Anteproyecto de Tesis para optar al grado de Doctor en Bioquímica. Inmunología de la Reproducción

1. Proteinas chaperonas asociadas
a MICA en placenta humana
T.M. Antonio Serrano G.
Doctorado en Bioquímica
Fac. Cs Qcas. y Farmacéuticas
U. de Chile

2. NK

3. NK enlaza Inmunidad Innata y
adaptativa

6. NKG2D

7. Ligandos de NKG2D

8. Ligandos de NKG2D

9. MICA

10. MICA y Stress
Groh PNAS 1996
• Proteína de membrana
que se presenta en células
sometidas
• Stréss térmico
• Infecciones por
virus
•Transformación
maligna.
•Gen activado por HSPs

11. MICA en Melanoma
Inmunogenética, UBA, Manuscrito

12. MICA en placenta
Mincheva-Nilsson, J Immunol 2006

13. MICA en placenta

14. Multicomplejo de Chaperonas
en stress

15. Entonces
• Ante stress se acumula MICA en RE
• Sobre expresion de Vasostatina en melanoma
produce acumulacion de MICA en reticulo
• No se han detectado variantes de splicing y no
posee secuencia de retención en RE
• Folding
• Proteínas Chaperonas
• Mecanismo de Evasión Inmune
– Tumoral
– Placenta

16. En Placenta
• Se conoce que en este
órgano existe una gran
cantidad de IL-10 en el
trofoblasto como
mecanismo de escape
inmune permitiendo la
sobrevida del feto
• Regulación de expresión
de moléculas relacionadas
al complejo mayor de
histocompatibilidad por
citoquinas.

17. Entonces…
• IL-10 induce baja de MHC-1 en membrana
• IL-10 induce baja de MHC-2 en membrana
• IL-6 induce baja de MHC-2 en membrana (Stat3)
• INF-g aumenta MHC I en membrana (TAP y LPM2/7)
• MHC-II aumento transactivador CIITA

18. Hipótesis
• MICA es retenido en retículo endoplasmico de
trofoblasto temprano por interacción con un
multicomplejo de chaperonas
• Citoquinas modulan retención de MICA en
retículo endoplasmico por acción de proteínas
chaperonas o del sistema de exportación a
membrana en células de citotrofoblasto

19. Objetivo
• Determinar proteínas asociadas a MICA en su
acumulacíon en retículo endoplasmico de
células trofoblásticas tempranas.
• Determinar influencia de citoquinas en la
acumulación de MICA en retículo endoplasmico
de células del de citotrofoblasto

20. 1) Detectar MICA asociado a retículo endoplásmico y a
moléculas chaperonas en placenta y citotrofoblasto.
Tejido Citologia
MICA Golgi
CALR
Confocal
IHQ
MICA
Placenta
1er Trimestre
HSJ

21. CITOTROFOBLASTO CULTIVO
Sin tto
IL-10
INF-g
FACS MEMBRANA INTRACELULAR
2) Detectar Variaciones de MICA Intracelular y de
membrana según condición de citoquinas
MICA

22. 3) Detectar Proteínas asociadas a MICA en fracción
microsomal de placenta.
Inmunoprecipitacion
Ultracentrifugación
MICA
Placenta
1er Trimestre
HSJ
Fracción Microsomal

23. SDS PAGE 2D
4) Identificar proteínas asociadas a MICA en fracción
microsomal de placenta.
Inmunoprecipitacion
MICA
CALX
HSP
CRT
MALDI/TOF
MICA

24. SDS PAGE 2DCITOTROFOBLASTO CULTIVO
Sin tto
IL-10
INF-g
RT-PCR Semi-Q
5) Identificar proteínas asociadas a MICA en fracción
microsomal de placenta, que varían según citoquina

25. Proyeciones
• Determinar comunicación entre via de IL-
10 y Ing-g y chaperonas
• Correlacionar hallazgos con células de
melanoma, Ca. de próstata.
• Determinar nuevos mecanismos de evasion
inmune :
– Células malignas
– Protección al feto
– Mecanismos autoimunes