GUIA DE PRACTICA DE BIOQUIMICA I

BIOQUIMICA I 1 Rubén Díaz Cabanillas
UNIVERSIDAD CATÓLICA LOS ÁNGELES DE CHIMBOTE
ESCUELA PROFESIONAL DE
FARMACIA Y BIOQUÍMICA
GUÍA PRACTICA DE BIOQUÍMICA I
Q.F: LALO RUBÉN DÍAZ CABANILLAS
CHIMBOTE – PERÚ
2011
NOMBRE:………………………………………………………………..

Q.F: LALO RUBÉN DÍAZ CABANILLAS

INDICE
01.-IDENTIFICACIÓN DE BIOMOLECULAS-------------------------------------------4
02.-PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS
DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO------------------------------------6
03.-FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE REACCIONES
ENZIMATICAS: CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO CONCENTRACIÓN DE
LA ENZIMA, COFACTORES, pH, TEMPERATURA, TIEMPO.--------------------9
04.-DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SANGRE----------------------------------12
05.-INDICE DE GLICEMIA-------------------------------------------------------------------16
06.-REGULACIÓN HORMONAL DE LA GLUCOSA SANGUÍNEA---------------19
07.-CADENA RESPIRATORIA Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA----------------23
08.-DIGESTIÓN DE LIPIDOS: EMULSIFICACION DE LAS GRASAS Y ACCIÓN
DE LA LIPASA PANCREÁTICA.------------------------------------------------------------26
09.-DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS EN SUERO --------------------------29
10.-DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SANGRE ----------------------------32
11.-DETERMINACIÓN DE UREA EN SANGRE ----------------------------------------36
12.-DETERMINACIÓN DE ACIDO ÚRICO EN SANGRE----------------------------39

PRÁCTICA Nº 01
IDENTIFICACIÓN DE BIOMOLECULAS
OBJETIVOS . En esta práctica se realizarán reacciones químicas y pruebas
características para identificar la presencia de una o varias biomoléculas en una mezcla y
para cuantificar alguna de ellas.
1.- Identificación de glúcidos con poder reductor
Sobre la mesa hay dos soluciones de glúcidos: GLÚCIDO I y GLÚCIDO II. Hay que
determinar si son reductores.
Procedimiento:
1. Poner en un tubo de ensayo 2 ml de glúcido I y en otro tubo 2ml de glúcido II.
2. Añadir a cada tubo 0.5 mL de Fehling A y 0.5 mL de Fehling B.
3. Calentar a la llama.
El reactivo de Fehling consta de :
-Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O
-Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disuletos en agua
Después del Fundamento teórico responder las siguientes preguntas:
Cuestiones
1. ¿Cúal o cúales son los azúcares reductores?
2. ¿Quién se oxida y quién se reduce en la reacción?
3. ¿Para qué sirven el tartrato Na-K y el calor?
4. ¿Que resultado daría la reacción de Fehling con glucosa? ¿y con sacarosa?
2.- Identificación de polisacáridos: identificación de almidón mediante la prueba del
Lugol.Sobre la mesa hay dos soluciones, solución A y solución B. Hay que identificar cuál
de ellas tiene almidón.
Procedimiento:
1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de la solución A y en otro 2 mL de la solución B.
2. Añadir a cada uno de los tubos de ensayo 1 gota de Lugol (solución acuosa de iodo y
ioduro potásico). Observar el resultado.
3. Calentar a la llama el tubo que contiene almidón (teñido de azul con I), hasta que
desaparezca el color azul.
4. Enfriar en el grifo y observar la aparición de nuevo de color azul.
Después del Fundamento teórico responder las siguientes preguntas:
Cuestiones
1. ¿Cuál de los dos soluciones contiene almidón?
2. ¿El almidón daría positiva la reacción de Fehling?
3. ¿La celulosa daría positiva la prueba del Lugol?
4. ¿Porqué desaparece el color azul al calentar el tubo que contiene almidón, que tipo de
reacción se produce, química o física?
5. ¿El azul que aparece tras calentar y enfriar es igual de intenso? ¿Por qué?

II.RESULTADOS
III.DISCUSIÓN:
IV.CONCLUSIONES
V.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 02
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS
DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO
I. INTRODUCCION:
El punto isoeléctrico es la concentración de iones hidrogeno en el cual la proteína
es eléctricamente neutra, porque el número total de cargas positivas es igual al
número total de cargas negativas contenidas en la proteína.
Cada proteína tiene un determinado punto Isoeléctrico (PI).
Cuando una proteína se encuentra en diferentes soluciones que tienen valores de pH
menores, igual o mayores al PI, la proteína sufre variaciones en la constitución de
sus grupos químicos, produciéndose en consecuencia variaciones en su estructura
terciaria o cuaternaria y por lo tanto en su función biológica.
A parte de otras propiedades que presentan las proteínas cuando se encuentran en
una solución que tiene pH igual al PI, algunas proteínas son difícilmente solubles y
precipitan. Aprovechando este comportamiento, se puede determinar el PI de una
proteína observando los cambios de solubilidad que se producen cuando la proteína
se encuentra en varias soluciones que tienen pH conocidos.
En la presente práctica se determinara el PI de una proteína relacionando la
solubilidad mínima con el pH de la solución en que ella se produce, con el fin de
contribuir a establecer la importancia de conocer las propiedades de las proteínas.
II. REACTIVOS:
- Ac. Acético 1N
- Sol. de caseína en acetato de sodio 0.1 N.
- Sol .de Fenoftaleína
-NaOH 10%
III. PROCEDIMIENTO:
- Marcar una serie de tubos de ensayo del 1 al 9.
- En el tubo 1 medir 3.2 ml. de ácido acético 1 N y 6.8 ml. de agua destilada.
- Medir 5 ml. de agua destilada en cada uno de los otros 8 tubos.
- Sacar 5 ml. de solución del tubo 1 y agregarlos al tubo 2 .
MEZCLAR
 Sacar 5 ml. del tubo 2 y transferir al tubo 3, etc. continuando del mismo modo
hasta completar la serie.
 En el tubo 9 una vez efectuada la mezcla se saca 5 ml. de solución que se
elimina.
 Agregar rápidamente 1 ml de solución de caseína en acetato de sodio 0.1 N a
cada tubo. Mezclar al instante por inversión
 Observar el efecto inmediato que se produce en la solubilidad de la proteína en
los diferentes tubos.
 Anotar en el cuadro que sigue:
 Observar después de 30 minutos. Anotar en el cuadro el pH de cada tubo.(ver
nota al final).

 Calentar ligeramente cada uno de los tubos y apreciar el efecto sobre la
solubilidad. Anotar.
 Agregar una gota de Fenoftaleína. Mezclar.
 Agregar NaOH al 10% gota a gota, agitando, hasta la aparición color
rosado y observar el efecto sobre la solubilidad. Anotar:
# de tubos 1 2 3 4 5 6 7
oo
9
pH de cada Tubo
Enturbiamiento mezclar
Enturbiamiento o ppdo A 30'
Solubil. después de calentar
Solubil. después de agregar
NaOH 10 %
Emplear los símbolos siguientes: O = no cambia
+ = Opalescencia
x = Ppdo.
Determinar el tubo que presenta el máximo de precipitación lo cual se produciera
en el tubo que tiene un pH próximo a la solubilidad mínima de la proteína.
Interpretar los resultados e indicar el PI aproximado de la proteína.
NOTA:
El pH de las soluciones de los diferentes tubos debe traerse calculado a la Reunión
de Laboratorio y se obtiene por aplicación de la Ecuación de Henderson -
Hasselbach:
pH = pK + Log. Ácido
Sal
pK Ac. Acético = 4.7
La concentración de sal es 1 ml. de acetato 0.1 N en cada caso.
La concentración de ácido es 1.6 ml de ácido N en el tubo 1 (1.6ml.
lN=16ml 0.1 N)
En el tubo 2, la concentración de ácido es 8 ml De 0.1N etc. Así en el tubo 3, por
ejemplo:
pH = pK + Log. 4
1
= 4.7 – 0.6 = 4.1
IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN
VI.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 03
FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE REACCIONES
ENZIMATICAS: CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO CONCENTRACIÓN DE
LA ENZIMA, COFACTORES, pH, TEMPERATURA, TIEMPO.
I. INTRODUCCION:
En general todas las enzimas, cualquiera sea el tipo de reacción en que intervenga,
presentan características comunes, en cuanto a los factores que participan
favoreciendo, retardando o impidiendo su actividad. Dichos factores se investigan
teniendo en cuenta la velocidad de acción enzimática sobre un sustrato adecuado y
en determinadas condiciones.
Tomando una determinada enzima como patrón es posible tener una idea más o
menos clara de la influencia de los factores ( tiempo, temperatura, concentración de
enzima, pH, etc.); sobre la serie infinita de enzima que se conocen este patrón
general como se comprenderá varía en forma característica para cada enzima en
particular.
Para estudiar cada uno de estos factores es necesario que los otros permanezcan
constantes de tal manera que la investigación del factor variable no se vea afectado
por la variación que puedan sufrir los otros.
El objetivo de esta practica es estudiar algunos de los factores que inciden en la
velocidad de una reacción enzimatica, utilizando como ejemplo la amilasa salival,
controlando la actividad enzimatica por medio del sustrato no transformado o por
los productos de la reacción formados ( azúcar reductor ).
II. REACTIVOS:
- Solución de almidón al 1%. - Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6.
- Buffer acetato 0.1 M pH 4.6. - Buffer borato 0.1 M pH 9.
- Solución de cloruro de sodio al 0.2 %. - Amilasa salival al 0.25 % dializada-
- Acido clorhídrico 0.05 N.
III. PROCEDIMIENTO:
COMPONENTES / TUBOS I II III IV V . VI VII VIII.
Sol. de almidón 1 % ml. 1 1 1 1 1 2 1 1
Buffer Acetato 0.1M pH 4.6 — — 5 — — — — —
Buffer Fosfato 0.1M pH 6.6 5 5 — 5 5 5 5
Buffer Borato 0.1M pH 9 — — — — 5 — — —
Sol. de NaCl 0.2% 1.4 — 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4
Agua destilada 2.6 3.4 2.0 2.6 2.0 2.0 1.0 2.0
MEZCLAR, colocar los tubos del I al VI al baño de agua a 37° C, por 5'; el tubo VII
Colocar en baño helado entre 0 °C. y el tubo VIII en baño de 100 °C. a igual tiempo.
Agregar la soluc. Enzimática: 0.0 0.6 0.6 0.2 0.6 0.6 0.6 0.6
MEZCLAR, continuar la incubación, computar el tiempo desde el momento que el
preparado enzima tico fue agregado.

Los controles de la actividad enzimatica se realizaran a los 10 y 30 minutos de acuerdo a
los sistemas que a continuación se presentan.
Control de la actividad Enzimática:
Control del Sustrato no transformado.- Se realiza por la reacción con Iodo.
Con este objeto armar dos series paralelas de tubos marcados de igual manera que los
correspondientes sistemas de incubación enzimatica, una de las series se marcará además
con 10 minutos(AI) y la otra con 30 minutos (AII)
AI a los 10 minutos I II III IV V VI VII VII
A2 a los 30 minutos I - - - - VI VII -
Agregar a ambas series
HCL 0.05N 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml.
1. Control de la actividad enzimática a los 10 minutos de la incubación
Utilizar la serie de tubos control correspondiente a los 10 minutos:
a. Cumplidos los primeros 10 minutos de incubación de los respectivos sistemas de
incubación transferir 0.5 ml. del incubado a los correspondientes tubos control,
mezclar.
b. Agregar a cada tubo control 0.5 ml. de solución Iodada y mezclar.
c. Observar y anotar los resultados de las reacciones valorando en forma de cruces:
Una disminución ligera del color respecto al patrón 1= + otra algo mas intensa =
++, etc., si no hubiera cambio alguno = O.
2. Control de la actividad enzimática a los 30 minutos de la incubaciuón
Utilizar la serie de tubos control correspondiente a los 30 minutos
a. Cumplidos los primeros 30 minutos de incubación de los respectivos sistemas de
incubación transferir 0.5 mil del incubado a los correspondientes tubos control,
mezclar.
b. y c. Son exactamente iguales a los 1 (b) y (c).
IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN
VI. CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 04
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SANGRE
I. INTRODUCCON:
Los hidratos de carbono desempeñan en los organismos vivos diversas funciones.
Los animales los emplean de preferencia como combustible para producir energía;
cuando se encuentra en exceso se almacena como un polisacárido el glucógeno o
los convierten en grasa para ser utilizados en el momento oportuno.
Luego de pasar por proceso digestivo y de absorción los monosacaridos sobretodo
la glucosa pasa al torrente sanguíneo para luego ser utilizada en forma adecuada por
el organismo por lo tanto es necesario llevar un control de los niveles de glucosa en
sangre ya que probables desviaciones de los rangos normales indicaría alguna
alteración en el organismo.
En la presente práctica se determinara la glicemia según el método enzimático de
la glucosa oxidasa.
II. PROCEDIMIENTO:
MÉTODO ENZIMATICO
Significaría Clínica.
La patología más común relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la
diabetes mellitus. El diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos, tienen por
objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los síntomas resultantes de la
hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado.
Dado que existen múltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en
cacln caso la condición fisiológica y/o la patología en y/o paciento en cuestión.
Fundamento Del método
La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa (GOD; D-glucosa oxígeno
1-óxidorreductasa; a ácido glucónico y agua oxigenada); el agua oxigenada en presencia de
peroxidasa (POD; donador: hidrógeno-peróxido óxidorreductasa); produce la copulación
oxidativa del fenol con la 4-amino fenazona (4-AF) dando lugar a la formación del fenol
con la 4-aminofenazona(4-AF) dando lugar a la formación de un cromógeno rojo-cereza
con absorbancia máxima a 505 nm. El esquema reaccional es el sgte.:
GOD
GOD Glucosa +O2 + H2O --------> Ácido glucónico + H2O2
POD
2 H2O2 + 4-AF + fenol ----------> 4-(p-benzoquinona-monoimino)-fenazona + 4 H2O
Reactivos Provistos:
 Standard: sol. de glucosa 1 g/1.
 GOD/POD: sol. de glucosa oxidasa (1000 U/ml) y peroxidasa (120 U/ml)
 Reactivo 4-AF.: sol. de 4-aminofenazona 25 mM en Buffers Tris 0.92 M.
 Reactivo Fenol: sol. de fenol 55 mol/L.
 Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, colocar en una probeta 500
partes de agua destilada, 50 partes de Reactivo de 4-AF, 50 partes de Reactivo de Fenol y
llevar a 1000 partes con agua destilada. Agregar 3 partes de GOD/POD previamente
homogenizadas. Mezclar por inversión, sin agitar. Rotular y fechar.

Pueden prepararse distintas cantidades respetando las proporciones antedichas. Es
importante además, respetar el orden de agregado de los reactivos y asegurar una perfecta
homogenización de los mismos, a fin de que el Reactivo Fenol no deteriore el Reactivo de
Trabajo. Mantener en refrigerador (2-10°C) y en frasco color caramelo es estable un mes a
partir de la fecha de su preparación.
Muestra
A) Recolección: se debe obtener suero o plasma de la manera usual. También es posible
realizar la determinación en líquido cefalorraquídeo.
B) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el uso de
Anticoagulante G de Wiener lab. para su obtención
C) Sustancias interferentes conocidas: los sueros o plasmas con hemolisis visible o intensa
deben ser desproteinizados. Las muestras de líquido cefalorraquídeo hemorrágicas
deben ser centrifugadas antes de procesar. No se observan interferencias por:
bilirrubina hasta 200 mg/1, ácido ascórbico hasta 75 mg/1, ácido úrico hasta 200 mg/1,
hemolisis ligera.
D) Estabilidad e instrucción de almacenamiento: los hematíes y los leucocitos son los
responsables de la destrucción enzimática de la glucosa sanguínea, siendo máxima a
37°C, razón por la cual debe de centrifugarse la sangre dentro de las dos horas
posteriores a la extracción, hasta obtener un sobrenadante límpido y transferir a otro
tuvo para su conservación
III. PROCEDIMIENTO:
En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D
B S D
Suero o Patrón -- 10 ul --
Muestra -- -- 10 ul
Reactivo de Trabajo 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Incubar 10 minutos en baño de agua a 37 ° C. Luego leer en Espectrofotómetro a
505 nm. llevando a cero con el Blanco.
El color de reacción final es estable 1 hora por lo que la absorbancia debe ser leída
dentro de ese lapso.
Glucosa mg/dl = D x f. f = S
dlmg /100
TAREAS

1.-Elabore un esquema del mecanismo de liberación de la insulina en las células beta
del páncreas estimulado por glucosa y glibenclamida
.
2.-Elabore un esquema del mecanismo de interacción de la insulina con su receptor y el
mensaje a los GLUT-4.
IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN
VI.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 05
INDICE DE GLICEMIA
I. INTRODUCCION:
La prueba de lía tolerancia a la glucosa es un test que permite establecer la
respuesta insulínica a un estímulo fisiológico por glucosa. La rápida absorción de
glucosa desencadena la liberación de insulina preformada en las células beta del
páncreas, en cantidad suficiente para cubrir las necesidades que aumenta k
captación de la glucosa por los tejidos y especialmente por el hígado en donde $**
utiliza y almacena como glucógeno.
La ingesta de glucosa va seguida de un aumento transitorio en el nivel de la
glicemia debido a que la velocidad de absorción intestinal excede a la capacidad del
hígado y los tejidos para su utilización. En sujetos normales el nivel máximo de
glucosa después de la absorción rara vez pasa de 150 mg/ dl. El organismo vuelve
ajustar el nivel de la glicemia a los valores del estado de ayuno con un período de 1
hora y media a dos horas y media de iniciada la prueba.
En condiciones anormales de utilización de glucosa, la elevación y reajuste de ¡a
glicemia se aparta del patrón normal teniendo estas variaciones valor diagnóstico y
prognóstico. A través de la prueba, la orina de personas 'aparentemente sanas se
presentan siempre libres de glucosa. La desventaja de esta prueba es que incluye un
factor que no guarda relación con la respuesta insulínica, la velocidad de absorción
a partir del tubo digestivo.
La finalidad del trabajo experimental es establecer la capacidad del sistema
(organismo) para manejar una dosis fija de glucosa administrada por vía oral eu
condiciones standard.
Objetivos:
- Elaborar una curva de tolerancia a la glucosa.
- Establecer las relaciones causa y efecto entre los datos de glucosa en sangre y
orina a los 60 y 120 minutos
- Demostrar el funcionamiento del páncreas con la respuesta insulínica.
II. REACTIVOS:
- Reactivo de Trabajo de Glucosa enzimática
- Solución de glucosa al 25 %
III. PROCEDIMIENTO:
El paciente debe ser preparado para esta prueba, indicándole una dieta diaria que
contenga 300 mg de hidratos de carbono durante los tres días anteriores de la
prueba.
En niños el período de ayuno varía; así en niños menores de cuatro meses hasta un
ayuno de 4 horas, entre cuatro y ocho meses hacen falta 6 horas de ayuno y entre
8 meses y 2 años ocho horas.
Obtener una muestra de sangre en ayunas.
Administrar por vía oral una solución de 25 por 100 de glucosa , de tal manera
que el paciente ingiere en total 1,75 g de glucosa por kilogramo de peso ( no es
necesario dar más de 100 g en total, si se desea, puede mejorarse el sabor de la
solución con jugo de limón.

Extraer muestra de sangre a los 30, 60, 90 y 120 minutos. Colectar las muestras
de orina a los 60 y 120 minutos.
Determinar la concentración de glucosa en cada una de las muestras de sangre
obtenidas.
En un papel milimetrado, graficar los resultados obtenidos de glicemia en cada
muestra versus tiempo.
Durante la prueba el paciente debe permanecer en estado de reposo y no debe
fumar ni tomar bebidas alcohólicas.
El índice de glicemia puede ser modificada por el ejercicio, fiebre, enfermedades
agudas y estados pos-traumáticos.
Valores normales de referencia
Suero o plasma: 70-110 mg/dl (Enzimático)
Determinación
Tiempo
Basal
minutos
º Control
30 minutos
2º Control
60 minutos
3º Control
120 minutos
Glucosa en
sangre (mg/dl
Esquematizar en un papel milimetrado y explicar los mecanismos de cada caso
IV.RESULTADOS
V.DISCUSIÓN

VI. CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 06
REGULACIÓN HORMONAL DE LA GLUCOSA SANGUÍNEA
I. INTRODUCCION:
La concentración de glucosa en sangre es la resultante de dos factores: Tasa de
llegada de glucosa a la sangre b. Tasa de salida de glucosa de la sangre. La glucosa
sanguínea puede provenir directamente de diversas fuentes: glucógeno hepático,
aminoácidos otros carbohidratos y de la glucosa absorbida por el intestino.
En condiciones normales en ayunas, la glicemia es muy constante y tiene en el
hombre tiene un valor entre 70 a 110 mg /dL. Siendo en la sangre arterial mayor
que en la venosa. La glicemia se eleva después de la ingestión de un alimento rico
en hidratos de carbono para luego descender poco a poco de modo que una hora y
media o dos horas des pues de la ingestión vuelve el nivel de ayunas.
La glucosa de la sangre es distribuida a los tejidos pues es utilizada por todas las
células para funciones más especializadas por ejemplo glucogenesis lipogenesis y
otras. Para poder afrontar con eficiencia las variaciones mas o menos bruscas que
pueden afectar a la glucosa sanguínea, el organismo dispone de mecanismos
reguladores que de diferentes maneras aceleran o retardan la entrega o el retiro de
glucosa desde o hacia los tejidos .Los mecanismo reguladores son nerviosos y
endocrinos y es muy posible que los primeros actúan en realidad mediante
modificaciones en la entrega de hormonas por las glándulas de secreción interna de
modo que el mantenimiento de la glicemia en niveles normales depende del
equilibrio entre la producción y la utilización de la glucosa sanguínea cuya
sensibilidad esta regida en medida importante por el balance entre la insulina por un
lado y las hormonas suprarrenales y de la adenohipofisis, por el otro.
La insulina ejerce profundos efectos sobre el metabolismo de la glucosa y otros
nutrientes. Esta hormona es producida por las células beta de los islotes de
Largerhans del páncreas y es secretada en respuesta directa al incremento de
glucosa en la sangre. El efecto más importante de una deficiencia insulínica es el de
un niel sanguíneo de glucosa extremadamente elevado (híperglicemia), una
excesiva excreción de glucosa por la orina (glucosuria) y un reducido nivel de
glucógeno en el hígado. La administración de insulina va seguida de descenso de la
glicemia (hipoglicemia) cuya magnitud depende de la dosis administrada; el efecto
se debe fundamentalmente a que la hormona favorece la formación de glucógeno en
el hígado y en el músculo a la vez que acelera la oxidación de la glucosa en
diferentes tejidos. La insulina también favorece la conversión de los hidratos de
carbono en ácidos grasos y por otro lado inhibe la gluconeogenesis a partir de los
aminoácidos. Se explica así que la falta de insulina determina una hiperglicemia
que es el significado fundamental del cuadro denominado diabetes.
La adrenalina, hormona secretada por la médula suprarrenal, tiene acción
hiperglicemiante; ello se debe a que favorece la conversión de glucógeno en
glucosa (glucogenólisis) en el hígado, además al actuar en el músculo, por la
ausencia en este de la glucosa 6-fosfatasa, la glucólisis se realiza con la formación
de glucosa y glucógeno en la célula hepática por los mecanismos
gluconeogéneticos. El efecto glucogenolítico de la adrenalina es debido a que activa
a la fosforilasa.

La secreción de insulina y adrenalina parecen estar condicionadas en forma
importante por el nivel de glicemia, de manera que cada vez que se eleva la
glicemia se produce más insulina que tiende a aminorarla por otra parte, se aparece
hipoglicemia se segrega más adrenalina (y glucagon) que aceleran la regulación que
en forma coordinada debe realizar hígado.
El objetivo de la práctica es establecer la técnica de dosaje de glucosa en su sangre
y observar las variaciones de la glicemia como consecuencia de la administración
de insulina y adrenalina.
II. REACTIVOS:
- Kid de Glucosa enzimática
III. PROCEDIMIENTO:
A) Efecto de la insulina sobre la Glicemia
 Animales de experimentación: conejos, que hayan sido alimentados entre
6-8 horas de iniciar el experimento. Es necesario determinar el peso de los
animales con la finalidad de calcular la cantidad de insulina a inyectar. (El
peso mínimo debe ser de 2,5 Kg)
 Insulina: se utiliza la forma cristalizada libre de combinaciones que retardan
su acción. La dosis a inyectar es de 1 UI por Kg. de peso corporal.
 Una jeringa de tuberculina la cual facilita la medida de solución de insulina.
PROCEDIMIENTO
a) Extraer una primera muestra de la vena marginal del lóbulo posterior de la oreja
con aguja # 21 en capilares heparinizados y sellar el extremo con plastilina.
b) Inyectar por vía subcutánea la cantidad calculada de insulina.
c) Luego extraer muestra de sangre a los 15, 30 y 60 minutos, lo que hace un total
de muestras posteriores a la inyección de insulina.
d) En cada una de las citadas muestras realizar la determinación de glucosa.
e) Con los resultados obtenidos construir una gráfica tomando las variaciones de la
glicemia en relación con el tiempo.
B.- EFECTO DE LAADRENALINA SOBRE LA GLICEMIA.-
- Animales de experimentación: conejos, bien alimentados se determinará el peso
corporal de estos animales para calcular la cantidad de adrenalina a inyectar.
- Solución de adrenalina: La dosis que debe inyectarse es de 0.025 mg. por cada
1000 g de peso corporal, o sea 0.25 ml. de la solución.
PROCEDIMIENTO
a) Extraer una primera muestra de la vena marginal del lóbulo posterior de la oreja
con aguja # 21 en capilares heparinizados y sellar el extremo con plastilina.
b) Inyectar por vía subcutánea la cantidad adecuada de adrenalina según el peso del
animal.
c) Luego extraer muestras de sangre a los 15 , 30 y 60 minutos los que hacen tres
nuestras posteriores a la adrenalina.
d) En cada una de las citadas muestras realizar los dosajes de glucosa según
método enzimático.

e) Si es posible obtener orina, realizar la investigación de glucosa en ella.
f) Con los resultados obtenidos así obtenidos construir una gráfica tomando las
variaciones de la glicemia en relación con el tiempo. Comparar los resultados
C- DETERMINACIÓN DE GLUCOSA
Método Enzimático: Utilizar suero o plasma y seguir los mismos pasos que la práctica
anterior.
TAREAS
1.-Esqematizar la glucogénesis y glucogenólisis .
2. Esquematizar los mecanismos de acción de la insulina y adrenalina con sus respectivos
efectos en la glicemia.

IV.RESULTADOS
V.DISCUSIÓN
VI.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 07
Teoria Quimiosmótica
1.-Esquematizar y explicar según la teoría quimiosmótica la cadena transportadora de
electrones( CTE) y fosforilación oxidativa (FO).
2.-Explicar los mecanismo de todas las sustancias que modifica la CTE y FO

Cuestiones Bioenergética.Desarrollar el cuestionario
1. ¿Cómo se puede explicar, de acuerdo con la teoría quimiosmótica, que el 2,4-
dinitrofenol estimule indefinidamente el consumo de oxígeno en una suspensión de
mitocondrias?. ¿Por qué la inyección de 2,4-dinitrofenol a una rata provoca el aumento
inmediato de la temperatura corporal?.
2. Si añadimos oligomicina a una suspensión de mitocondrias activas se observa una
disminución del transporte electrónico y de la sítesis de ATP. Si después de este
tratamiento con oligomicina se añade 2,4-dinitrofenol, se produce un aumento de la
velocidad del transporte de electrones sin variación en la síntesis de ATP. ¿Qué inhibe
la oligomicina?. Da una explicación en términos de la teoría quimiosmótica.
3. El hongo Bipolaris maydis ocasiona grandes pérdidas en agricultura. Esta enfermedad
que causa en las plantas es debida a una toxina que hace que únicamente la
membranainterna mitocondrial resulte permeable a iones y a moléculas pequeñas.
a. ¿qué proceso afecta esta toxina?. Explícalo en un esquema.
4. El atractilósido, un inhibidor de la translocasa ADP/ATP, bloquea la fosforilación
oxidativa en mitocondrias, en cambio, en partículas submitocondriales no tiene este
efecto. Por otro lado, los desacopladores, los inhibidores del transporte de electrones y
la oligomicina afectan a los dos sistemas. Explica estas observaciones
5. ¿Cabe esperar que el NADH añadido a una suspensión de particulas
submitocondriales se oxide?. Y si se añade citocromo c ¿se oxidaría?.
6. Una deficiencia en cobre en una célula puede causar una alteración en la fosforilación
oxidativa, ¿por qué?.
7. El tejido adiposo marrón es una forma de tejido adiposo que se encuentra en la parte
superior de la espalda de muchos animales jóvenes. Tienen mayor cantidad de
mitocondrias este tejido para la síntesis de ATP acoplada a la oxidación del NADH.
¿Cuál puede ser la función del tejido adiposo marrón?.
8. Si una suspensión de mitocondrias se incuba con un exceso de oxígeno, succinato y
fosfato inorgánico:
a. ¿Qué cambio se produciría si se añaden 2 mmoles de ADP?
b. ¿Qué pasaría si se añade 2,4-dinitrofenol inmediatamente despues de la adición de
ADP?.
c. Una vez consumido todo el ADP añadido, al cabo de un cierto tiempo despues de
añadir 2,4-dinitrofenol, resulta que hay 2 mmoles de ADP y, en cambio, nada de ATP.
¿Explícalo.
9 . ¿Cómo evolucionará el consumo de oxígeno y la síntesis de ATP en una suspensión
de mitocondrias despues de los siguientes tratamientos?:
a. adición de antimicina
b. adición de oligomicina
c. adición de atractilosido
d. adición de 2,4-dinitrofenol despues de cada uno de los tratamientos anteriores
e. rotura de las membranas por choque hipotónico
10. La adición de DCCD (diciclohexilcarbodiimida) a suspensiones de mitocondrias
disminuye la velocidad de síntesis de ATP y también la del transporte electrónico. Si
añadimos 2,4-dinitrofenol sólo se restablece el transporte de electrones. Explica estos
resultados.

11. El síndrome de Luft está causado, posiblemente, por una alteración de lapermeabilidad
de la membrana mitocondrial interna a los protones. Explicad los síntomas observados en
esta enfermedad: hipertermia, respiración aumentada y debilidad muscular.
12. Las subunidades c del componente F canal iónico a través de la membrana interna.
Cuando alguno de los residuos esenciales de glutámico o de aspártico de la subunidad c
reacciona con diciclohexilcarbodiimida (DCCD) la subunidad es incapaz de participar en
el transporte de H+.
a. ¿Cómo afectará el DCCD al transporte electrónico mitocondrial?
b. ¿Qué se podría esperar que pasara cuando se le añade un desacoplador (DNF) a las
mitocondrias tratadas con DCCD?.
c. ¿Cómo se vería afectada la síntesis de ATP en los casos anteriores?. Razona la respuesta.

PRÁCTICA Nº 08
DIGESTIÓN DE LIPIDOS: EMULSIFICACION DE LAS GRASAS Y ACCIÓN DE
LA LIPASA PANCREÁTICA.
I. INTRODUCCION:
Los lípidos ingeridos con los alimentos no sufren modificaciones en la boca, pues
la saliva carece de enzimas que actúan sobre ellos. Al llegar al duodeno se mezclan
con la bilis y el jugo pancreático iniciándose el ataque hidrolítico de la lipasa
pancreática, que es activada por las sales biliares. La acción combinada de la lipasa
pancreática, una isomerasa y la lipasa intestinal dan como resultados ácidos grasos
libres monoglicéridos y glicerol formas en que son absorbidas. Como la grasa
neutra original y los ácidos grasos son insolubles, en agua es necesario,
mecanismos que permitan su emulsificación y facilitan su digestión y absorción,
ello se logra en el intestino por la presencia de las sales biliares y ácidos biliares.
Contenidos en la bilis; que a causa del acentuado poder que tienen para disminuir la
tensión superficial de las soluciones, favorecen la emulsión ayudando en gran parte
a la digestión y absorción de las grasas en el intestino y probablemente por
combinaciones análogas, intervengan en la absorción de la colesterina, vitaminas
liposolubles y otras sustancias.
Objetivos:
1. Demostrar el efecto emulsificante de las sales biliares sobre las grasas.
2. Demostrar el efecto que tienen las sales biliares sobre la lipasa pancreática.
3. Demostrar la acción que tiene la lipasa pancreática sobre los triglicéridos
contenidos en el aceite vegetal.
4. Demostrar la presencia de lipasa en el extracto pancreático.
II. PROCEDIMIENTO:
COMPONENTES/TUBOS I II III IV
Aceite vegetal
Emulsión de aceite vegetal
Buffer fosfato 0.1 M pH 8.06.0
Solución de sales biliares
Solución de extracto pancreático
3.0
-
4.0
-
-
3.0
-
4.0
2.0
-
-
3.0
2.0
-
2.0
-
3.0
-
2.0
2.0
a) Agitar fuertemente los tubos Dejar en reposo. Observar los resultados.
b) Clocar al baño de agua a 37°C durante 30', agitando de vez en cuando.
c) Al finalizar el tiempo de incubación, retirar los tubos del baño y agregar a cada uno IV
gotas de fenolftaleína, mezclar bien y titular.
d) Titulación: De una pipeta graduada de 1 ml. Dejar caer gota a gota NaOH 0.1 N en el
fondo de cada tubo del sistema, hasta la aparición de un color rosado tenue. Anotar la

cantidad de NaOH gastado en cada uno de ellos. La actividad lipásica está dada por los
mililitros de NaOH 0.1 N gastados sustrayendo el blanco respectivo.
e) Anotar los resultados.
1ml NaOH 0.1 N ……………………………….0.0283 mg de acido oleico
TAREAS:
Esquematizar la emulsión, digestión y absorción de los diferentes lípidos
III.RESULTADOS

IV.DISCUSIÓN
V.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 09
DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS EN SUERO
I. INTRODUCCION:
Los triglicéridos son lípidos absorbidos en la dieta y también producidos en forma
endógena a partir de los carbohidratos. Su medición es importante en el diagnóstico
y manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen genético
o ser secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y disfunciones
endocrinas.. El aumento de triglicéridos se ha identificado como un factor de riesgo
en enfermedades ateroscleróticas.
Fundamento del Método
El esquema de la reacción es el siguiente :
Triglicéridos -----Lipasa-----> glicerol + ácidos grasos
Glicerol + ATP ---glicerolcinasa---> glicerol-1-P + ADP
Glicerol-1-P + O2 + H2O—GPD------>DHAP+ H2O2
2 H2O2 + 4-AF + fenol-----POD------> quinonimina roja + 4 H2O
II. REACTIVOS PROVISTOS
 Enzimas: viales con LPL, GK; GPO; POD; ATP y 4-AF.
 Standard: 200mg/dl
 Reactivo de Trigliceridos
III. PROCEDIMIENTO
a) Recolección: Previo ayuno de 12 a 14 horas. Obtener suero o plasma
b) Sustancias interferentes conocidas: la hemolisis intensa y la bilirrubina mayor
de 50 mg/ 1. produce resultados erróneos .
Métodos
En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D
(Desconocido), colocar
B S D
Muestra
Standard
Rvo de Trabjo
-
-
1.0 ml
--
10 ul
1.0 ml
10 ul
--
1.0 ml
 Incubar 15 minutos en baño de agua a 37 ° C. Luego leer en Espectrofotómetro a
505 nm. llevando a cero con el Blanco.
 El color de reacción final es estable 2 horas por lo que la absorbancia debe ser
leída dentro de ese lapso.
200mg/dl.
Tg = D x F F=-------------
S

Esquematizar el transporte y oxidación de triglicéridos
IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN
VII.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRÁCTICA Nº 10
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SANGRE
I. INTRODUCCION:
El colesterol es un compuesto típico de los organismos animales, pero en el reino
vegetal existen moléculas de estructura semejante. Se ha comprobado que son
precursores de la molécula del colesterol a partir de fragmentos pequeños, como el
acetato y aceto acetato. Las unidades de "isopreno" que proviene de éstos, son
elementos formadores importantes en animales y vegetales. En los vegetales estas
unidades se condensan y forman terpenos, carotenoides y caucho. En los animales
la condensación produce escualeno hidrocarburo no saturado precursor del
colesterol.
En el hombre el intestino es la fuente principal del colesterol del plasma, en éste se
encuentra en forma libre o combinada con ácidos grasos, en la forma de esteres del
colesterol 75 %, ambos en asociación con lipopr o teínas. Los tejidos extrahepáticos
sintetizan su propio colesterol pero hay un equilibrio importante entre el colesterol
del plasma y el de los tejidos en el ser humano.
En el hombre el colesterol plasmático total es de 150 -250 mg. por 100 mi.,
elevándose con la edad. La lesión hepática acentuada a menudo causa una
disminución en la concentración de colesterol incluyendo las fracciones libres y
esterificadas. Se encuentra en niveles elevados (hipercolesterolemia) en la
ateroesclerosis, de diabetes mellitus, en enfermedades obstructivas del árbol biliar,
en el hipotiroidismo.
II. REACTIVOS:
 Standard: sol. de colesterol 2 g/1.
 CHOD/POD: sol. de colesterol oxidasa (60 U/1) y peroxidasa (4000 U/1)
 Reactivo 4-AF.: sol. de 4-aminofenazona 25 mM en Buffers Tris 0.92 M.
Reactivo Fenol: sol. de fenol 55 mmol/L.
 Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, colocar en una probeta
50 partes de agua destilada, 5 partes de Reactivo de 4-AF, 5 partes de Reactivo
de Fenol y llevar a 100 partes con agua destilada. Agregar 2 partes de
CHOD/POD previamente homogenizadas. Mezclar por inversión, sin agitar.
Rotular y fechar.
 Pueden prepararse distintas cantidades respetando las proporciones. Se debe
agregar los reactivos según el orden y mezclar suavemente. Mantener en
refrigerador (2-10°C) y en frasco color caramelo es estable un mes a partir de la
fecha de su preparación.
III. PROCEDIMIENTO:
2. MÉTODO ENZIMÁTICO
Fundamento: El colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa
previa hidrólisis enzimática de los esteres mediante una lipasa de origen fungal.
El agua oxigenada en presencia de peroxidasa (POD; donador: hidrógeno-
peróxido óxidorreductasa); produce la copulación oxidativa del fenol con ía 4-

amino fenazona (4-AF) dando lugar a la formación del fenol con la 4-
aminofenazona(4-AF) y forma un cromógeno rojo-cereza con absorbancia
máxima a 505 nm. La reacción es :
Esteres de colesterol Lipasa ----> colesterol + ácidos grasos
Colesterol + O2 + H2O GOD ----> colester-3-ona + H2O2
2 H2O2 + 4-AF + fenol POD 4->(p-benzQquinona-monoimino)-fenazona+4H2O
Mezcla
Recolección: se debe obtener suero o plasma de la manera usual. También es
posible realizar la determinación en líquido cefalorraquídeo.
Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el uso
de Anticoagulante G de Wiener lab. para su obtención
Sustancias interferentes conocidas: los sueros o plasmas con hemolisis visible
o intensa producen valores falsamente aumentados.. En sueros hiperlipémicos
hay turbidez entonces diluir el volumen de reacción a 1/2 o a 1/3 con blanco de
reactivos y multiplicar el resultado por el factor de lución. No interferencias con
bilirrubina
Método
En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y P (Problema), colocar:
B S P
Estándar o Patrón - 10 ul. -
Muestra de Suero - - 10 ul.
Reactivo de Trabajo 1,0 ml 1,0 ml. 1,0 ml.
Incubar 15 minutos en baño de agua a 37 ° C. Luego leer en Espectrofotómetro a
505 nm. llevando a cero con el Blanco. El color de reacción final es estable 2
horas por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.
CÁLCULOS:
Colesterol g/1 = D x f. f = S
dlmg /200
VALORES NORMALES:
Hasta 150 mg/dl

1.-Esquematizar el transporte y regulación de la síntesis de colesterol
2.-Esquematizar el perfil lipídico y el factor de riesgo de infarto de una persona
normal.

IV.RESULTADOS
V.DISCUSIÓN
VI.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRACTICA Nº 11
DETERMINACIÓN DE UREA EN SANGRE
I. INTRODUCCION:
Es el principal producto final del catabolismo proteico y es excretado en la orina en
mayor cantidad que cualquier otra sustancia o sea que es la forma bajo la cual se
elimina por la orina la mayor parte del nitrógeno de las proteínas, dada su gran
difusibilidad puede decirse que se distribuye, salvo raras excepciones, en todos los
fluidos del organismo, manteniendo una concentración muy similar a la de la
sangre que es vehículo que la transporta. Su contenido y las variaciones normales
dependen de: a) el contenido proteico de la dieta y b) De la diuresis (la urea es un
diurético natural y ejerce efecto continuo sobre el flujo de la orina). Cualquier
alteración de la función renal origina un aumento en la concentración de la urea
sanguínea.
La urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico más importante en la
mayoría de los líquidos biológicos. En el hombre es el principal producto final del
metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a través
de los riñones.
Una elevación de la concentración sérica de urea? se interpreta generalmente como
una posible disfunción renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que
los valores séricos de urea se encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el
metabolismo proteico, por lo que cualquier alteración en estas variables se traducirá
en un cambio de la concentración de urea en suero.
La determinación de la urea se realiza por reacciones de descomposición: la urea
por acción de diversos agentes: calor, reactivos químicos (Ac. Nitroso) y enzimas,
es susceptible de descomponerse, originando la formación de ciertos compuestos
que se utilizan en su valoración. Así la enzima ureasa (que se encuentra en la soya)
acelera su conversión en carbonato de amonio. Se ha supuesto que la acción es de
carácter hidrolítico y se representa por:
CO(NH2)2 + UREASA 2 H2O ---> CO3 + (NH4)2
La presente práctica tiene como finalidad:
 Determinar las concentraciones séricas de la urea
 Evaluar e interpretar los resultados
II. REACTIVOS Y EQUIPOS:
 Reactivo 1: contiene fenol 532mM, niüoferricianuro de sodio 0,85 mM y
etilén-bis-ditiocarbamato manganoso 0,3 mM.
 Reactivo 2: contiene Hipoclorito de sodio concentrado 36,6 mM y p-
toluén sulfoncloramida 0,12 mM en Hidróxido de sodio 0,625 M.
 Standard : solución de urea 0.60 g /1. - Ureasa: Enzima.
 Espectrofotómetro RA-50* spcctronic 20, Refrigeradora.

III. PROCEDIMIENTO:
A) TÉCNICA EN SUERO O PLASMA
En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y P (Problema). Colocar una o
dos gotas de agua y agregar:
Tubos de ensayo B S P
Estándar -- 10 ul --
Suero o plasma -- -- 10 ul
Ureasa+ Reactivo 1 1 ml 1ml 1ml
Mezclar por agitación suave e incubar a 37°C por 5 minutos
Reactivo 2 1 ml 1ml 1 ml
Mezclar por agitación suave e incubar a 37°C por 5 minutos y leer a 570 nm
CÁLCULO DE LOS RESULTADOS
Suero o plasma: Urea ( g /l) = D x Factor Factor = 0,60 g /1
S
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma: los valores normales de urea entre 0,10 g/l -- 0,45 g/1.
Esquematizar las reacciones de transaminación, desaminación oxidativa y ciclo de la urea

IV.RESULTADOS
V.DISCUSIÓN
VII.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

PRACTICA Nº 12
DETERMINACIÓN DE ACIDO ÚRICO
I. INTRODUCCION:
El ácido úrico es el producto final del catabolismo de los núcleo-proteínas,
específicamente de los nucleósidos Adenosina y Guanosina compuestos que tienen
en su constitución a la Adenina y a la Guanina que son derivados púricos y que
representan las bases nitrogenadas púricas de los Ácidos ribonucleicos y
desoxirribonucleicos.
El ácido úrico, en solución acuosa se presenta bajo dos formas: Lactámica y
Lactímico, según se encuentra los carbones 2, 6 y 8 unidos a la función cetónica o
función alcohólica por migración de los hidrógenos a los grupos carboxilos
adyacentes, se piensa que estas formas estarían en equilibrio y que el predominio de
una sobre la otra depende de la concentración de los iones hidrógeno del medio, así
por ejemplo. Si la acidez aumenta, predomina la forma Lactámica; en cambio, la
forma Lactímica es más soluble a un pH 7.4 que la forma Lactámica, es así, que el
pH fisiológico el 9 % del contenido de ácido úrico del organismo está en forma de
urato de sodio.
Habitualmente la concentración de ácido úrico en suero varía de un individuo a otro
de acuerdo a diversos factores tales como: sexo, dieta, origen étnico, constitución
genética, embarazo. Los niveles anormales de ácido úrico en suero son índice de
desorden en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de defectos en su
eliminación.
Los valores normales en suero oscilan entre 2 A 4 mg. 5 pudiéndose encontrar
valores elevados en la gota, en enfermedades con grandes destrucciones de material
protoplasmático del tipo de la leucemias, al final de procesos infecciosos como la
pulmonía, en disminución de la función renal o después de la ingestión de
alimentos ricos en nucleoproteínas por ejemplo hígado, riñones.
Los niveles de ácido úrico en orina son en general un reflejo de la descomposición
de ácido nucleico endógeno y de la cantidad de purinas ingeridas en la dieta,
amenos que la hiperuricemia se deba a disminución de la eliminación de ácido
úrico, en genera! va acompañada de aumento de los niveles de ácido úrico en orina.
Normalmente se elimina 250 a 750 mg por 24 horas en una dieta media en purinas,
más de 1 gm. Por 24 horas con dieta rica en purinas.
En general los procedimientos empleados para el dosaje de ácido se agrupa en dos:
a) Enzimáticos: Cuando se utiliza la Uricasa (enzima específica para el ácido
úrico).
b) Químicos: Que a su vez pueden ser directos e indirectos. Se utiliza el de Folin
Denis.
El objetivo de la práctica es demostrar el catabolismo de las nucleoproteínas
medíante la determinación de ácido úrico en sangre.
II. REACTIVOS Y EQUIPOS:
 Standard: Sol. Ácido úrico 100 mg/1 - Uricasa: (UOD) mayor o igual a 3 U/1
 Reactivo 4-AF/POD contiene 100 U de POD, 12,5mM de Buífer fosfatos pH
7,3 y 3 mM de 4-AF.

III. PROCEDIMIENTO:
Método Enzimático: El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y
peróxido de hidrógeno. La reacción es la siguiente:
Ácido úrico -H O: + 2 H2O UOD alantoína + H2O 2 + CO2
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol POD quinonimina roja + 4 H2O
COMPONENTES/TUBOS B S P
Muestra (suero .0 plasma) 20ul
Standard 20ul
Reactivo de trabajo l.0ml l.0ml l.0ml
 Incubar 15 minutos en baño de agua a 37 ° C.
 Leer en el espectrofotómetro a 505 nm o fotocolorímetro con filtro verde (490 -530
nm) llevando a cero con el blanco. El color de reacción final es estable 45 minutos
por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.
CÁLCULOS:
100,0 mg/1
Ácido úrico mg/l= D x factor f = S
VALORES NORMALES
 Hombres : 25 a 60 mg/1 - Mujeres : 20 a 50 mg/1
Esquematizar la formación y regulación de ácido úrico.

IV.RESULTADOS
V.DISCUSIÓN
VI.CONCLUSIONES
VII.BIBLIOGRAFIA

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