Este documento proporciona instrucciones para el método de alanina aminotransferasa (ALT) utilizado en sistemas ADVIA Chemistry para medir la actividad de ALT en suero y plasma humanos. El método se basa en la reacción catalizada por la ALT entre la L-alanina y el alfa-cetoglutarato para producir piruvato y L-glutamato. La velocidad de disminución de la absorbancia de NADH se mide a 340/410 nm y es proporcional a la actividad de ALT en la muestra. El documento describe los
2. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
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Resumen y explicación
El método ADVIA Chemistry Alanine Aminotransferase (ALTP5P) utiliza
piridoxal-5'-fosfato añadido al reactivo 1 del método ADVIA Chemistry ALT. El método
se basa en el trabajo de Wroblewski y LaDue, posteriormente modificado por H. U.
Bergmeyer1.
Principios del procedimiento
La reacción se inicia mediante la adición de cetoglutarato como segundo reactivo.
La concentración de NADH se mide por su absorbancia a 340/410 nm; la velocidad
de la disminución de la absorbancia es proporcional a la actividad de la ALT.
Ecuación de la reacción
ALT + P5P ALT activada
L-alanina + -cetoglutarato Piruvato + L-glutamato
Piruvato + NADH Lactato + NAD
Reactivos
Los reactivos se suministran tal como se indica a continuación. Los componentes
incluidos en el envase sólo están disponibles como kit.
REF (PN)
Tamaño del
recipiente Símbolo Contenido Cantidad
N.º de
análisis
03036926 Reactivos para
alanina-aminotransferasa
4 x 670
70 ml Reactivo 1 6 x 68 ml
20 ml Reactivo 2 6 x 20 ml
07371282 Reactivo de
piridoxal-5’-fosfato
8 x 2,18 mg 8 x 670
07501976 Reactivos para
alanina-aminotransferasa
7 x 360
40 ml Reactivo 1 7 x 38 ml
20 ml Reactivo 2 7 x 11,2 ml
01411533 Reactivo de
piridoxal-5’-fosfato
7 x 1,22 mg 7 x 360
3. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
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Componentes y concentraciones
PRECAUCIÓN: Este dispositivo contiene material de origen animal y debe
manipularse como potencial portador y transmisor de enfermedades.
NOTA: la azida sódica puede reaccionar con las tuberías de cobre y plomo y formar
azidas metálicas explosivas. Cuando se eliminen los reactivos, enjuagar con agua
abundante para evitar la acumulación de azidas si la eliminación a través de los
desagües sanitarios es conforme a la normativa vigente.
Las fichas de datos de seguridad (MSDS/SDS) están disponibles en
www.siemens.com/diagnostics.
Para uso diagnóstico in vitro.
Preparación y uso de los reactivos
Use P5P REF 07371282 para los kits REF 03036926 y REF 02760612. Use P5P
REF 01411533 para el kit REF 07501976.
Prepare el reactivo 1:
1. Añada una parte del contenido del cartucho de R1 al contenido del vial de P5P.
2. Mezcle bien para garantizar la homogeneidad.
3. Vuelva a verter la solución en el cartucho de R1.
4. Mezcle bien.
5. Enjuague cuidadosamente el vial de P5P varias veces con reactivo R1.
6. Vacíe de nuevo el contenido en el cartucho de R1.
El reactivo 2 está listo para usar. Antes de utilizarlo, gire con suavidad el reactivo para
eliminar las burbujas y garantizar su homogeneidad.
Reactivo Componente Concentración
Reactivo 1 L-alanina
LDH (corazón porcino)
Azida sódica
610 mmol/l
≥ 1,2 KU/l
0,09%
Reactivo 2 Alfa-cetoglutarato
NADH
Azida sódica
93 mmol/l
1,41 mmol/l
0,09%
Reactivo de
piridoxal-5’-fosfato
Piridoxal-5’-fosfato 0,13 mmol/l*
* una vez reconstituido
4. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
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Estabilidad del reactivo en el sistema (OBS)
Los reactivos sin abrir son estables si se almacenan entre 2 y 8°C hasta la fecha
de caducidad que aparece impresa en la etiqueta del producto en todos los sistemas.
No congele los reactivos.
Si desea más información, consulte la sección Introducción a los métodos de la guía
del usuario específica del sistema.
Manipulación de las muestras
Siemens Healthcare Diagnostics recomienda usar suero o plasma (con heparina de
litio) para este método.
Si desea más información, consulte la sección Recogida y preparación de las
muestras en la Introducción a los métodos de la guía del usuario específica del
sistema.
Para ver las instrucciones sobre cómo cargar los reactivos y procesar las muestras,
consulte la sección Inicio diario de la guía del usuario específica del sistema.
NOTA: las concentraciones altas de hemoglobina pueden aumentar el nivel de ALT,
sobre todo en las muestras normales.
Material necesario pero no suministrado
En la lista que aparece a continuación figura el material no suministrado que se
necesita para este método:
• Contenedores para muestras
• Soluciones del sistema
• Calibrador (consulte las referencias (REFs) en la sección Resumen del método)*
• Material de control (véase la sección Control de calidad)*
• Adaptadores para los recipientes de reactivo:
• Adaptador de 20 ml (REF 02404085; PN 094-0159-01) para ranura de 40 ml
(ADVIA 1200, ADVIA 1800)
• Adaptador de 20 ml (REF 05249323; PN 073-0936-01) para ranura de 70 ml
(ADVIA 1200)
• Adaptador de 20 ml (REF 00771668; PN 073-0345-02) para ranura de 70 ml
(ADVIA 1650, ADVIA 2400)
• Adaptador de 40 ml (REF 08163594; PN 073-0788-01) para ranura de 70 ml
(ADVIA 1650, ADVIA 2400)
*Si desea información sobre la conservación y la estabilidad, consulte el prospecto.
Sistema Estabilidad
ADVIA 1200 20 días
ADVIA 1650/1800 30 días
ADVIA 2400 30 días
5. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
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Calibración
Para la calibración de este método se usa un sistema de valor de factores (FV) fijo que
se basa en el coeficiente establecido de extinción molar de NADH a 340 nm, ajustado
según la correlación de la muestra de paciente con el método de referencia de la IFCC.
La unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir 1 µmol de
NAD por minuto en las condiciones del análisis.
Para información sobre la configuración y la utilización, consulte la sección Descripción
de la calibración en la guía del usuario específica del sistema.
Frecuencia de calibración
No requiere calibración.
Frecuencia del blanco de reactivo (RBL)
Siemens recomienda medir el blanco de reactivo (RBL) a diario.
Control de calidad
Siga las reglamentaciones gubernamentales o los requisitos de acreditación para
conocer la frecuencia de control de calidad.
Siemens recomienda el uso de materiales de control de calidad comercializados con al
menos 2 niveles (bajo y alto). Se consigue un nivel de rendimiento satisfactorio cuando
los valores de analitos obtenidos se encuentran dentro del rango de control aceptable
para el sistema o cuando se encuentran dentro del rango determinado por el
laboratorio mediante un sistema de control de calidad interno adecuado.
La frecuencia real de controles en un laboratorio se basa en diversos factores, tales
como la carga de trabajo, la experiencia con el sistema y la normativa aplicable. Cada
laboratorio deberá evaluar los controles según la frecuencia establecida en sus
propias directrices internas. Al llevar a cabo el método, analizar al menos 2 niveles de
controles al día.
También deberán analizarse los controles en las situaciones siguientes:
• Siempre que se use un nuevo lote de reactivos.
• Después de la realización de cualquier actividad de mantenimiento, limpieza o
resolución de problemas del sistema.
• Después de efectuar una nueva calibración.
Para más información, consultar la sección Descripción del control de calidad en la
guía del usuario específica del sistema.
6. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
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Limitaciones del procedimiento
Existen diversas sustancias que causan cambios fisiológicos en las concentraciones
de analitos séricos o plasmáticos. Un comentario extenso de éstas y otras sustancias
interferentes, de sus concentraciones séricas o plasmáticas y de su posible implicación
fisiológica excede el objetivo de este documento. Consulte las referencias
bibliográficas para obtener detalles específicos sobre las posibles sustancias
interferentes conocidas 2.
Como en el caso de cualquier otra reacción química, deberá estar atento al posible
efecto sobre los resultados de interferencias desconocidas producidas por
medicamentos o sustancias endógenas. El laboratorio y el médico deben evaluar
todos los resultados de pacientes en función del estado general del paciente.
Interferencias
Al analizar las posibles sustancias interferentes que aparecen a continuación, Siemens
obtuvo los resultados siguientes:
ADVIA 1200
Sustancia interferente
Concentración
de la sustancia
interferente
Concentración
de ALT en la
muestra Interferencia*
Bilirrubina
(conjugada y no conjugada)
25
(428
mg/dl
µmol/l)
60 U/l INS
Hemólisis
(hemoglobina)
1000
(10,0
mg/dl
g/l)
60 U/l INS
Lipemia
(por concentrado de triglicéridos)
1000
(11,3
mg/dl
mmol/l)**
60 U/l INS
Lipemia (por Intralipid) 150
(1,7
mg/dl
mmol/l)**
90 U/l INS
250
(2,3
mg/dl
mmol/l)**
90 U/l -12,3%
*INS = Interferencia no significativa. Se considera interferencia significativa un efecto
porcentual ≥ 10%.
**como trioleína
7. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
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Características de la prueba
Precisión
Cada muestra se analizó dos veces por serie, con una o dos series por día, durante al
menos 10 días (en ADVIA 1650/ADVIA 1800 durante 15 días). Las estimaciones de
precisión se calcularon de conformidad con el documento EP5-A2 del CLSI, Evaluation
of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline3.
Los datos que aparecen en esta sección son representativos del rendimiento típico
de los sistemas ADVIA Chemistry. Los datos de su laboratorio pueden diferir de
estos valores.
ADVIA 1650/1800
Sustancia interferente
Concentración
de la sustancia
interferente
Concentración de
ALT en la muestra Interferencia*
Bilirrubina
(conjugada)
30
(514
mg/dl
µmol/l)
59 U/l INS
Bilirrubina
(no conjugada)
30
(513
mg/dl
µmol/l)
30 U/l INS
Hemólisis
(hemoglobina)
390
(3,9
520
(5,2
mg/dl
g/l)
mg/dl
g/l)
29
113
29
113
U/l
U/l
U/l
U/l
+12,2%
INS
+23,2%
INS
Lipemia
(por Intralipid)
400
(4,6
mg/dl
mmol/l)**
93 U/l INS
500
(5,7
mg/dl
mmol/l)**
93 U/l -19,9%
*INS = Interferencia no significativa. Se considera interferencia significativa un efecto
porcentual ≥ 10%.
**como trioleína
ADVIA 2400
Sustancia interferente
Concentración
de la sustancia
interferente
Concentración
de ALT en la
muestra Interferencia*
Bilirrubina
(conjugada y no conjugada)
25
(428
mg/dl
µmol/l)
39 U/l INS
Hemólisis
(hemoglobina)
500
(5,0
mg/dl
g/l)
39 U/l INS
Lipemia
(por concentrado de triglicéridos)
500
5,7
mg/dl
mmol/l)**
39 U/l INS
Lipemia (por
Intralipid)
500
(5,7
mg/dl
mmol/l)**
39 U/l INS
*INS = Interferencia no significativa. Se considera interferencia significativa un efecto
porcentual ≥ 10%.
**como trioleína
8. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
10493944_ES Rev. F, 2011-11 8 - Español
Rango analítico
Este método es lineal entre 5 y 1000 U/l para suero y plasma.
Siemens ha validado un reanálisis automático para este método que aumenta los
rangos reportados hasta 3000 U/L para el sistema ADVIA 1200 Chemistry y hasta
6000 U/L para los sistemas ADVIA 1650/1800/2400 Chemistry para suero y plasma.
Valores esperados
Los valores esperados en este método para los adultos están comprendidos entre
7 y 40 U/l, determinados a 37°C. Este rango se estableció con piridoxal-5'-fosfato4.
Siemens proporciona esta información como referencia. Cada laboratorio deberá
establecer su propio rango normal. Los valores de los rangos normales y los valores
de los rangos anormales pueden introducirse en la ventana Parámetros analíticos
(Bioquímica).
ADVIA 1200
Intraserie Total
Tipo de muestra Nivel (U/l) DE CV (%) DE CV (%)
Control 1 29 0,8 2,6 1,6 5,7
Control 2 155 1,0 0,6 2,6 1,7
ADVIA 1650/1800
Intraserie Total
Tipo de muestra Nivel (U/l) DE CV (%) DE CV (%)
Suero 37 0,8 2,3 1,4 4,2
Suero 153 1,1 0,8 2,4 1,7
ADVIA 2400
Intraserie Total
Tipo de muestra Nivel (U/l) DE CV (%) DE CV (%)
Suero 33 0,7 2,2 1,0 2,9
Suero 147 1,9 1,3 2,1 1,4
9. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
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Correlación del sistema
Se comparó el rendimiento del método ADVIA Chemistry ALTP5P (y) con el
rendimiento del mismo método en el sistema de comparación (x). La correlación entre
los tipos de muestras de plasma y suero se proporciona como una comparación de
matrices.
Normalización
La normalización del método ADVIA Chemistry ALTP5P es conforme al método de
referencia de la IFCC mediante correlación con la muestra del paciente5. Consulte los
datos de correlación en la sección Correlación del sistema para analizar la relación.
ADVIA 1200
Tipo de muestra
Sistema de
comparación (x) N
Ecuación
de regresión Sy.x r Rango de las muestras
Suero ADVIA 1650 ALTP5P 130 y = 1,00x + 3,3 2,2 0,999 4–569 U/l
Plasma* ADVIA 1200 (suero) 83 y = 1,03x - 1,5 4,3 0,998 7–200 U/l
Suero Método de referencia
de la IFCC
58 y = 1,04x + 0,8 12,2 0,997 8–481 U/l
*heparina de litio
ADVIA 1650/1800
Tipo de muestra
Sistema de
comparación (x) N
Ecuación
de regresión Sy.x r Rango de las muestras
Suero Dimensión® RxL ALT 118 y = 0,98x + 2,4 4,1 1,000 6–872 U/l
Suero Hitachi 912 (Roche)
ALT
114 y = 0,90x + 0,9 7,0 0,998 8–688 U/l
Plasma* ADVIA 1650 (suero) 80 y = 0,99x - 0,7 3,1 0,999 13–342 U/l
Suero Método de referencia
de la IFCC
52 y = 1,02x + 4,3 25,4 0,98 56–499 U/l
*heparina de litio
ADVIA 2400
Tipo de muestra
Sistema de
comparación (x) N
Ecuación
de regresión Sy.x r Rango de las muestras
Suero ADVIA 1650 ALTP5P 106 y = 1,01x + 1,7 6,0 0,999 4–993 U/l
Plasma* ADVIA 2400 (suero) 80 y = 0,98x - 1,1 3,2 0,999 12–352 U/l
Suero Método de referencia
de la IFCC
56 y = 1,05x - 2,1 23,3 0,99 56–499 U/l
*heparina de litio
10. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
10493944_ES Rev. F, 2011-11 10 - Español
Bibliografía
1. International Federation of Clinical Chemistry, Committee on Reference Systems
for Enzymes. Clin Chem Lab Med. 40(7):718-724(2002).
2. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 3rd ed. Washington:
AACC Press (1990).
3. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Evaluation of
Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved
Guideline - Second Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards
Institute; 2004. NCCLS Document EP5-A2.
4. Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, PA: WB
Saunders Company (1995).
5. Schumann G, Bonora R, Ceriotti F, et al. IFCC Primary Reference Procedures for
the Measurement of Catalytic Activity Concentration of Enzymes at 37°C.
Clin Chem Lab Med. 40:718-724(2002).
Asistencia técnica
Para obtener servicio al cliente, contactar con el proveedor local de servicio técnico.
www.siemens.com/diagnostics
Marcas comerciales
ADVIA y Dimension son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Hitachi es una marca comercial de Hitachi Ltd.
Intralipid es una marca comercial de Fresenius Kabi AB.
Roche es una marca comercial de Roche Diagnostics.
11. Alanina-aminotransferasa (ALTP5P)
10493944_ES Rev. F, 2011-11 11 - Español
Descripción de los símbolos
Los siguientes símbolos pueden aparecer en la etiqueta del producto:
Símbolo Definición Símbolo Definición
Dispositivo médico para diagnóstico
in vitro
Número de referencia
Fabricante Representante autorizado en la Unión Europea
Símbolo de la CE
Marca de la CE con número de identificación del
organismo notificado
Consulte las instrucciones de uso ¡Precaución! Peligro Biológico Potencial
No congelar (> 0°C) Limitación de la temperatura (2–8°C)
Temperatura mínima (≥ 2°C) Limitación superior de la temperatura (≤ -10°C)
Mantener protegido de la luz solar Fecha de caducidad
Conservar en posición vertical Contiene material para (n) pruebas
Código de lote Imprimido con tinta de soja
2010-01 Formato de fecha (año-mes) Reciclar
Punto verde
