Tesilla para la asignatura de Terapia Génica del programa de Doctorado en Bioquímica

1. Desarrollo de Terapia génica suicida a
través de liposomas conjugados con el
ligando del receptor MC1R en melanoma
maligno
Antonio E. Serrano

2. Melanoma

3. Melanoma Uveal

4. Antígenos Asociados A Tumor
 Productos de genes silentes
 Proteínas oncogénicas
 Antígenos derivados de
proteínas virales
 Antigenos oncofetales
 Antígenos tejido-específicos
 Productos de mutaciones
puntuales

5. Antígenos Asociados a Melanoma
 Melan-A/Mart-1,
 MAGE 1,2 y 3
 gp-100
 Gp75
 TRP-2
 tirosinasa
 MC1R

6. Receptor Melanocortina 1

7. α-MSH

8. MC1R en melanoma

9. Objetivo
 Desarrollar una estrategia de entrega no viral
de un gen suicida utilizando liposomas
conjugados con α-MSH, específicos para el
receptor MC1R sobreexpresado en células
de melanoma maligno humano.

10. Objetivos específicos:
 1) Clonar el gen de la HSV-TK en un plásmido comercial y
transfectarlo a células de melanoma humano y evaluar lisis del
gen suicida en presencia de ganciclovir mediante esnsayos de
citotoxicidad por liberación de Cr 51
 2) Evaluar reconocimiento del complejo α-MSH-PEG–DSPE por
parte de melanomas MC1R positivos a través de
inmunodeteccion y radiomarcación.
 3) Evaluar eficiencia de transfección y funcionlidad del complejo
pCMV-HSV-TK-Neo α-MSH-PEG–DSPE in vitro mediante rt-pcr
y ensayo citotóxico respectivamente.
 4) Evaluar citólisis in vivo de pCMV-HSV-TK-Neo α-MSH-PEG–
DSPE en células de melanoma murino B16 que espresan MC1R
humano en superficie mediante análisis histológico y
macroscópico en metástasis pulmonares.

11. 1) Clonar el gen de la HSV-TK

12. Clonar el gen de la HSV-TK
Lipofectin
Cr51
· Chromium Release
· PCR

13. Evaluar reconocimiento del complejo α-
MSH-PEG–DSPE
PEG
distearoylphosphatidylethanolamine

14. Evaluar reconocimiento del complejo α-
MSH-PEG–DSPE
Rhodamina
FACS

15. Eficiencia de transfección y funcionlidad
del complejo pCMV-HSV-TK-Neo α-
MSH-PEG–DSPE.
Cr51
· Chromium Release
· PCR

16. Evaluar citólisis in vivo
hMC1r
Lipofectin
Melanoma B16
GCV

17. Resultados esperados

18. Análisis histológico

19. Perspectivas

20. Perspectivas
 Desarrollo de entrega adenoviral del gen
HSV-Tk a melanoma utilizando MC1R como
receptor.
 Modificaciones del péptido α-MSH para
mejorar selectividad y afinidad.
 Estudio Clínico de estrategia de liposomas
vía nebulización en metástasis pulmonares
de melanoma
 Estudio Clínico de Ad-HSV-tk