Intérêts du marquage au 68Ga pour la TEP-application au fucoïdan
•
0 gostou•1,524 visualizações
Marquage au gallium 68, fonctionnalisation d'un polysaccharide, développement de traceur polysaccharidique pour l'imagerie TEP cardiovasculaire
Recomendados
Mais conteúdo relacionado
Mais procurados
Mais procurados (20)
Destaque
Destaque (20)
Semelhante a Intérêts du marquage au 68Ga pour la TEP-application au fucoïdan
Semelhante a Intérêts du marquage au 68Ga pour la TEP-application au fucoïdan (20)
Último
Último (6)
Intérêts du marquage au 68Ga pour la TEP-application au fucoïdan
- 1. RanaBENAZZOUNA Intérêts du marquage au 68 Ga pour la TEP Application au Fucoïdane Rana BEN AZZOUNA FRIM - Team4
- 4. Le choix du radionucléide dépend : - de la période physique du radionucléide qui doit être assez longue pour permettre la production et l’utilisation du radiotraceur, et pas très longue par rapport à la demi-vie biologique afin d’éviter une irradiation inutile du patient. - Le mode de désintégration - La radiochimie du traceur - La disponibilité et le coût - La cinétique du traceur. Introduction
- 5. Introduction 68 Ga - Période : 67,83 minutes - Emax(β+ ) = 1899 keV - Emission β+ : 89 % - photon γ à 1077 keV : 3,22 % - photon γ à 1833 keV : 0,137 %
- 6. Introduction 11 C 13 N 15 O 18 F 52 Fe 62 Zn /62 Cu 64 Cu 66 Ga68 Ge/68 Ga 76 Br 82 Sr/82 Rb 86 Y 124 I 44 Ti/44 Sc 110 In (20,4 min) (9,96 min) (2,05 min) (110 min) (67,6 min) (9,74 min) (76 sec) (3.97 h) Générateur Cyclotron
- 9. Générateur chimique Générateur GMP Générateur Rendement d’élution ≥ 70% en début de vie ≥ 45% après 3 ans ou 400 élutions > 60 % de l’activité nominale Impuretés 68 Ge ≤ 0,005 % ≤ 0,001 % Impuretés métalliques ++++ Fe < 10 μg / GBq Zn < 10 μg / GBq Microbiologie ??? Stérile Endotoxines bactériennes ??? < 30UI/mL Générateur 68 Ge/68 Ga Matrice : TiO2 Eluant: HCl 0.1N
- 11. Générateur 68 Ge/68 Ga Production du 68 Ge Roesch and Riss. The Renaissance of the 68Ge/68Ga Radionuclide Generator Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, Vol. 10, No. 15 Zn2+ Fe3+ Cu2+
- 14. Marquage au 68 Ga Cible Vecteur ? Fixation stable Transferrine NOTA DOTA Spacer
- 15. + 68 Ga3+ Marquage au 68 Ga + 68 Ga3+
- 16. HCl 0,1N Purification Marquage au 68 Ga 1ère difficulté du marquage: impuretés
- 17. < 3< 3 > 7> 7Hydrolyse du GaHydrolyse du Ga pH (Ga(H2O)6)3+ stable 3 7 pH marquage Stabilité vecteur Stabilité du Ga3+ Utilisation de tampons 2ème difficulté de marquage: le gallium ne se fixe que sous forme Ga3+ Marquage au 68 Ga
- 20. DOTANOC Protocole 68Ga-DOTANOC et TE-GEP Essai clinique multicentrique en collaboration avec le CHRU de Nantes « Etude diagnostique comparative multicentrique et prospective de la TEP/TDM au 68Ga-DOTANOC et des procédures d’imagerie conventionnelle (scintigraphie à l’OctréoScan® et TDM/IRM) dans le bilan des tumeurs endocrines gastro-entéro-pancréatiques » Investigateur principal : Dr. Catherine Ansquer (CHU de Nantes)
- 24. DOTANOCCQ Critères qualité Spécifications Contrôles libératoires 1 Activité recueillie ≥ 150MBq en fin de fabrication 2 Test d’intégrité du filtre maintien d’une pression de 2 bars 3 Caractères organoleptiques Solution Claire et incolore 4 Volume 10 mL (volume maximal injectable chez l’homme) 5 pH 4,5-7 6 PRC par HPLC >90% Contrôles post-libératoires 7 Stérilité (after release) Stérile (conformément à la méthode de ) 8 Teneur en 68 Ge (after release) < 0,001% de l’activité totale à libération 9 Endotoxines (after release) 175UI/10mL. (volume maximum injectable de 10mL) 17,5UI/mL 10 Ethanol (after release) < 79g/L (< 10%V/V). 11 Acétone résiduelle (after release) < 7,15 g/L (< 50 mg par jour d après ICH guidline on residual solvant ; 1994)
- 25. Production automatisée Avantages Contraintes Possibilité de production à l’hôpital dans un centre non équipé de cyclotron Investissement ++++ équipement: module de synthèse locaux: enceinte classe C dans un environnement classe C Dosimétrie très avantageuse Contrôle qualité: existence dans le centre d’équipements adéquats pour le CQ: - HPLC, CPG, nécessaire pour le contrôle microbiologique… Chronophage: une journée de travail pour une production sans compter les contrôles post- libératoires
- 26. DOTANOC Cas clinique Bichat-Beaujon Contexte clinique - Tumeur neuroendocrine pancréatique opérée et radiofréquence de deux nodules hépatiques. - TDM et IRM: deux nodules hépatiques, suspicion de métastases hépatiques Octreoscan -La fixation hépatique est homogène sans foyer d’hyperfixation visualisé - Le foyer d’hyperfixation hépatique en tomoscintigraphie semble artefactuel Absence de foyer d’hyperfixation pathologique au niveau du foie et ailleurs
- 30. RanaBENAZZOUNA Fucoïdan C’est quoi? Chevolot, L; Mulloy, B; Ratiskol, J; Foucault, A; Colliec-Jouault, S. A disaccharide repeat unit is the major structure in fucoidans from two species of brown algae. Carbohydr. Res 2001, 330, 529–535 Structure of sulfated oligofucoidan constitutive of algal fucoidan from Ascophyllum nodosum Polyfucose avec des groupements esters sulfates
- 31. RanaBENAZZOUNA Intérêt en biologie Fucoïdan Ligand de la P-Sélectine K. Ley, The role of selectins in inflammation and disease, Trends Mol Med 9 (2003) 263-8 thrombine Berman et al, J Clin Invest 1986 Immunofluorescent localization of P-selectin in whole platelets.
- 32. Sialyl Lewis X Fucoïdan Ligand naturel de la P-sélectine : PSGL-1 Bachelet et al, Biochimica et Biophysica Acta 2009 KD = 1,2 nM Binding of Fucoidan on P-selectin Fucoïdan: an analogue of PSGL-1 Intérêt en biologie Fucoïdan
- 33. Rouzet F et al, J Nucl Med 2011 Transaxial Coronal Sagittal SPECT/CT Histology Infective endocarditis in rat Fucoïdan: Preuve de concept : SPECT
- 34. RanaBENAZZOUNA Fucoïdan TEP Fonctionnalisation: Equipe Paris 13: Pierre Saboural, Frédéric Chaubet 1) Amination du fucoïdan 2) Fixation du chélatant
- 36. RanaBENAZZOUNA Fucoïdan TEP CQ: Nadia Bouchemal: Laboratory CSPBAT, Paris 13 University, Sorbonne Paris Cité, CNRS UMR 7244, SBMB team, F-93017, Bobigny, France
- 37. RanaBENAZZOUNA Fucoïdan Marquage: simple, pas de chimie complexe - 100 nmoles d’ Asphy-Nodaga - Tampon acétate pH 4.5 - Elution directe dans le flacon CQ : HPLC, ES, Nitrate de Na PRC = 89% sans purification post-marquage pH : 4 TEP Incubation 5 minutes à température ambiante
- 41. RadioMedix développement de kit GalioMedix® : pour préparer 68 Ga-DOTATATE AAA Kits d’analogues de la somatostatine à marquer au 68 Ga Kit lyophilisé renfermant le peptide Kit lyophilisé renfermant le peptide Elution du 68Ga à partir du générateur Chauffage 10’ à 95 °C CQ 68 Ga-DOTATATE prêt à être administré Conclusion et perspectives Kit 68 Ga-Fucoïdan ?
Notas do Editor
- Plan de travail François: faire une petite présentation sur le marquage au gallium essentiellement le Fuco-gallium aussi intérêt en clinique. Parler de l&apos;expérience de Bichat dans ce domaine. Titre proposé par François &quot;Intérêts du marquage au Gallium-68 pour la TEP. Application au Fucoïdane&quot;. Parler de l&apos;article de Fuco gallié Parler du marquage spécifique par ajout de chélatant, choix du chélatant, nécessité d&apos;aminer le fucoïdan Marquage simple ... Imagerie, modèle d&apos;endocardite...
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Ajouter ici les propriétés physiques d’émission du gallium 68 A vérifier avec Sébastien
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Ajouter le point 0-0
- La production du germanium se fait par cyclotron, essentiellement en bombardant des cibles de zinc naturel. En plus du germanium, d’autres composés sont générés dont certains se retrouvent en faibles quantités après les opérations de purification. Entre autres on cite le cuivre, le zinc, l’aluminium et le fer. Tous risquent de constituer un problème au moment du marquage. C’est ce qu’on va voir dans le paragraphe suivant ..
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Le but final étant d’avoir un bioconjugué qui reconnaît une cible à caractériser et qui émet des positons. Donc il faut fixer le gallium au niveau du vecteur. La question est comment cette fixation pourrait être stable in vivo sachant qu’il existe une protéine de transport du fer très affine au gallium qui est la transferrine. Il existe des cages, des macrocycles ou des chélatants qui sont capables de fixer le gallium de façon très stable résistant même à la transchélation ou démétallation ou décomplexation du gallium provoquée par la transferrine in vivo.
- La première difficulté de marquage au gallium 68 est l’existence dans l’éluat d’impuretés métalliques qui entrent en compétition avec le 68Ga et l’empêche de se fixer
- La deuxième difficulté du marquage c’est que le gallium ne se fixe que sous forme Ga3+ et cette forme n’existe qu’à des pH acides. A delà de pH 3, on commence à avoir des formes hydrolysées de gallium qui ne peuvent pas se fixer au niveau du chélatant. Qui dit pH acide, dit instabilité des vecteurs. Donc le pH du marquage est un compromis entre la stabilité du vecteur et la stabilité de la forme 3+ du gallium, la seule capable de se fixer au niveau du NODAGA. Plus on s’approche de 3 mieux c’est.
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Cette étude a pour but d’étudier les performances diagnostiques de la TEP/TDM au 68Ga- DOTANOC dans les tumeurs endocrines gastro-entéro-pancréatiques (TE-GEP, en la comparant prospectivement aux autres techniques utilisées en routine clinique chez des patients porteurs de ces tumeurs: scintigraphie à l’OctréoScan® avec TEMP/TDM systématique, TDM multiphase, ± IRM ou échoendoscopie selon l’atteinte d’organe. L’impact thérapeutique et la tolérance de cet examen seront aussi évalués. Les patients seront recrutés à Nantes et à Angers, via les réseaux RENATEN et OncoPL. Les résultats attendus sont une confirmation de la supériorité de la TEP au 68Ga-DOTANOC par rapport à la scintigraphie à l’OctréoScan®, avec potentiellement un impact sur la prise en charge thérapeutique des patients. De tels résultats pourraient conduire à substituer dans un futur proche, ce nouvel examen à la scintigraphie à l’OctréoScan® dans l’exploration des TE-GEP.
- Qui dit classe C, dit limitation de personnel, règles d’habillage stricte et nécessite d’avoir une qualification des locaux, présence de sas d’entrée,…
- Remercier l’équipe de Nantes M. Alain Faivre Chauvet Mme Evelyne Cerato Mme Aurore.Rauscher Mme Ansquer Conseils de Valérie Nataf L’équipe médicale de Beaujon L’équipe médicale de Bichat Mme Dominique Le Guludec
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- 1- Qu’est ce que le Fucoïdan? Structure, intérêt en biologie, 2- Modèle d’endocardite infectieuse, expliquer le mécanisme d’action … 3- parler de ce qui a été fait en scintigraphie (application dans 4- TEP? Nécessité de fonctionnaliser le fucoïdan pour une application en TEP (amination puis fixation du NODAGA, expliquer le choix). Manip de stabilité in vitro?? Fuco fonctionnalisé vs fuco non fonctionnalisé. 5- Marquage au gallium 68, méthode simple, montrer les résultats du rapport de marquage 6- injection chez un rat endocardite 7- Images du rat
- Parmi les polysaccharides sulfatés capables d&apos;interagir avec la P-sélectine, les fucoïdanes sont une famille de polysaccharides principalement extrait d&apos;algues brunes contenant un pourcentage conséquent de L-fucose et de groupement ester sulfate
- Cette P-sélectine est un glycoprotéine transmembranaire qui n’est pas exprimée en situation physiologique, mais qui est surexprimée en cas de maladie thrombotique ou inflammatoire. On la retrouve dans ce cas à la surface des cellules endothéliales et des plaquettes. Et elle est reconnu naturellement par la PSGL-1 qui est exprimée à la surface des leucocytes. Pour comprendre pourquoi le fucoïdan est également un ligand de cette P-sélectine il suffit … Cellule de gauche: monocyte; droite: granuclocyte Elle appartient à une famille de trois glycoprotéines de surface : la E-, la L- et la Psélectine [19, 20] ; E pour endothélium, L pour leucocyte et P pour plaquette. Les sélectines sont des protéines transmembranaires (Figure 8). Elles possèdent toutes une longue partie extra-membranaire fortement glycosylée, composée d&apos;un domaine lectine calcium-dépendant à l’extrémité N-terminal (en vert), d&apos;un domaine EGF-like (epidermal growth factor, en bleu) et de deux à neuf domaines CR (consensus repeat, en jaune), auxquels s&apos;ajoutent une région transmembranaire (en rouge) et une courte partie cytoplasmique (en violet). La P-sélectine est exprimée sur l&apos;endothélium et sur les plaquettes de façon inductible. La P-sélectine est stockée dans les α-granules et les corps de Weibel-Palade des plaquettes et des cellules endothéliales [22, 23]. Ces granules de stockage contiennent une variété de substances libérées ou exprimées à la surface des cellules après leur activation. La P-sélectine est rapidement exprimée à la surface des cellules lors de la fusion de ces granules avec la membrane. Cette fusion est causée par des agonistes tels que la thrombine, l&apos;histamine ou pour les plaquettes par l&apos;adénosine diphosphate (ADP). La P-sélectine, comme d&apos;autres constituants des granules (par exemple le facteur von Willebrand), est détectable à la surface des cellules après seulement quelques minutes. Le rôle de la P-sélectine dans l&apos;athérosclérose, la thrombose et l&apos;inflammation vasculaire: Le but de l&apos;inflammation est le recrutement rapide des leucocytes au niveau de la lésion. Il est reconnu depuis longtemps que la première réponse à un stimulus inflammatoire ou à un dommage tissulaire est le &quot;rolling&quot; des leucocytes le long de la paroi vasculaire à proximité de la lésion, phénomène principalement médié par les sélectines [23, 24], avant leur transmigration subséquente à l&apos;intérieur des tissus jusqu’au site inflammatoire. La P-sélectine exprimée sur l&apos;endothélium joue un rôle important dans le recrutement des neutrophiles et des monocytes [25, 26]. La P-sélectine exprimée à haute densité sur les plaquettes activées participe aussi au recrutement des leucocytes et contribue au développement de la lésion athérosclérotique. La P-sélectine plaquettaire est, par exemple, impliquée dans le recrutement de microparticules dérivées de monocytes, qui favorisent la formation de thrombus. L&apos;expression de la P-sélectine sur les plaquettes incorporées dans les thrombus a été étudiée après induction d’une lésion [34]. La P-sélectine apparaît d&apos;abord sur les plaquettes à l&apos;interface entre la paroi vasculaire et le thrombus puis à travers tout le thrombus, de la paroi vasculaire à la surface luminale du thrombus. Lorsque la densité de P-sélectine sur la surface luminale du thrombus est suffisante, on peut y observer l&apos;adhésion des leucocytes. Les multiples rôles de la P-sélectine dans l&apos;athérosclérose, la thrombose et l&apos;inflammation vasculaire en font donc une cible d&apos;intérêt dans le cadre du développement d&apos;agents de contraste pour l&apos;imagerie moléculaire de ces pathologies cardiovasculaires.
- Pour comprendre pourquoi le fucoïdan est un ligand de la P-sélectine, il suffit d’observer de plus près la structure du ligand naturel de la P-sélectine : La PSGL-1 ou P sélectine glycoprotéine 1. dont la structure représente des groupements appelés Sialyl Lewis X qui constituent les sites de reconnaissance et de liaison à la P-sélectine.. Et il se trouve ques tructurellement, le fucoïdan est un mimétique du sialyl Lewis X donc il est capable à son tour de se fixer au niveau de la P-sélectine. Des études d’affinité effectuées par Laure Bachelet et collaborateurs a démontré une grande affinité du fucoïdan pour cette cible. Donc il suffit de fixer un radioélément dont les émissions peuvent être détectées par une caméra, pour pouvoir observer ces phénomènes inflammatoires et thrombotiques en médecine nucléaire, tout en espérant qu’il soit stable il vivo..
- C’est ce qui a été fait par Dr. François Rouzet et Collaborateurs pour la preuve de concept du fucoïdan en SPECT. Ici on voit une fixation au niveau de coupes de valves aortiques suite à l’injection de fucoïdan marqué au technétium 99m chez un model d’endocardite infectieuse chez le rat. La localisation du traceur sur les végétations a été confirmée par Autoradiographie Et la co-localisation de la P-sélectine et 99mTc-fuco ont pu être vérifiées en immunohistochimie grâce à l’utilisation d’anticorps anti P-sélectine marqués à la péroxydase). Une fois la preuve de concept effectuée, le but étant dedévelopper un meilleur outil diagnostic. Meilleur traceur en matière de résolution, d’affinité et offrant la possibilité de quantifier et donc de faire du suivi thérapeutique dans le cadre de pathologies thrombotiques et inflammatoires.
- D’où les travaux qui ont été réalisées récemment d’abord par l’équipe de Paris 13.
- Parler du marquage TEP - fonctionnalisation
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Plan de travail Introduction : intérêt de la TEP Avantages du 68Ga par rapport à d’autres émetteurs de positons: période,
- Cependant, depuis la commercialisation du générateur GMP disponible sur le marché depuis fin 2014, il est possible de procéder par élution fractionnée voire par élution directe
- Conclusion Ajouter une image des kits technétiés Direction vers les kits galliés?? Kit de Fuco gallié en clinique?