Métodos laboratoriais utilizados para a detecção de resistência bacteriana aos antimicrobianos (ou antibióticos), tendo como foco, neste trabalho, os bacilos Gram-negativos.

1. Universidade Federal do Pará
Instituto de Ciências Biológicas
Faculdade de Biomedicina
Módulo: ACD I – Bacteriologia
Profª Dra. Antônia Vieira
Profª Msc. Jessylene Almeida
Dayse Minelle Paixão
Isis Liz Barbosa
João Marcos de Oliveira
Maria Silvana Lopes
Ritiane Caetano
Thayanne Macedo
Vivianne Araujo
Belém
2015
Métodos de detecção de resistência
bacteriana aos antimicrobianos em BGN
(cultura de vigilância epidemiológica)

2. Bactérias Gram-Negativas
Isis Liz

3. BGN não-fermentadores de glicose
→ Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter spp.
BGN fermentadores de glicose (Família
Enterobacteriaceae)
→ Carbapenemases (Klebsiella pneumoniae)
→ β-lactamases de espectro estendido – ESBL
(Escherichia coli)
→ β-lactamases AmpC adquiridas (Salmonella
entérica)
Bacilos Gram-Negativos
Isis Liz

4. Isis Liz

5. Isis Liz

6. → Detecção, prevenção e Orientação (profissionais
de saúde)
→ organizar e planejar serviços de saúde.
Passos para a investigação
1. Definição de caso.
2. Métodos de identificação.
3. Identificação da unidade acometida corretamente.
Vigilância epidemiológica
Isis Liz

7. • Intrínseca
• Adquirida
 Mutações
 Processos de recombinação genética
Transformação
Transdução
Conjugação
 Transposição
Mecanismos de resistência bacteriana
Thayanne

8. Interior da bactéria
Parede
Celular
Porina
Antibiótico
Antibióticos geralmente entram nas bactérias através de
canais protéicos (porinas) da parede celular de BGN
Diminuição da Permeabilidade
Thayanne

9. Interior da bactéria
Parede
Celular
Sítio Modificado
Antibiótico
Alteração estrutural do sítio de ação:
Ligação bloqueada
Com a mudança estrutural do alvo, o antibiótico perde a
capacidade de se ligar ao sítio.
Modificação do Sítio de Ação
Thayanne

10. Interior da bactéria
Parede
Celular
Porina
Antibiótico
Entrada Saída
Bomba Ativa
Bombas no interior da bactéria fazem com que, assim que o
antibiótico entra na célula, ele seja lançado para o meio
externo.
Thayanne
Bomba de Efluxo

11. Interior da bactéria
Parede
Celular
Antibiótico
Sítio de AçãoEnzima
Antibiótico
destruído
Antibiótico alterado,
Previne a ligação
As enzimas destroem ou modificam o antibiótico
Mecanismo enzimático
Thayanne

12. Os antibióticos são classificados de acordo
com o seu mecanismo de ação.
→ Inibição da síntese da parede celular
→ Inibição da síntese ou dano da membrana
citoplasmática
→ Alteração na síntese dos ácidos nucleicos
→ Inibição da síntese ribossômica
→ Alteração de metabolismos celulares
Classificação dos Antibióticos
Dayse

13. Beta-lactâmicos:
Há quatro subclasses de beta-lactâmicos:
→ As penicilinas → As cefalosporinas
→ Os carbapenems → Os monobactans
Classificação dos Antibióticos
Dayse

14. As bactérias possuem a capacidade de produzir
várias enzimas capazes de inibir a ação de inúmeros
fármacos, dentre essas enzimas destacam-se:
→ As beta-lactamases de espectro ampliado (ESBL);
→ As beta-lactamase cromossômicas (AmpC);
→ As metalo-beta-lactamases;
→ E as Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC).
Resistência aos antibióticos da classe dos
β-lactâmicos
Dayse

15. 1. Inibição por quelantes de
zinco (EDTA)
2. Comparar os halos de
inibição.
3. Difícil estabelecer provas
de determinação, pois as
provas com quelantes
poderiam não detectar todos
os tipos de MBL.
Figura 1. P. Aeruginosa sem
MBL.
Figura 2. P. aeruginosa com
produção de MBL.
Teste do EDTA
Fonte: Marchiaro.
Detecção de metalo β-lactamase
Maria Silvana

16. → Fitas Imipenem
→ Diluição em SF; incubar em placa de Agar N. S.
(escala de McFarland 0,5)
→ Inocular em 1:10 em placa de Agar Muller-Hinton
→ Critério de positividade
Redução  3.0 diluições 1:10 da bactéria. Inoculada
em A.M.H.
Fonte: Anderson. K.F, Detecção de CIM
por E-teste ® i isolado de K. Pneumoniae
com fita de E-teste de Imipenem em
A.M.H
Etest®
Detecção de produtoras de cabarpenemase
Maria Silvana

17. Fonte: Comitê Brasileiro de Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos: Orientações
do EUCAST
Teste de triagem para produção de ESBL
Maria Silvana

18. Fonte: Comitê Brasileiro de Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos: Orientações do EUCAST
Testes confirmatórios para ESBL em Enterobacteriaceae
que são positivos nos testes de triagem para ESBL
Maria Silvana

19. → Realizada com caldo Mueller-Hinton
→ Concentrações entre 0,25 e 512 mg/L (µg/ml), com e sem ácido
clavulânico.
→ Observar a CIM necessária para inibir o crescimento do
microrganismo.
diluições seriadas de razão 2 de cefalosporinas
(cefotaxima, ceftazidima e cefepima)
↓
Microdiluição em caldo
João Marcos

20. Fonte: ANVISA – Interpretação de dados microbiológicos - Métodos para TSA
Microdiluição em caldo
João Marcos

21. Quando a combinação de duas drogas
potencializa a atividade de ambas, temos um
sinergismo.
Perfil de sensibilidade
Adequar o uso dos medicamentos
Ao menos 2 substâncias com sensibilidade
comprovada in vitro.
Teste de Sinergismo
↓
↓
João Marcos

22. → Método de triagem para a detecção de ESBLs em enterobactérias;
→ Não sensibilidade aos β – lactâmicos de espectro estendido
(Azetreonam, cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima e Cefpodoxima).
Fonte: ANVISA
Teste de disco – difusão
(Método Kirby-Bauer)
Ritiane

23. → Teste confirmatório fenotípico por disco – difusão para a
detecção da enzima klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC).
→ Essa enzima hidrolisa vários β – lactâmicos, como os
carbapenêmicos.
Fonte: ANVISA
Teste de Hodge Modificado
Ritiane

24. → Teste confirmatório fenotípico por disco – difusão para a
detecção da enzima klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC).
→ Essa enzima hidrolisa vários β – lactâmicos, como os
carbapenêmicos.
Fonte: ANVISA
Teste de Hodge Modificado
Ritiane

25. Teste fenotípico de confirmação por disco – difusão
para a detecção da enzima β – Lactamase de Espectro
Estendido (ESBL) produzida pelas bactérias produtoras de
ESBL.
Fonte: ANVISA
Teste do disco combinado (TDC)
Ritiane

26. Principais genes de resistência antimicrobiana
e bactérias de importância médica:
→ bla(TEM1): E. coli
→ bla(TEM10): K. pneumoniae
→ bla(CTX-M): E. coli e K. pneumoniae
→ bla(KPC): K. pneumoniae e Salmonella spp.
Técnicas moleculares para detecção de
resistência a antimicrobianos
Vivianne

27. Fonte modificada de :Justin M. Cole et al. J. Clin. Microbiol. 2009;47:322-326
Real-time PCR ensaio para blaKPC
Vivianne

28. A detecção de bacilos Gram-negativos de
resistência a antimicrobianos é de grande
relevância, a fim de limitar sua disseminação e
contribuir para a redução dos índices de
morbidade e mortalidade da população. Assim,
ao realizamos cada técnica descrita, podemos
observar suas particularidades genotípicas e
fenotípicas, visando a construção de um perfil
epidemiológico de resistência para a busca de
alternativas para combater essas bactérias.
Conclusão

29. Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Nota técnica 01/2013. Medidas para identificação, prevenção e controle de
infecções relacionadas à assistência à saúde por microrganismos multiresistentes. Brasília: ANVISA, 2013.
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MENEGOL D.; PICOLI S. U; FERREIRA M. C. Pesquisa de beta-lactamase de espectro estendido (ESBL) em
enterobacteriaceae uropatogênicas isoladas em laboratório de Caxias do Sul. RBAC. 2012;44(2):97-100.
Comitê Brasileiro de Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos. Orientações do EUCAST para a detecção de
mecanismos de resistência e resistências específicas de importância clínica e/ou epidemiológica. Versão 1. BrCAST,
dezembro de 2013.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Módulo 2: Interpretação de dados microbiológicos; Módulo 5: Teste
de sensibilidade aos antimicrobianos. Brasília: ANVISA, 2008.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Manual de Microbiologia Clínica para o Controle de infecção
relacionada à Assistência à Saúde. Módulo 6: Detecção e identificação e bactérias de importância médica. 1º ed.
Brasília: ANVISA, 2010.
KONEMAN, E. W. et al. Diagnóstico Microbiológico, Texto e Atlas colorido. 5° Ed. Rio de Janeiro, Editora Medsi,
2001.
J. Clin. Microbiol. Development and Evaluation of a Real-Time PCR Assay for Detection of Klebsiella
pneumoniae Carbapenemase Genes. February 2009 vol. 47 no. 2 322-326
Referências Bibliográficas

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pneumoniae produtora de betalactamase de espectro estendido. Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina
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JUNIOR, S. A. M. et al. Betalactamases de Espectro Ampliado (ESBL): um Importante Mecanismo de Resistência
Bacteriana e sua Detecção no Laboratório Clínico. NewsLab, ed. 63, 2004.
Referências Bibliográficas