Citometria de Fluxo

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ENDODONTIA - Validação da citometria de fluxo como meio de avaliação dum protocolo de desinfecção endodôntico

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Citometria de Fluxo

  1. 1. Realizado por:Amando António Coimbra de CarvalhoDirectores:Prof. Doutor António Ginjeira (FMDUL)Prof. Doutora Ana Tenreiro (ICAT-FCUL)
  2. 2. Estabelecer uma correlação entreas contagens de E. faecalis obtidaspelo método Padrão em placas(CPP) e o método de Citometria deFluxo (CF)
  3. 3. 1. Mais rápido2.Mais robusto3.Mais abrangente4.Mais preciso (viáveismas não cultiváveis)5.Permite a utilizaçãode conservantesbacteriostáticos6.Mais ecológicoVantagens do métodoCitometria de Fuxo
  4. 4. Comparar a eficáciabactericida do ENDOX Plus®,do NaOCl a 5,25% e doNaOCl a 2% aquecido a 50ºCcontra o E. Faecalis
  5. 5. 96 Incisivos centrais(E.faecalis)48hIEndox Plus(n=30)CPP CFIINaOCl 5,25%(n=30)CPP CFIIINaOCl 2% 50ºC(n=30)CPP CFIVControlo (+)(n=6)CPP CFVControlo (-)(n=6)
  6. 6. 1º- 0,2ml de PBS estéril2º- Descarga de 3 impulsos de 1/10de segundo de corrente eléctricaalterna de alta frequência (aprox.600 Khz);3º- 1ml PBS estéril
  7. 7. 1º - 0.2ml NaOCl durante 5minutos2º - 1ml Tiosulfato de sódio a 5%durante 1 minuto
  8. 8. GRUPO IV / controlo (+)6 dentes inoculados /0,2ml PBS estéril + 1mltiosulfato de sódio 5%GRUPO V /controlo (-)6 dentes estéreis /0,2ml PBS estéril + 1mltiosulfato de sódio 5%
  9. 9. 96 Incisivos centrais(E.faecalis)48hIEndox Plus(n=30)CPP CFIINaOCl 5,25%(n=30)CPP CFIIINaOCl 2% 50ºC(n=30)CPP CFIVControlo (+)(n=6)CPP CFVControlo (-)(n=6)
  10. 10. log (cf)
  11. 11. 102 Dentes + 5ml BHIB estéril(turvidez)102 Dentes 3 cones papel PBSestérilC.P.PC.F1º2ºVibração
  12. 12. Meio Selectivo(Slanetz and Bartley® ou D-Coccosel®Kit API®Coloração Gram
  13. 13. Amostra
  14. 14. II) Sistema ópticolateral SSCI - Suspensão debactérias coradasII) Laser488nm II) Sistema ópticofrontal FSCII)FiltrosIII) Tubos fotomultiplicadoresque convertem o sinal luminosoem sinal electrónicoCITOMETRIA FLUXO
  15. 15. SISTEMA HIDRAULICOINTRODUZ E ALINHA AS PARTÍCULASNUM FLUXO CONTÍNUOSISTEMA ÓPTICOGERA E COLECTA OS SINAIS DE LUZSISTEMA ELETRÓNICOCONVERTE OS SINAIS ÓPTICOS EMSINAIS ELETRÓNICOS,DISPONIBILIZANDO-OS PARA ANÁLISENO COMPUTADOR
  16. 16. Electrodo Activo
  17. 17. Realizado por:Amando António Coimbra de CarvalhoDirectores:Prof. Doutor António Ginjeira (FMDUL)Prof. Doutora Ana Tenreiro (ICAT-FCUL)

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