Cultivos fúngicos y Respuesta inmunitaria frente a Hongos patógenos.

1. Universidad Nacional Experimental
Francisco de Miranda
Área: Ciencias de la Salud
Unidad Curricular: Microbiología II
Profesor: Licdo. Jesus A. Nuñez P. Biólogo. MSc.
Santa Ana de Coro, mayo 2014
E-mail: janp.bio@gmail.com
PRACTICA NÚMERO 1: CULTIVOS
FÚNGICOS

2. carbohidratoscarbohidratos
ProteínasProteínas LípidosLípidos
AminoácidosAminoácidos

5. Su finalidadSu finalidad
Medios deMedios de
aislamientoaislamiento
MediosMedios
selectivosselectivos
selectivosselectivos
diferencialesdiferenciales
Utilizados para elUtilizados para el
aislamiento de levaislamiento de lev
agotamientoagotamiento
Permiten la recuperaciónPermiten la recuperación
de un hongo en especificode un hongo en especifico
con inhibición de otrocon inhibición de otro
Adición de ciloheximidaAdición de ciloheximida
inhibe alinhibe al AspergillusAspergillus
(hongo contaminante)(hongo contaminante)
Son aquellos conSon aquellos con
adición de un indicadoradición de un indicador
Los medios utilizados en Micología contiene nutrientes suficientes paraLos medios utilizados en Micología contiene nutrientes suficientes para
asegurar el desarrollo de hongos .asegurar el desarrollo de hongos .
pH ligeramente acido facilita crecimiento de hongos e inhibe a otros M.O.pH ligeramente acido facilita crecimiento de hongos e inhibe a otros M.O.

6. ENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS ENENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS EN
MICOLOGIA TENEMOS:MICOLOGIA TENEMOS:
ENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS ENENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS EN
MICOLOGIA TENEMOS:MICOLOGIA TENEMOS:
MEDIOMEDIO
SABOURAUDSABOURAUD
DEXTROSADEXTROSA
MEDIOMEDIO
SABOURAUDSABOURAUD
DEXTROSADEXTROSA
Contiene 2% de glucosaContiene 2% de glucosa
Ligeramente acidoLigeramente acido
Mantiene una amplia variedad de hongosMantiene una amplia variedad de hongos
No es un medio ideal para estudiar laNo es un medio ideal para estudiar la
esporulaciónesporulación
Indistintamente se utiliza en placas o tubos y seIndistintamente se utiliza en placas o tubos y se
les puede incorporar antibióticos (gentamicina yles puede incorporar antibióticos (gentamicina y
cloranfenicol)cloranfenicol)
Contiene 2% de glucosaContiene 2% de glucosa
Ligeramente acidoLigeramente acido
Mantiene una amplia variedad de hongosMantiene una amplia variedad de hongos
No es un medio ideal para estudiar laNo es un medio ideal para estudiar la
esporulaciónesporulación
Indistintamente se utiliza en placas o tubos y seIndistintamente se utiliza en placas o tubos y se
les puede incorporar antibióticos (gentamicina yles puede incorporar antibióticos (gentamicina y
cloranfenicol)cloranfenicol)

7. AGARAGAR
LACTRIMEL DELACTRIMEL DE
BORELLIBORELLI
 Se emplea para la producción deSe emplea para la producción de
pigmentos y la esporulación de lapigmentos y la esporulación de la
mayoría de los dermatofitosmayoría de los dermatofitos
Contiene: harina de trigo, lecheContiene: harina de trigo, leche
descremada en polvo, miel y ATB.descremada en polvo, miel y ATB.
Pueden cultivarse en tubos oPueden cultivarse en tubos o
placas. Placas mayor superficie peroplacas. Placas mayor superficie pero
mayor riesgo de contaminación.mayor riesgo de contaminación.

8. CONSIDERACIONESCONSIDERACIONES
Si la muestra procede de
zonas presuntamente
contaminadas
RECOMENDABLERECOMENDABLE colocar en medios
básicos sustancias inhibitorias
Manipular los tubos y
placas con
BIOSEGURIDAD?
Crecimiento de hongosCrecimiento de hongos
patógenospatógenos
Condiciones de
incubación
Hongos miceliales (Temp. Amb) y
Levaduras (2-4 dias)

9. Características
Macroscópicas
Características
Microscópicas
TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓNTÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN
COLOR
TAMAÑO DE LA COLONIA
ASPECTO
HONGO FILAMENTOSO / LEVADURIFORME
Aterciopelada, algodonosa, pulverulenta /cremosa
HIFAS
SEPTADAS
ASEPTADAS
PRODUCCIÓN
TAMAÑO
DISPOSICIÓN DE LAS CONIDIAS
HONGO FILAMENTOSO / LEVADURIFORME
OBSERVACIÓN DE BLASTOCONIDIAS,
SEUDOHIFAS Y CLAMIDOSPORAS

10. Preparación en fresco
Que se necesita?Que se necesita?
Un cultivo con
colonia aislada
Asa de siembra Azul de Lactofenol Porta y cubreobjetos
 Esterilizo el asa de siembra frente al
mechero
Selecciono la colonia (superficie)
Coloco en portaobjetos
Coloco cubreobjetos
Observo 40X.
BLASTOCONIDIAS, SEUDOHIFAS Y
CLAMIDOSPORAS

11. PRUEBAS DIAGNÓSTICAS DE
LABORATORIO
Citología
Cultivo
Examen microscópico
Pruebas cutáneas

12. MECANISMOS DE
DEFENSA FRENTE A
HONGOS PATOGENOS

13. INMUNIDAD
Protección contra enfermedad,
específicamente infecciosa.
Capacidad del organismo para
combatir de forma específica la
enfermedad infecciosa.
Sustancias extrañas (Ag)
M. O.
Proteínas
Polisacáridos
SISTEMA INMUNITARIO
Formado por células y
moléculas responsables de la
inmunidad.
RESPUESTA INMUNE
Consecuencia fisiológica
o patológica.

14. Barrera cutánea
Moco
Cilios respiratorios
Acido gástrico
 Antagonismo bacteriano
Lágrimas
 Reacción inflamatoria
Sistema de
complemento

TIPOS DE RESPUESTA
INMUNITARIA
Acción de los linfocitos T
(CD4+) Citoquinas:
(IL-1…..10),TNF, IFN
Acción de los linfocitos B
Anticuerpos
(Inmunoglobulinas)
INMUNIDAD NATURAL
(Inespecífica)
INMUNIDAD ADQUIRIDA
(Especifica)

15. MECANISMOS DE RESISTENCIA NATURAL A
HONGOS PATÓGENOS
Barreras físicas, mecánicas y químicas

16. Transferrina/Metaloproteina
DEFENSA QUÍMICA
Histoplasma capsulatum Candida albicansCryptococcus neoformans

17. Mecanismos de resistencia celular
EVASIÓN DE BARRERAS MECÁNICAS, FÍSICAS Y
QUÍMICAS
Defensas celulares comienzan a actuar
Leucocitos polimorfonucleares (PMNL)
Macrófagos
Monocitos
FAGOCÍTICAS
PROFESIONALES
CÉLULAS EFECTORAS
NO FAGOCÍTICAS
Asesinas naturales (NK)

18. TNF, IL2
RESPUESTA INMUNITARIA
CD4+
IL-12: IL-4

19. 1 . Capacidad de Adherencia a los tejidos (adhesinas)
2 . Penetración y multiplicación en los tejidos:
 Enzimas Proteolíticas: Proteasas, Lipasas, Fosfolipasas.
 Tropismo Celular.
 Capacidad de Multiplicarse a 37 ºC (dimorfismo)
FACTORES DEPENDIENTES DEL
HONGO

20. Agente Enfermedad Factor de virulencia Efecto
Aspergillus sp. Aspergilosis hidrofobinas Inhibición de la fagocitosis
Aspergillus sp. Aspergilosis pulmonar Gliotoxina
Alteran el movimiento ciliar y lesionan el epitelio de
vías respiratorias altas.
Dermatofitos Tiñas Queratinasas Destrucción del estrato córneo
Dermatofitos Ides Toxinas Hipersensibilidad
Cryptococcus Criptococosis Cápsula
Inhibición de respuesta inmune (impide migración de
células de la inmunidad y propiedades
antifagocíticas)
Cryptococcus Criptococosis Producción de melanina Anti-oxidante, resistencia a anfotericina B
Sporothrix spp.
Esporotricosis
linfangítica
Producción de melanina Inhibe la fagocitosis por macrófagos.
Mucorales Mucormicosis Ceto-reductasa
Degradan los cuerpos cetónicos presentes en sangre,
favoreciendo el crecimiento y diseminación del
hongo.
Malassezia spp.
Pitiriasis versicolor
hipocrómica
Ácidos dicarboxílicos
Inhibición de la tirosinasa y de la producción de
melanina conllevando una menor protección contra
los rayos UV y el establecimiento de agentes
microbianos dañinos.
Malassezia spp. Dermatitis seborréica Fosfolipasas
Destrucción de los ácidos grasos esenciales en la piel
causando sequedad
Coccidioides spp. Coccidioidiomicosis Elastasas Destruyen las fibras elásticas de los tejidos.
Algunos ejemplos de factores de virulencia
estudiados en hongos

21. INMUNOMODULACIÓN DE LOS MECANISMOS DE DEFENSA
DEL HUÉSPED
Cápsula
Biosíntesis de Melanina
Producción de
Toxinas
Matriz extracelular cementante

22. FACTORES DEPENDIENTES DEL HUESPED

23. OTRAS:
Carencias nutricionales
Quemaduras
Traumatismos extensos
Irradiaciones
Alcoholismo
Toxicomanía
Uso de prótesis
Catéteres
Tratamientos con:
antibióticos,
corticoesteroides,
radioterapia,
inmunosupresores
Edades extremas
ENFERMEDADES: oncohematológicas,
hepáticas, renales, diabetes, infecciones
virales
Genéticos Hormonales
Alteraciones
Metabólicas
Transplantes y
deficiencias
inmunes: HIV
FACTORES DE SUSCEPTIBILIDAD DEL
HUESPED

24. Onicomicosis. Micetoma.
Queilitis
Coccidioidomicosis.

25. INMUNODIAGNOSTICO DE LAS
MICOSIS

26. Hipersensi. Tipo I
Hipersensi. Tipo II
Hipersensi. TipoIII
Hipersensi. Tipo I
Hipersensi. Tipo II
Hipersensi. TipoIII
RETARDADA
Hipersensi. Tipo IV
RETARDADA
Hipersensi. Tipo IV
INMUNODIAGNOSTICO DE LAS MICOSIS
IDRIDR

27. INTRADERMOREACCIÓN
Reacción de hipersensibilidad retardada
Candidina
Esporotriquina
Histoplasmina
Paracoccidioidina
Coccidioidina
0.1 cc de antígenos
fúngicos
Vía intradermica
48 h
INMUNIDAD CELULAR

28. Estudios Epidemiológicos
Orientación Diagnóstica
Seguimiento del curso de la enfermedad
INMUNIDAD CELULAR

29. 1 1
2 2 2
3 3 3
4 4 4
5 5 5
666
1
Diagrama para Inmunodifusión Doble con sueros de referencia . 1,4: Suero
control positivo para el antígeno a evaluar. 2,3,5 y 6: Suero de paciente. O
antígeno a evaluar.
INMUNIDAD HUMORAL

30. Suero P
Ag Pb
Anti Pb
Prueba de inmunodifusión doblePrueba de inmunodifusión doble
INMUNIDAD HUMORAL

31. Suero
Problema
Suero
Control

32. Interpretación de las Pruebas de
Inmunodiagnóstico Micológico

33. ESTUDIO
MICOLÓGICO
IDR IDD RESULTADO
Directo y cultivo:
POSITIVO
Positivo:
Estuvo en contacto con el hongo
Positivo:
Presenta anticuerpos precipitantes frente
a los antígenos fúngicos
Presenta la enfermedad
Directo y cultivo:
Positivo
Negativo:
No estuvo en contacto con el hongo o se
encuentra en estado anérgico
(inmunosuprimido).
Positivo:
Presenta anticuerpos frente a los
antígenos fúngicos
Presenta la enfermedad
Directo y cultivo:
Positivo
Positivo:
Estuvo en contacto con el hogo
Negativo:
No presenta anticuerpos frente a los
antígenos fúngicos
Estuvo expuesto al hongo. Presenta la
micosis puesto que se hizo la observación
microscópica del hongo y aislamiento del
mismo en el medio de cultivo
Directo y cultivo:
Negativo
Positivo:
Estuvo en contacto con el hogo
Negativo:
No presenta anticuerpos frente a los
antígenos fúngicos
Estuvo expuesto al hongo más no
presenta la enfermedad.
Directo y cultivo:
Negativo
Negativo:
No estuvo en contacto con el hongo o se
encuentra en estado anérgico
(inmunosuprimido).
Negativo:
No presenta anticuerpos frente a los
antígenos fúngicos
El paciente puede:
1.No presentar enfermedad micótica.
2.Estar inmunosuprimido y presentar
enfermedad por otro agente.
CORRELACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LA IDR E IDD EN EL
INMUNODIAGNÓSTICO MICOLÓGICO.

34. Hasta la próxima clase y no se olviden de revisar
el portal web!!!!!