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DIAGNÓSTICO DE
LABORATORIO
Condiciones para el crecimiento microbiano
Medios de cultivo

agua
fuente de energía

Nutrientes

Crecimiento

fuentes de C, N, otros
elementos
micronutrientes,
factores de crecimiento

temperatura

Condiciones
de cultivo

pH
luz
aireación

actividad de agua
potencial redox
Diagnóstico

Investigaciones

Clínico

No microbiológicas
Tomar correctamente
Rotular y embalar adecuadamente
Almacenar y transportar correctamente

No teñidos o teñidos
con Gram u otra
tinción
Característica de colonia, morfología,
hemólisis, pigmento, etc.

Por difusión en
discos

o MIC

Serología

Tecnologías
de DNA
Medios de
Cultivo
• Uno de los sistemas más importantes para la
identificación de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio.

INTRODUCCIÓN
Temperatura

Grado de
humedad

Presión de
oxígeno

Alcalinidad

Acidez
Solidificante

Licúa agua
hirviendo

Solidifica a
40°
Medios de
Cultivo
• Los medios de cultivo son mezclas de substancias
nutritivas que se combinan para favorecer el
crecimiento, aislamiento e identificación de
microorganismos.

Medio de
Cultivo
Cultivo

• Material alimenticio en el que
crecen los microorganismo.
• Crecimiento de
microorganismos
Artificial

Líquida

Semisólida

Solida

Nutrientes
En un estudio bacteriológico in-vitro se demostró que
con una sola aplicación de campos magnéticos naturales a través de la
mano del Doctor Wilhelm "Willy" Frinta durante 10 minutos y a una
distancia de 1 1/2 pulgada sobre un recipiente de petri con agar sangre,
hubo una inhibición de crecimiento de gérmenes, (estreptococo,
estafilococos)

CONTROL

ESTUDIO

Dato Interesante
CLASIFICACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
BASÁNDOSE EN SU
COMPOSICIÓN QUÍMICA
Fuente de C, N

Sales suplen
iones

Estimuladores
del crecimiento

Concentraciones
conocidas
siempre!

A. Medios Sintéticos
Extracto de
levadura, peptona,
infusión de cerebro,
extracto de carne.

Nutrientes en
abundancia

Sin saber con
exactitud la
composición

“Composición
indefinida”

B. Medios Complejos
Complejos

Aditivos
adicionales

Sangre, suero

Microorganismos
exigentes

Extractos de
tejidos de
animales y
plantas

C. Medios de
Enriquecimiento
Microorganismo
en particular

A partir de
población mixta

+ cristal violeta:
inhibe los
Gram+

CO2: Fuente de
C para
autótrofos

Maltosa: solo
usen maltosa

D. Medios selectivos
Facilitan
discriminación
de
microorganismos

Propiedades
diferenciales

Mc Conkey:
lactosa + /
lactosa-

E. Medios
diferenciales

Agar sangre:
hemolíticos / no
hemolíticos
No son rápidos:
muerte rápida
de células

+ glucosa:
producen
ácidos

No se usa!!

F. Medios de
mantenimiento

Acidifique el
medio
Agar-Agar
Propósitos
generales

Poco exigentes

Análisis de
alimentos, agua

Poca importancia
sanitaria

Agar Nutritivo
Características del medio: ámbar claro a
medio ligeramente opalescente.

• No contiene inhibidores del desarrollo
bacteriano.
• La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrógeno para el desarrollo bacteriano.

Xanthomonas campestris
• Medio para propósitos generales
• Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el
aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y
anaerobios nutricionalmente exigentes
• Como para la observación de reacciones de hemólisis.

También, este medio de cultivo, puede utilizarse
como medio base para preparar el medio agar
chocolate.

Base Agar Gelosa Sangre
Infusión de
músculo de
corazón y la
peptona: alto
valor nutritivo

Fundamento
Agregado de
sangre:
detectar
hemolisis

El cloruro de
sodio
mantiene el
balance
osmótico.
• Medio preparado: ámbar.
• Medio preparado con 5%
de sangre de carnero: rojo
cereza.

Características del
Medios
• Aislamiento selectivo de bacilos
Gramnegativos de rápido desarrollo
• Escasas exigencias nutricionales.
• Permite el desarrollo de todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae.

E.M.B. Agar
Muchas cepas de
Escherichia coli y
Citrobacterspp. =
característico brillo
metálico.

Las cepas que
utilizan la lactosa =
centro oscuro con
periferia azulada o
rosada

Las que no lo hacen
= incoloras.

Fundamento
E. Coli

Klebsiella

Shigella
Proteus

Enteroccocus

Salmonela
•
•
•
•

Bacilos Gramnegativos de fácil desarrollo
Aerobios y anaerobios facultativos
Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa
Muestras clínicas, de agua y alimentos.

Mac Conkey Agar
sales biliares

disminuye el
pH alrededor
de la colonia.

Los no
fermentadores
de lactosa
producen
colonias
incoloras

Lactosa

Peptonas

Fundamento

el indicador
de pH rojo
neutro
• Base a:
• La producción de
pigmentos.
• La fermentación de
manitol.
• La hidrólisis de
gelatina.
• A partir de alimentos y
otras muestras.

Estafilococo 110 Agar
El extracto de
levadura y la tripteína
aportan los nutrientes
para el desarrollo de
microorganismos.

La gelatina es el
sustrato de la enzima
gelatinasa.

La lactosa y el
manitol son los
hidratos de carbono
fermentables.

El cloruro de Na:
inhibir el desarrollo
de la flora
acompañante excepto
Staphylococcusspp.

Fundamento
cambio de color del
indicador del medio en
la zona de crecimiento
bacteriano.
Prueba positiva
El medio sin desarrollo
de microorganismos
permanece sin cambio.

1-Fermentación de
manitol

Prueba negativa

Resultados

No hay diferencias de
color entre las zonas de
crecimiento bacteriano
y la zona sin inocular.
Positiva

Halo transparente
alrededor de las
colonias

Negativa

Ausencia de halo
transparente
alrededor de las
colonias

2. Hidrólisis de la
gelatina
Estafilococos

Muestras clínicas
Alimentos
Productos cosméticos

Cultivo de especies
halófilas de Vibrio

Especies pueden no
desarrollar

Sal y Manitol Agar
Producen ácidos:
Color rojo al
amarillo.

Los estafilococos
coagulasa (N):
colonias rodeadas
de una zona roja o
púrpura.

Cloruro de Na:
agente selectivo que
inhibe el desarrollo
de la flora
acompañante.

Los estafilococos
coagulasa (P): zona
amarilla brillante.

Rojo fenol:
indicador de pH.

Fundamentos
Características del medio
Medio preparado: rojo
Aureus

Epidermidis

Saprophyticcus
Aislamiento de salmonella y shigella
Alimentos

Heces

Salmonella Shigella Agar
Selectividad: Sales biliares y verde
brillante
Diferencial:
fermentación lactosa;
prod. acido sulfhídrico
No lactosa:
transparente

Acido
Sulfhídrico:
Negro

Fundamentos

Lactosa: rojo
Características del medio
Medio preparado: rojo naranja.

A. Klebsiella pneumoniae. Acid + Lac +
B. B. Escherichia coli.Acid + Lac +
C: Salmonellasp.. H2S
D: Proteus mirabilis H2S
E: Pseudomona aeruginosa
Universal para la
prueba de
sensibilidad a los
antimicrobianos.

Es útil con el
agregado de sangre

Muller Hinton
Agar
Cultivo y aislamiento

microorganismos
nutricionalmente
exigentes
Mayoría Crecen

Suplementa con sangre
de carnero al 5%

Clinical and
Laboratory Standards
Institute (CLSI)

Inhibidores de
sulfonamidas,
trimetoprima y
tetraciclina

Pruebas de sensibilidad
a los antimicrobianos
en especies de
estreptococos

Fundamento
•

Chromobacterium violaceum

Streptococcus pyogenes

Pseudomona aeruginosa

Características del medio
Aerobias/Anaerobias

Líquido

Exigentes/ difícil
desarrollo

20Ul de Penicilina y
100μg/ml de
amicacina: hongos

Cerebro Corazón Infusión
Cerebro de
ternera, corazón
vacuno y la
peptona
La glucosa
El cloruro de
sodio

• Carbono
• Nitrógeno
• Vitaminas

• Hidrato de Carbono fermentable
• Balance osmótico

20Ul de Penicilina
• Hongos patógenos
y 100μg/ml de
amicacina

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