La Inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcaje que se vale del uso de anticuerpos marcados con moléculas fluorescentes para demostrar la presencia de una determinada molécula de interés en un tejido. órgano, o solución de estudio.

1. LICENCIATURA EN
BIOLOGIA
Inmuno
fluorecencia
ó
ó
ó

2. INMUNOFLUORESCENCIA
TÉCNICA INMUNOMARCAJE
Desarrollada en 1950 por
Coons y Kaplan

3. INMUNOFLUORESCENCIA
TÉCNICA INMUNOMARCAJE
Reacción
antígeno-anticuerpo
Anticuerpos unidos a una
sustancia fluorescente

4. Para demostrar la presencia
de una determinada
molécula de interés
Antígenos

5. INMUNOFLUORESCENCIA
El marcaje está dado
por una molécula
fluorescente
Fluorocromo
Aprovecha la interacción
antígeno anticuerpo
Unión covalente al anticuerpo

6. INMUNOFLUORESCENCIA
El marcaje está dado
por una molécula
fluorescente
Fluorocromo
Unión covalente al anticuerpo
Preparado
biológico
Aprovecha la interacción
antígeno anticuerpo
La muestra puede ser observada
Microscopia fluorescente
Fotometría

8. FLUORESCENCIA
Propiedad de una sustancia de emitir luz
cuando es expuesta a radiaciones de baja
longitud de onda y alta energía

9. FLUORESCENCIA
Propiedad de una sustancia de emitir luz
cuando es expuesta a radiaciones de baja
longitud de onda y alta energía
Longitud de onda más larga
Luz UV
Rojo
Amarillo
Verde
FITC
Cianina (Cy5)
Rodamina
Alexa fluor

10. APLICACIONES
Tinción
Presencia y distribución de
Proteínas
Glúcidos
Moléculas pequeñas
En:
Cortes de tejidos
Líneas celulares cultivadas
Células individuales
Secreciones que contengan
células en suspensión

11. IFD
Un único anticuerpo
Ag-Ac-Fc
Primaria
Rápida y poco sensible a interferencias

12. IFI
Dos anticuerpos
Ag-Ac-Ac-Fc
Secundaria
Aplicación en investigación
Más lenta y compleja.
Sensible a interferencias
Permite amplificar la señal
No es necesario modificar cada uno de los anticuerpos
primarios para acarrear el fluoróforo

13. IFI
Dos anticuerpos
Ag-Ac-Ac-Fc
Secundaria
Aplicación clínica Dos etapas
1
En porta objetos se fijan
antígenos como sustrato conocido
Se coloca el suero
del paciente

14. IFI
Dos anticuerpos
Ag-Ac-Ac-Fc
Secundaria
Aplicación clínica Dos etapas
2
Se agrega la Ig secundaria marcada

15. INMUNOFLUORESCENCIA
Ventajas
Rapidez
Método relativamente
sencillo
Alta especificidad y
sensibilidad
No es necesaria la
esterilidad
Desventajas
Costo de equipo y
reactivos
Personal capacitado
Fotoblanqueo
Generalmente no
son posibles los
análisis in vivo

17. APLICACIONES
Técnicas analíticas
(cualitativas y cuantitativas)
en Química y Bioquímica.
Métodos inmunológicos de
diagnóstico médico.
Análisis poblacional de células
(citofluorimetría de flujo).

18. APLICACIONES
Procedimientos microscópicos en:
Microbiología
Genética
Histología
Histoquímica
Biología Celular
Biología Molecular
Neurobiología
Biología del Desarrollo
Patología

19. Gracias