1. ANDRÉS DAVID ARÁNZAZU CEBALLOS
LAURA CRISTINA AGUDELO CARDONA
3rd SEMESTER
FACULTY OF MEDICINE
U.P.B
february 18/2013

2. CELL CYCLE
 The cells have capacity of self-
reproduction through cell
division, resulting from one
parental cell to two daughter
cells.
 Eukaryotic cell cycle divide
approximately every 24 hours.

3. CANCER
Normal cells in the body follow an
orderly path of growth, division,
and death. Unlike regular cells,
cancer cells do not experience
programmatic death and instead
continue to anormal grow and
divide.

4.  Cancer cells have less dependence on external stimulus and be
have as would be if they continually subject to a stimulation
mechanism.

5. IGFBP-3 :
Is a member of the insulin-like
growth factor binding protein
(IGFBP), most abundant in serum.
is a multifunctional protein that is
found to play a variety of roles in
circulation, in the extracellular
environment, and inside the cell.

6. Over the past decade it has become widely appreciated that
IGFBP-3 contributes to improving the patho-physiology of a
variety of human diseases, such as cancer, diabetes, and
malnutrition.

7.  All cells require an external stimulus to
initiate a state of active proliferation
 Cancer cells do not depend on a stimulus
for cell division, are continually in
proliferation.
 The IGFBP-3 seeks to create an inhibitory
effect on cell
proliferation malignant cells and induce
apoptosis of these
cells to prevent cancer continue.

8. showed that IGFBP-3 exerted its growth inhibitory action through
not only induction of apoptosis but also the G1 cell cycle.

9. Cultivo de células bajo
condiciones especificas, que LINEAS CELULARES.
permiten obtener:
 786-O
Resultados sobre alguna  A549
función normal de la célula.  MCF-7
El comportamiento de las
celulas frente a una determinada
manipulación.

10. TEM:
 Es un microscopio que utiliza un haz
de electrones.
 Utiliza muestras ultra finas.
 Pueden mostrar estructuras mucho
más pequeñas.

11. APOPTOSIS
Se evaluó usando Anexina V / PI Kit.
Serie de reacciones
químicas que ocurren en
la célula produciendole
una muerte silenciosa, sin
alterar la función normal
del organismo.
se evaluó por citometría
de flujo con software de
análisis Cell-Quest.

12. ANALISIS DEL CICLO
CELULAR
 la distribución del ciclo celular
se midió mediante una técnica
de fluorescencia de
clasificación de células
activadas .

13.  Permite determinar la expresion de
genes en diversos tejidos.
 Amplificacion de RNA a traves de la
sintesis previa de su DNAc.
 Utiliza Transcriptasa inversa
y varios ciclos de PCR.

14. WESTERN BLOT
 Identificación de secuencias
especificas de DNA
 Proteinas procedentes de celulas
son separadas por electroforesis
(SDS-PAGE).
 Disolucion con SDS cargado
negativamente.
 Las proteinas van a un filtro donde
se incuban con anticuerpos que
reaccionan con las proteínas de
interes.

15.  Inducción de apoptosis en la línea celular MFC-7.

16. La línea celular MFC-7 se transfecto con
2 vectores PCIGFBP-3
PCI-neo
En los cuadrantes superior e inferior derechos, se localizaron las
células que sufrieron APOPTOSIS
En los cuadrantes superior en inferior izquierdos, se localizaron
las células que quedaron vivas NECROSIS.

18.  Las células transfectadas con PCI-
IGFBP-3 fueron las que mas Sufrieron
APOPTOSIS.

19. IGFBP-3 detiene el ciclo celular en la fase G1.

20. Citometría de flujo.
Se transfectaron todas las líneas celulares (MFC-7, A549 Y 786-O)
786-O
PCI-Neo PCI-IGFBP-3
Las células transfectadas con PCI-IGFBP-3 tuvieron mas
efecto con respecto a la detención del ciclo celular y su
variación fue en la fase G1.

21. MFC-7 Efectos de IGFBP-3 EN RNAm a
nivel de ciclina E1, CDK1,CDK2,
P16 Y P21; en la líneas celulares.
786-O  Análisis de cuantificación de PCR
en tiempo real.
Se analizo el efecto de la IGFBP-E
A549
potencializado por PCR, en fase G1 y
su relación con las factores
implicados en el proceder del ciclo.

22. MFC-7 Cilcina Cdk2 p21
Cilcina Cdk2 * p21
786-O
Cilcina Cdk2 p21
A549

23.  Efectos de IGFBP-3 en las
proteínas reguladoras del ciclo
celular.
Western blot.
El principal efecto del IGFBP-3
sobre el ciclo celular lo realiza en la
fase G1, mediante:
P21
Ciclina E1

25. ANDRES DAVID ARANZAZU CEBALLOS

26. LAURA CRISTINA AGUDELO CARDONA

27. The IGFBP-3 serves to generate apoptosis, to avoid over-stimulation
of altered cells in addition to changing the activity of a series of
elements that usually allow performing normal cell cycle.
The action of IGFBP-3 to inhibit or halt the cell cycle at G1, makes this
one becomes a possible treatment for patients suffering from a cancer.
The inclusion of IGFBP-3 in patients with cancer treatment would be a
good alternative as gene therapy, thus decrease the tedious use
treatments currently used, leading to a better quality of life for patients.
Knowledge about the most used tests of molecular biology in medical
practice, have a fundamental value to always reach the most accurate
diagnosis face when the disorders report a high degree of difficulty.

28. Martinez Sanchez, Maria Lina. Molecular Biology.
7. ed. Medellín: UPB. Faculty of Medicine, 2012.