Determinación de Urea en laboratorio. Metabolismo de la Urea, Método aplicado en laboratorio, etc.

1. Nitrógeno
ureico
(BUN)
Nombre: Daniela Troncoso A
Bioquímica clínica II
Sección 1

2. Objetivo
 Comprender la fisiopatología del analito (BUN).
 Cuantificación del analito (BUN)en el laboratorio.
 Análisis de los resultados.

3. Introducción
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La mayor parte del cuerpo está conformada por agua.
Riñón
Nefrones
Metabolitos tóxicos: amoníaco, urea y compuestos nitrogenados

4. Orina
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Se filtran 125 mL de agua.
El volumen normal de orina (adulto) 400 a 2,000 mL.
El volumen de orina puede variar en pacientes con:
- Poliuria
volumen urinario (2,5 L/24 horas en adultos)
- Oliguria
volumen urinario (200 mL/24 horas en adultos)

5. Urea
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Producto del metabolismo proteico, sintetizada en el hígado.
Principal compuesto de desechos nitrogenado de la orina.
Su peso molecular 60 KDa.
El 90% se elimina por filtración glomerular y luego se reabsorbe el
40 – 70% en el túbulo proximal acompañando al agua.

6. Metabolismo de la Urea
Carbamoil fosfato sintetasa I
(Cataliza la condensación)
Ornitina – transcarbamoilasa
(transfiere G. Carbamoilo)
Arginasa I (hidroliza)
la Arginina para
formar Urea y
Ornitina
Argininosuccinato (se hidroliza)
Formando Arginina y fumarato
Citrulina (se condensa)
con Aspartato formando
Arginio succinato a traves
de Argininosuccinato –
sintetasa

7. Alteraciones en el ciclo de la urea

Alteraciones genéticas enzimas: - Carbamoil Fosfato Sintetasa I
- Ornitina transcarbamoilasa
- N –acetil glutamato sintetasa
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A.R
Crom X
Acumulación (eliminación de urea a través de los riñones)
Patogenia
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Acumulación de nitrógeno  Neurotóxico  Hiperamonemia Muerte.
Encefalopatías  exceso de amonio  causar alteraciones osmóticas y
de neurotransmisores.
El amonio junto con la glutamina–sintetasa  glutamina  edema
cerebral.
Neuronas, el amoniaco  inhibe la transmisión sináptica.
Amonio  estimula el transporte de triptófano al cerebro y la síntesis de
serotonina, alterando la neurotransmisión serotoninérgica.

8. Neurotóxico

9. BUN (Utilidad Clínica)
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Se ha empleado el término BUN o nitrógeno ureico sanguíneo
para referirse a la urea.
La urea se puede determinar en suero, plasma u orina.
Midiendo la cantidad (concentración) de urea o nitrógeno
ureico presente en la sangre
Indicador no específico de la función renal
Junto con la creatinina son las dos pruebas más usadas para
evaluar la función renal.
Determinación secuencial de los niveles de urea en sangre es
útil para el seguimiento de un proceso renal
Diagnóstico diferencial de: prerrenal, renal y posrenal.

10. Clínica
Insuficiencia renal aguda: Alteración brusca del funcionamiento del riñón
con rápida reducción del filtrado glomerular.
- Niveles de creatinina y urea plasmática.
- Acidosis metabólica e hiperpotasemia.


Urea en sangre se denomina Azoemia, puede ser provocado por IR o
ingesta aumentada de proteínas.
Urea sérica se puede deber a ingesta proteica baja, enfermedades
hepáticas severas.

11. Clínica
La insuficiencia renal aguda puede ser:
 Prerrenal: Hemorragias, pérdidas gastrointestinales, urinarias o cutáneas
excesivas, insuficiencia cardiaca o por obstrucción de la arteria renal.

Renal: Necrosis de células tubulares por isquemia o toxicidad, inflamación glomerular o lesión
intersticial.

Posrenal: Obstrucción del aparato renal por cálculo renal o carcinoma de próstata.

12. Valores de referencia

13. Metodología y Técnica
Pointe Scientific

14. Método Ureasa – GLDH
•Ureasa cataliza la hidrólisis urea  amoniaco y dioxido de carbono.
•Amoníaco liberado reacciona  alfa-cetoglutarato en presencia de NADH  Produce
glutamato, por acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH)
•NADH se oxida  NAD+
Absorbancia (340 nm) disminuye lo que es directamente proporcional a la concentración de
nitrógeno de urea en la muestra.

15. Reactivos
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Reactivos líquidos listos para usar
Almacenamiento de reactivos: 2 – 8 °C
Precauciones
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Solo para diagnostico In vitro.
Evitar ingesta de reactivo.
Reacciones explosivas.
Manual "Bioseguridad en laboratorios Microbiológicos y Biomédicos“
Materiales necesarios pero no suministrados
Controles, Calibrador, Analizador, Manuales de aplicaciones e
instrumentos, Agua desionizada.

16. Recogida y almacenamiento de muestras
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Se recomienda suero.
No usar plasma que contengan anticoagulantes.
La muestra debe estar libre de amoniaco y metales pesados.
La urea en suero es estable durante 72 horas refrigeradas a 2 - 8 ° C.
*Sueros sin refrigeración se debe utilizar dentro de las 8 horas.
Interferencias
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Acción de la ureasa es inhibida por fluoruro.
Niveles de amoníaco anormales dan resultados falsamente elevados de BUN
Bilirrubina al nivel de 20 mg/dl  (<2%)
Hemoglobina al nivel de 200 mg/dl  (<5%)
Limitaciones
 Las muestras que den valores superiores a 150mg/dl deben ser diluidas con 0,9% salino (1:1),
volviendo a medirla y el resultado debe ser multiplicado por 2.
 Si se encontró resultado de control fuera de rango, el procedimiento debe ser recalibrado.

17. Programación del método (Equipo Urit)
Tipo de ensayo
Cinético de 2 ptos
Longitud de onda
340 nm
Unidad
Mg/dl
Volumen de muestra
3 uL
Volumen R1
Volumen R2
300 uL
60 uL
Calibración
1 pto (lineal)
Linealidad
0 – 150 uL
Concentración Top kal
43,1 mg/dl
Tiempo de lectura
60 seg

18. Control de calidad

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
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Sueros de control BUN normales y anormales conocidos.
Procesarse al menos en cada turno de trabajo.
Cada laboratorio debe establecer su propia frecuencia de
determinación control.
Cada laboratorio debe establecer su propio rango de referencia.
Ensayo rango: 0 – 150mg/dl

19. Controles

Lote: N1 – 14191
N2 – 14192
Control
Promedio
Rango
Control N1
15 mg/dl
12 – 18 mg/dl
Control N2
47,7 mg/dl
38,2 – 57,3 mg/dl

20. Desempeño analítico

Coeficiente de variación analítico del fabricante
- Intraserie/ Within Run
- Interserie/ Run to Run

Coeficiente de variación biológico
CV w (Intra)
12,3
CVg (Inter)
18,3
Impresición (I)
6,2 %
Inexactitud (Bias)
5,5 %
Error total 95%
15,7 %

21. Run Nivel 1
Corrida
Resultados
Día 1
13,3
18,1
Promedio T
DS
CV
16,0
2,4
15,4
15,5
1,8
11,8
15,9
0,1
0,9
18,4
0,9
5,1
16,3
3,3
20,6
16,8
Día 2
15,1
17,5
13,9
Día 3
15,8
16,1
15,9
Día 4
17,5
19,4
18,4
Día 5
14,8
14,0
20,2

22. Run Nivel 2
Corrida
Resultados
Día 1
51,1
52,2
Promedio T
DS
CV
48,4
5,6
11,6
46,3
7,5
16,1
44,4
4,1
9,2
45,2
6,9
15,2
49,7
5,7
11,5
42,0
Día 2
53,3
47,2
38,3
Día 3
44,3
40,3
48,5
Día 4
39,8
53,1
42,8
Día 5
48,4
44,8
56,1

23. Run Nivel 1

Repetibilidad:
 Promedio :16,4 mg/dl
 DS
:1,7
 CV
:10,7 %

Precisión Intermedia:
 Promedio :16,4 mg/dl
 DS
:2,0
 CV
:12,5 %
Veracidad: 11,05 – 21,8 mg/dl
Promedio Biorad: 14,9 mg/dl
-Es veraz.
Run nivel 2
 Repetibilidad:
 Promedio
:46,8 mg/dl
 DS
:5,9
 CV
:12,7 %

Precisión Intermedia:
 Promedio
:46,8 mg/dl
 DS
:5.5
 CV
:11,8%
Veracidad: 31,3 – 62,3 mg/dl
Promedio Biorad: 46,4 mg/dl
-Es veraz.

24. Cómo se calcula BUN


25. Discusión



El método de referencia para Urea
No se ocupa (Reacción nessrelizacion) ni (Reactivo de Berthelot)
Para equipos automatizados se utiliza el método ureasa/GLDH
Mas especificidad, rapidez y precisión.

26. Conclusión




La determinación de BUN en sangre es importante
También se hace la determinación de creatinina que acompaña a
BUN
Son técnicas de bajo costo para el paciente, bastante rápida y simple
Su resultado orienta al médico a solicitar otros exámenes más
específicos para determinar el origen del daño.

27. Bibliografía





Pesce, Amadeo; Kaplan, Lawrence. Química clínica “Métodos”.
España: Editorial Panamericana. 1991
Hernández, Álvaro. Principios de Bioquímica clínica y Patología
molecular. España: Elsevier. 2010.
Marshall, William; Bangert, Stephen; Lapsley, Marta. Bioquímica
Clínica. España: Elsevier Mosby. 2012.
Lépez, Macarena; López, Edison; Quiroga, Guillermo. Guía de trabajos
práctico. Bioquímica Clínica II. 2013.
Hitachi Urea Nitrogen (BUN) Reagent Set. Pointe Scientific, INC.
Recuperado de
http://www.pointescientific.com/uploads/inserts/HB752-01-1362.pdf
en octubre de 2013.