Grupo:
Ana Paula Miranda
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Lívia Villela
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Objetivos
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induzida por AG através da ativação do gene
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Microarranjo
• Identificação de SPL, que codifica um fator
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• Confirmação da indução de SPL pela atividade
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Gene Repórter GUS
• Avaliar se o sítio de ligação de AG (detectado na
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Comparação do padrão de
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SPL e Microesporogênese
• Ag-1 mutant / 35S::SPL-GR
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SPL e Microesporogênese
• Com a expressão ectópica de SPL-GR, a formação de
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Conclusões
• Proteínas homeóticas florais controlam genes alvo
com diversas funções no desenvolvimento dos
órgãos;
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Mads box - Biotec Vegetal

  1. 1. Grupo: Ana Paula Miranda Fernanda Azevedo Lívia Villela Renata Toledo
  2. 2. Click to edit the outline text format  Second Outline Level − Third Outline Level  Fourth Outline Level − Fifth Outline Level − Sixth Outline Level − Seventh Outline Level − Eighth Outline Level − Ninth Outline Level Introdução A família de genes MADS-box codifica fatores transcricionais que controlam vários processos em angiospermas, da raiz até o desenvolvimento de flores e frutos. Em Arabidopsis, o gene AG (AGAMOUS) codifica fatores transcricionais responsáveis pelo desenvolvimento do 3º e 4º vertilos florais.
  3. 3. Objetivos • Demonstração que a Microesporogênese é induzida por AG através da ativação do gene SPL, um regulador da Esporogênese. • SPL pode induzir a Microesporogênese na ausência da função de AG.
  4. 4. ag-1 35S::AG-GR • ag-1-null / 35S::AG-GR • Sem tratamento / DEX contínuo / DEX único Fenótipo mutante Sépatala- pétala –pétala Estames e Carpelos funcionais – flores 35S::AG Pétalas com estruturas estaminóides
  5. 5. ag-1 35S::AG-GR • ag-1-null / 35S::AG-GR • A maior parte das pétalas produzidas no 3º verticilo possuem lóculos nas laterais contendo grãos de pólen aparentemente normais.
  6. 6. Microarranjo • Identificação de SPL, que codifica um fator transcricional putativo. Sua atividade implica no padrão de formação de óvulos e nos primórdios da microesporogênese. • Em mutantes de spl, a diferenciação primária de células esporogênicas, assim como a formação das paredes das anteras, são bloqueadas.
  7. 7. RT-PCR • Confirmação da indução de SPL pela atividade de AG. D - DEX M - Mock C - Ciclohexamida
  8. 8. Indução Direta • O domínio MADS reconhece a sequência especifica [CC(A/T)6GG], denominada CArG-box, na região regulatória dos seus genes alvo. • EMSA
  9. 9. Gene Repórter GUS • Avaliar se o sítio de ligação de AG (detectado na região 3´) é necessário para indução AG-dependente de SPL. • Plantas selvagens com SPL-GUS.
  10. 10. Comparação do padrão de expressão de AG e SPL
  11. 11. Expressão de SPL em ag-mutants
  12. 12. SPL e Microesporogênese • Ag-1 mutant / 35S::SPL-GR • Sem tratamento / DEX contínuo Mesmo padrão de Single DEX ag-1 35S::AG-GR Fenótipo AG-mutant * ausência da atividade de AG, supondo que SPL age como um mediador central par
  13. 13. SPL e Microesporogênese • Com a expressão ectópica de SPL-GR, a formação de lóculos foi observada em ag1-mutants apenas nas laterais dos orgãos do 3º vertilo. Nunca no 2º das flores tratadas com DEX. • Outro fator verticilo-específico deve estar envolvido na indução da microesporogênese.
  14. 14. Conclusões • Proteínas homeóticas florais controlam genes alvo com diversas funções no desenvolvimento dos órgãos; • A interação de AG com SPL mostra uma probabilidade de que AG ative outros reguladores que realizam parte de suas funções; • Evidências diretas de que genes homeóticos de plantas controlam a organogênese como parte de sua hierarquia regulatória.

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