blot
*Se emplea para identificar fragmentos específicos de ADN
en una mezcla compleja, por medio del uso de la electroforesis en gel
y la hibridación de sondas especificas.
*Inicialmente se digiere el ADN que se quiere estudiar con
una o más enzimas de restricción, las cuales cortan puntos
específicos de la secuencia, generando fragmentos de varios
tamaños.
* Posteriormente, estos fragmentos se separan por su
tamaño en un gel de agaroza empleando corriente eléctrica y luego
se transfieren a una membrana de nylon.
*Para la detección del fragmento de interés en la
membrana, se utiliza otro fragmento de ADN o ARN que se llama
sonda y que contiene la secuencia complementaria al fragmento que
se quiere identificar.
*La sonda, se marca con un isótopo radiactivo, se agrega a
una solución y se incuba con la membrana por varias horas.
*Esta hibridización, hace que la sonda se adhiera al
fragmento de ADN en la membrana el cual contiene las bases
complementarias.
*Al exponer la membrana a una película de fotografía, se
puede identificar el fragmento y establecer si está o no está
contenido en el ADN que se esta estudiando.

10.  Southern Blot: